היצרות כרונית של העצב Sciatic ואת רגישות יתר לכאב בדיקה אצל חולדות

המטרה הכללית של הליך זה היא לבצע היצרות כרונית ופגיעה של העצב הסיאטי, מודל נפוץ במכרסמים לכאב נוירופתי, ולמדוד באופן כמותי את התנהגויות הכאב הנובעות מכך. דבר זה מושג תחילה על ידי הצבת ארבעה קשרי תפירה ממעי כרומי (chromic gut ligatures) סביב העצב הסיאטי החשוף בגובה אמצע הירך, כדי ליצור פגיעת היצרות בעצב הסיאטי. לאחר מכן, מנטרים התנהגויות כאב בכף הרגל האחורית בנקודות זמן רצויות על ידי מדידה כמותית של סף הנסיגה של כף הרגל לגירוי מכני באמצעות מוני von fray ומדידת זמן השהיית הנסיגה של כף הרגל לגירוי תרמי באמצעות מד אנלגזיה פלנטרי (plantar analgesia meter).

בסופו של דבר, ניתן להשיג תוצאות המראות על קיומה של כאב מכני ותרמי, ועל רגישות-יתר של כף הרגל האחורית הפגועה, באמצעות מדידה של תגובות נסיגה שניתן לעורר באמצעות גירויים מכניים ותרמיים כאחד. שיטה זו לפגיעה בעצב הפריפרי, שפותחה לראשונה על ידי bene ו-Z, יכולה לסייע במענה לשאלות מפתח בתחום הכאב הכרוני, כגון מהם המנגנונים הפריפריים והמרכזיים שבאמצעותם נוצר כאב נוירופתי. ההשלכות של טכניקה זו משתרעות על טיפול בכאב נוירופתי, מכיוון שמותג זה מספק את הבסיס לבחינת אסטרטגיות חדשניות להפחתת רגישות-יתר לכאב.

באופן כללי, אנשים שאינם מיומנים בשיטה זו יתקשו בביצועה, כיוון שהנחתת תפרי המעי מסוג cmic סביב העצב הסטטי והשגת מידת הידוק מתאימה שתגרום לפגיעה עצבית מספיקה אך לא מופרזת הן מאתגרות במיוחד. כדי להתחיל בפרוצדורה זו, חטה את משטח העבודה הכירורגי ב-70% ethanol והכן את המכשירים הסטריליים, הגזה, הסיכות והשפשפים, שעברו אוטוקלביזציה מראש. לאחר מכן, הרדם את החולדה בתא השראה באמצעות 5% ISO fluorine.

הזרים 2% ISO fluorine אל החולדה באמצעות מסכת פנים בהתאמה אישית במהלך הניתוח. לאחר מכן, גלח את הרגל האחורית השמאלית של החולדה, ואז הנח את בעל החיים על מחשב חימום בוויסות תרמי בטמפרטורה של 37 °C. מרח משחה אופתלמית סיכוך על העיניים.

לאחר מכן, הכין את תפרי המעי הכרומי על ידי חיתוכם לחלקים קטנים באורך של כ-שלושה סנטימטרים, ושקוע אותם בתמיסת סלין סטרילית. לאחר מכן, סטריליז את האזור הגזור באמצעות שלושה יישומים לסירוגין של אלכוהול ותמיסת יוד. כאשר בעל החיים שוכב על בית החזה, הרם את רגלו האחורית השמאלית והחזק את ה-femur בזווית של 90 מעלות לעמוד השדרה, בעזרת סרט הדבקה על כף הרגל.

לאחר מכן, בצעו חתך בעור כ-3 עד 4 מילימטרים מתחת לעצם הירך (femur). הפרדו את העור מהשריר שסביב החתך על ידי חיתוך של הרקמה החיבורית. השתמשו במספריים קהים כדי לחתוך את הרקמה החיבורית שבין שריר ה-gluteus superficialis לשריר ה-biceps fems.

בשלב הבא, השתמשו במרחיב (retractor) כדי להגדיל את המרווח בין שני השרירים על מנת לאפשר ראייה ברורה של עצב ה-sciatic, ולאחר מכן השתמשו בפינצטה ובמספרי מיקרו כדי לשחרר בעדינות כ-10 millimeters של עצב ה-sciatic מרקמת החיבור שמסביבו. קשרו את הליגטורה הראשונה פרוקסימלית לטריפורקציה (trifurcation) של עצב ה-sciatic עבור כל ליגטורה. התחילו בלולאה בודדת ורפויה.

לאחר מכן, אחוזו בשני הקצוות קרוב ללולאה ומשכו עד שהלולאה תהיה הדוקה במידה מינימלית והליגטורה לא תחליק לאורך העצב. לאחר מכן, החזיקו את הלולאה במיקומה הנכון והניחו לולאה שנייה מעל הלולאה הראשונה להשלמת הקשר. לאחר מכן, גזרו את הקצוות החופשיים של הליגטורה כך שתוּשארה היגבב של מילימטר אחד סביב העצב, כאשר המהדקות של העצב תהיה מינימלית.

חזור על השלבים עבור שלושת הקשירות הנותרות, על ידי קשירת כל קשירה נוספת מילימטר אחד פרוקסימלית יותר מהקודמת. כמו כן, תוך שמירה על היצמצום המינימלי בסיום הניתוח, השתמש בתפרים לסגירת שכבת השריר ובסיכות להיסגירת העור. לאחר מכן, השתמש בתמיסת יוד כדי לעקר את הפצע.

עקבו מקרוב אחר בעל החיים במהלך תקופת ההתאוששות מההרדמה, ואפשרו לו להתאושש בכלוב נפרד עם מצע נייר שטוח. לפני תחילת הניסוי, טפלו בבעל החיים מדי יום במשך מספר ימים.

לאחר מכן, לפני הבדיקה ההתנהגותית, הרגילו את החולדה בכלוב. יש לשמור על סביבת הבדיקה שקטה ובשליטה מלאה, עם רמות טמפרטורה ולחות קבועות, ויש לבצע כל סשן בדיקה בשעה דומה של היום. כדי לבחון את סף הנסיגה המכני ביום הבדיקה, הכניסו את החולדה לכלוב הבדיקה בעל רצפת הרשת המוגבהת 15 עד 30 דקות לפני הניסוי; באמצעות מכשיר von fray פלנטרי דינמי, מקמו את יחידת ממריץ המגע עם הסיב ישירות מתחת למרכז כף הרגל האחורית ולחצו על מקש ההפעלה (start).

פעולה זו מרימה את הסיב כדי להמריץ באופן מכני את שטח כף הרגל האחורית בכוח גדל. לאחר מכן, רשום את סף הנסיגה המכני משתי כפות הרגליים האחוריות, הפגועה והלא פגועה. מכשיר זה רושם ומציג באופן אוטומטי את הכוח המקסימלי שהופעל בעת תגובת הנסיגה.

חזור על הגירוי המכני שלוש פעמים במרווח של כחמש דקות בין הגירויים, ובדוק את כפות הרגליים האחוריות הבלתי פגועות בסדר מאוזן (counterbalanced), ולאחר מכן חשב את הממוצע של ספיגי משיכת כף הרגל. כדי לבחון את השהיית משיכה תרמית ביום הבדיקה, הנח את החולדה על רצפת הזכוכית של כלוב הבדיקה 15 עד 30 דקות לפני הניסוי. באמצעות מכשיר לאנלגזיה של כף הרגל (thermal planter analgesia), מקם את מקור האינפרא-אדום ישירות מתחת למשטח מרכזי של כף הרגל האחורית ולחץ על מקש ההפעלה.

פעולה זו חושפת את כף הרגל האחורית של בעל החיים לקרן של חום קרינה דרך משטח זכוכית שקוף. לאחר מכן, רשמו את זמן השהייה עד לנסיגה (withdrawal latency) משתי כפות הרגליים האחוריות, הפגועה והלא פגועה. מכשיר זה רושם באופן אוטומטי את הזמן שחל מתחילת הגירוי התרמי ועד לנסיגת כף הרגל ממקור החום.

חזרו על גירוי החום לפחות שלוש פעמים, בהפסקות של כחמש דקות בין הגירויים, תוך בדיקת כפות הרגליים האחוריות הפגועות והבלתי פגועות בסדר מאוזן, ולאחר מכן חשבו את הממוצע של זמני השהייה עד לנסיגת כף הרגל. כאן מוצג סף הנסיגה המכני בשתי כפות הרגליים, הפגועה והבלתי פגועה, של חולדות Wistar לפני ועד 12 ימים לאחר הידוק כרוני של העצב הסיאטי. קיימת ירידה משמעותית בסף הנסיגה של כף הרגל לגירויים מכניים בכף הרגל האחורית האיפסילטרלית הפגועה בהשוואה לכף הרגל האחורית הקונטרלטראלית הבלתי פגועה. מוצג כאן זמן השהייה לנסיגה תרמית בשתי כפות הרגליים, הפגועה והבלתי פגועה, לפני ועד 12 ימים לאחר הידוק כרוני של העצב הסיאטי.

באופן דומה, זמן התגובה לנסיגה תרמית קצר משמעותית בכף הרגל האחורית הפגועה בצד הפגוע (ipsilateral) בהשוואה לכף הרגל האחורית הבריאה בצד הנגדי (contralateral). לאחר רכישת מיומנות, ניתן לבצע את ניתוח ה-CCI תוך 20 דקות בלבד לכל חיה, מה שמוביל לרגישות מוגברת לכאב בטווח ארוך בכף הרגל האחורית. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור לקשור את הליגטורות באופן רפוי, שכן החניקה העצמית תחת הליגטורות בעקבות בצקת היא שגורמת להיצרות לאחר התפתחותה.

טכניקה זו של פגיעה בעצב פריפריאלי בשילוב עם בדיקה של גל P של רגישות יתר לכאב, מאפשרת לחוקרים בתחום הכאב הנוירופתי לחקור את המנגנונים העומדים בבסיס כאב כרוני הנובע מפגיעה עצבית.