פיתוח מודל תלת-ממדי מבוסס משי מבוסס קולגן של רקמה עצבית מקוטבת

הנח פיגומי משי נקבוביים בצורת סופגנייה ומצופים פולי-D-ליזין בצלחת מרובת בארות.

הוסף מצע תרבית כדי להרטיב את הפיגומים, מה שמקל על חיבור התאים.

שאפו עודפי מדיה. זרעו את הפיגומים בתרחיף תאים עצביים ודגרו.

המשטח המצופה ונקבוביות הפיגום מספקים שטח פנים גדול לחיבור תאים בצפיפות גבוהה ומאפשרים דיפוזיה יעילה של חומרים מזינים ופסולת.

הסר את התאים הלא מחוברים והוסף קולגן, חלבון מטריצה חוץ-תאית.

דגירה לפילמור קולגן. תהליך זה מטמיע את התאים בתוך מטריצה תלת מימדית דמוית ג'ל על הפיגום הנקבובי.

הוסף מדיה. תרבית, והחלף באופן קבוע מחצית מאמצעי התרבות כדי לחדש את החומרים המזינים מבלי להפריע לתאים.

בתוך התרבית, גופי התאים העצביים נשארים מעוגנים לפיגום המשי בעוד האקסונים גדלים דרך מטריצת הקולגן, ויוצרים רשתות אקסונליות תלת מימדיות.

גוף התא הממודר הזה ולוקליזציה אקסונלית מביאים להיווצרות מודל תלת מימד של רקמה עצבית מקוטבת דמוית מוח.

בתוך מכסה המנוע של תרבית תאים, הניחו זוג מלקחיים מעוקרים, אמצעי תרבית תאים ואת הפיגומים שעברו חיטוי. מוציאים צלחת של 96 בארות מהעטיפה שלה ומניחים בפנים. כדי לזרוע את הפיגומים, ראשית, הניחו פיגום סטרילי אחד לכל באר בצלחת 96 הבארות. הוסף מדיום תרבית תאים כדי לטבול את הפיגומים, ודגירה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס בחממת תרבית רקמה כדי לאזן אותם למשך 30 דקות לפחות.

לאחר הדגירה, שאפו את המדיום העודף מהפיגומים. לאחר מכן, הוסף 2 כפול 10 ל-6 תאי העצב בקליפת המוח של החולדה ב-100 מיקרוליטר של מדיום נוירו-בסיסי לכל פיגום. מחזירים את הצלחת לחממה, ומשאירים למשך הלילה כדי לאפשר לתאים להיצמד לפיגום. למחרת בבוקר, שאפו בזהירות את התאים הלא מחוברים, והחליפו ב -200 מיקרוליטר של מדיום תרבית תאים טרי. דגירה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס לתקופה קצרה.

לאחר מכן, שאפו את המדיום מהבארות. בעזרת מלקחיים סטריליים, העבירו את הפיגומים המכילים תאים לבארות ריקות של צלחת 96 הבארות. לאחר מכן לכל פיגום, הוסף 100 מיקרוליטר של 3 מיליגרם מדולל טרי קר כקרח לתמיסת קולגן זנב עכברוש.

החזירו את התאים לאינקובטור של 37 מעלות צלזיוס כדי לאפשר פילמור של קולגן למשך 30 דקות. מוציאים את הצלחת מהחממה ומוסיפים 100 מיקרוליטר של מדיום תרבית תאים מחומם מראש לבאר. החזירו את הצלחת לחממה לתקופת צמיחת התאים הרצויה, והחליפו מחצית מהמדיום מכל באר במדיום טרי כל יום עד שבוע.