נוקאאוט מותנה של ביטוי גנים בשורות תאים סרטן ללמוד הגיוס של Monocytes/מקרופאגים כדי Microenvironment הגידול

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא לנצל את ההפלגה המותנית של ביטוי גנים בתאי סרטן כדי לחקור את הגיוס של מונוציטים ומקרופאגים למיקרו-סביבת הגידול במבחנה. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום המיקרו-סביבה של הגידול לגבי אופי הצלב בין תאי הסרטן לתאי מערכת החיסון. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהמערכת המשמשת כאן דורשת שיבוט וקטורי יחיד, מאפשרת יצירה מהירה של שיבוטים מרובים ומציגה רמות עובי נמוכות מאוד.

כמו כן הודגמה שיטה לטיהור מונוציטים אנושיים ללא מגע ישיר עם נוגדנים המונעת הפעלה מקרית וכתוצאה מכך יותר מ-95% אוכלוסייה טהורה של מונוציטים אנושיים. כדי לייצר חלקיקים נגיפיים, העבירו 70% צלחות 150 מילימטר של תאי HEK-293 עם 25 מיקרוגרם של pLKO-tet-on shRNA, 25 מיקרוגרם של פלסמיד אריזת psPAX וחמישה מיקרוגרם של פלסמיד pMD2 המבטא מעטפת. G באמצעות מגיב טרנספקציה לפי פרוטוקולים סטנדרטיים.