מאמר שיטה
* These authors contributed equally
הסתיידות כלי הדם היא מנבא חשוב ותורם למחלות לב וכלי דם בבני אדם. פרוטוקול זה מתאר שיטות להשראת הסתיידות של תאי שריר חלק בכלי הדם הראשוניים המתורבתים ולכימות הסתיידות ועומס מקרופאגים באבי העורקים של בעלי חיים באמצעות הדמיה פלואורסצנטית קרובה לאינפרא אדום.
מחלות לב וכלי דם הן הגורם המוביל לתחלואה ותמותה בעולם. פלאק טרשת עורקים, המורכב ממקרופאגים עמוסי שומנים והסתיידות, מתפתח בעורקים הכליליים, במסתם אבי העורקים, באבי העורקים ובעורקי הצינור ההיקפיים ומהווים את סימן ההיכר של מחלות לב וכלי דם. בבני אדם, הדמיה עם טומוגרפיה ממוחשבת מאפשרת כימות של הסתיידות כלי הדם; נוכחות של הסתיידות כלי דם היא מנבא חזק לאירועים קרדיווסקולריים עתידיים. פיתוח טיפולים חדשניים במחלות לב וכלי דם מסתמך באופן קריטי על שיפור ההבנה שלנו של המנגנונים המולקולריים הבסיסיים של טרשת עורקים. קידום הידע שלנו על מנגנונים טרשת עורקים מסתמך על מודלים מבוססי עכברים ותאים. כאן, מפורטת שיטה להדמיית הסתיידות אבי העורקים וחדירת מקרופאגים באמצעות שתי בדיקות הדמיה פלואורסצנטיות קרובות לאינפרא אדום נפרדות מבחינה ספקטרלית. הדמיה פלואורסצנטית קרובה לאינפרא אדום מאפשרת כימות ex vivo של הסתיידות והצטברות מקרופאגים בכל אבי העורקים וניתן להשתמש בה כדי לקדם את הבנתנו את הקשר המכניסטי בין דלקת להסתיידות בטרשת עורקים. בנוסף, מתוארת שיטה לבידוד וטיפוח תאי שריר חלק בכלי הדם של אבי העורקים של בעלי חיים ופרוטוקול להשראת הסתיידות בתאי שריר חלק מתורבתים מאבי העורקים של העכברים או מעורקים כליליים אנושיים. ניתן להשתמש בשיטה זו של מידול הסתיידות כלי דם כדי לזהות ולאפיין את מסלולי האיתות החשובים ככל הנראה להתפתחות מחלות כלי דם, בתקווה לגלות מטרות חדשות לטיפול.
מחלות לב וכלי דם הוא הגורם לתחלואה ותמותה המובילות בעולם, כולל ארצות הברית, שם היא מהווה מעל 780,000 מקרי מוות בשנה. 1 הסתיידות עורקים כליליים הסתיידות העורקים הם מסימני ההיכר של טרשת עורקים ולשמש מנבאים חזקים של אירועים קרדיווסקולריים. 2- 4 שני סוגים עיקריים של הסתיידות כלי הדם דווחו במבוגרים: הסתיידות intimal, הקשורים טרשת עורקים, המדיאלי (הידוע גם בשם Mönckeberg) הסתיידות, הקשורים למחלת כליות כרונית וסוכרת 5 הסתיידות intimal מתרחשת על רקע של הצטברות שומנים מקרופאג. החדרתם בדפנות כלי הדם. 5,6 הסתיידות הקיר המדיאלי מתרחשת באופן עצמאי של הסתיידות intimal, לוקליזציה לסיבי האלסטין או תא....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כל המחקרים שנעשו בעכברים בוצעו בהתאם קפדנית עם ההמלצות מדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה של המכון הלאומי לבריאות בארה"ב. שיכון כל הנהלים הקשורים עכברים המתוארים במחקר זה אושרו על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדיים השתמש ועדות של החולים הכללי במסצ'וסטס (ועדת המשנה על מחקר טיפול בבעלי חיים). כל הנהלים בוצעו בזהירות כדי למזער את הסבל.
1. הכנת ריאגנטים
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הסתיידות עורקים ב MGP - / - ו עכברי-בר נמדדה באמצעות הדמיה של קרינת NIR סידן. אין אות NIR סידן זוהתה aortas מעכברי wild-type, המציינת את עדר ההסתיידות (איור 2). אות NIR סידן חזקה זוהתה aortas מעכברי MGP המחסר, אשר עולה בקנה אחד עם הסתיידות כלי דם מתקדמת. קטעי aortas הרקמות של wild-type ו MGP - / - עכברים הוכתמו 25 אדום Alizarin (איור 3 א - ב), המאשר את הסתיידות כלי .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הסתיידות העורקים היא גורם סיכון חשוב למחלות לב וכלי דם בבני אדם ועשויים לתרום ישירות בפתוגנזה של אירועים קרדיווסקולריים. 1,5,52 בתצהיר סידן intimal ב כיפה סיבית דקה של מחלת טרשת עורקים הוצע להגדיל מתח ביומכנית המקומי ולתרום קרע פלאק. 53,54 משפיע הסתיידות המדיאלי התוצאות הקליניות על ידי הגדלת קשיות העורקים, מה שיכול לגרום להיפרטרופיה לב להשפיע על תפקוד הלב. 55 לכן, הבנת המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס הסתיידות כלי הדם יספק תובנות חשובות מחלות אנ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בית החולים הכללי של מסצ'וסטס הגיש בקשה לפטנטים הקשורים למעכבי מולקולות קטנות של קולטני BMP מסוג I ויישום ALK3-Fc לטיפול בטרשת עורקים והסתיידות כלי דם, ו-MD, PBY, KDB ו-RM עשויים להיות זכאים לתמלוגים.
עבודה זו נתמכה על ידי הקרן לחקר הלב וכלי הדם של סרנוף (MFB ו-TET), המכון הרפואי הווארד יוז (TM), פרס מלגת הזיכרון של לאדו מבית הספר לרפואה של הרווארד (DKR), תוכנית START של הפקולטה לרפואה ב-RWTH אאכן (MD), קרן המחקר הגרמנית (DE 1685/1-1, MD), המכון הלאומי לעיניים (R01EY022746, ESB), קרן לדוק (תוכנית רב-תחומית להבהרת תפקידו של איתות חלבון מורפוגנטי בעצם בפתוגנזה של מחלות כלי דם ריאתיות ומערכתיות, PBY, KDB ו-DBB), המכון הלאומי לדלקת מפרקים ומחלות שרירים ושלד ועור (R01AR057374, PBY), המכון הלאומי לסוכרת ומחלות עיכול וכליות (R01DK082971, KDB ו-DBB), פרס עמית לפקולטה של איגוד הלב האמריקאי #11FTF7290032 (RM), והמכון הלאומי ללב, ריאות ודם (R01HL114805 ו-R01HL109506, EA; K0....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| צינור חרוטי 15 מ"ל | Falcon | 352096 | |
| 30 גרם מחט | BD | 305106 | |
| נוגדן אקטין שריר חלק אלפא | סיגמא | SAB2500963 | |
| שקופית תא | Nunc Lab-Tek | 154461 | |
| קולגנאז, סוג 2 | וורת'ינגטון | LS004176 | |
| דקסמתזון | סיגמא | D4902 | |
| Modified Eagle Medium Life Technologies של Dulbecco | 11965-084 | ||
| תמיסת מלח פוספט חוצץ של Dulbecco, ללא סידן | Gibco | 14190-144 | |
| Elastase | Sigma | E1250 | |
| סרום בקר עוברי | Gibco | 16000-044 | |
| מלקחיים, מלקחיים Roboz | RS-4972 | ||
| , עקומה מלאה משוננת | Roboz | RS-5138 | |
| פורמלין (10%) | Electron Microscopy Sciences | 15740 | |
| תמיסת המלח המאוזנת של האנק | Gibco | 14025-092 | |
| תאי שריר חלק בעורק הכלילי האנושי | PromoCell | C-12511 | |
| מזרק אינסולין עם מחט | Terumo | SS30M2913 | |
| חומצה L-אסקורבית | Sigma | A-7506 | |
| מספריים קפיציים מיקרו-חיתוך (13 מ"מ) | Roboz | RS-5676 | |
| מספריים קפיציים מיקרו-חיתוך (3 מ"מ) | Roboz | RS-5610 | |
| NIR, קטפסין (ProSense-750EX) | Perkin Elmer | NEV10001EX | |
| NIRאוסטיאוגני (OsteoSense-680EX) | פרקין אלמר | NEV10020EX | |
| תמיסת מלח רגילה | Hospira | 0409-4888-10 | |
| גרעינית מהירה אדום | Sigma-Aldrich | N3020 | |
| Odyssey | Li-Cor | Odyssey 3.0 | |
| פניצילין/סטרפטומיצין | קורנינג | 30-001-CI | |
| כסף חנקתי (5%) | Ricca Chemical Company | 6828-16 | |
| נתרן פוספט דו-בסיסי הפטהידראט | סיגמא-אולדריץ' | S-9390 | |
| נתרן תיוסולפט | סיגמא | S-1648 | |
| ß-גליצרופוספט דיסודיום מלח הידרט | סיגמא | G9422 | |
| בקבוק תרבית רקמות, 25 ס"מ2 | Fal | 353108 | |
| תרבית רקמות צלחת (35 מ"מ x 10 מ"מ) | פלקון | 353001 | |
| צלחת תרבית רקמות, שש בארות | פלקון | 353046 | |
| טריפסין | קורנינג | 25-053-CI | |
| מחזיק מכרסמים | Kent Scientific | RSTR551 | |
| מערכת סינון מונעת ואקום | Millipore | SCGP00525 |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה
בקש הרשאה