Name: חקר שיחות צולבות של תאי אנדותל שומן/אדיפוציטים ברקמת שומן תת-עורית אנושית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-05T14:35:00.000+00:00
Duration: 6 min 35 s
Description: חקור את האינטראקציה בין תאי אנדותל מיקרו-וסקולריים לתאי שומן ברקמת שומן תת-עורית אנושית. שיטה זו מאפשרת חקר מנגנוני מחלות קרדיו-מטבוליות בדגם תרבית משותף.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>SATMVECs אנושיים: בידוד ומחקרי אדיפוציט קרוס-טוק

<ol><li>Bierhansl, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+role+of+metabolism+in+endothelial+cell+function+and+vascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology%22%5BJournal%5D)">Central role of metabolism in endothelial cell function and vascular disease.</a> Physiology. 32 (2), 126-140 (2017).</li>
<li>Aird, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Med%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell heterogeneity.</a> Cold Spring Harb Perspect Med. 2 (1), a006429(2012).</li>
<li>Rajendran, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vascular+endothelium+and+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">The vascular endothelium and human diseases.</a> Int J Biol Sci. 9 (10), 1057-1069 (2013).</li>
<li>Brown, O. I., Bridge, K., Kearney, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nicotinamide+adenine+dinucleotide+phosphate+oxidases+in+glucose+homeostasis+and+diabetes-related+endothelial+cell+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidases in glucose homeostasis and diabetes-related endothelial cell dysfunction.</a> Cells. 10 (9), 2315(2021).</li>
<li>Luk, C., Haywood, N. J., Bridge, K. I., Kearney, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paracrine+role+of+the+endothelium+in+metabolic+homeostasis+in+health+and+nutrient+excess%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">Paracrine role of the endothelium in metabolic homeostasis in health and nutrient excess.</a> Front Cardiovasc Med. 26 (9), 882923(2022).</li>
<li>Click-iT EdU Imaging Kits. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2Fmp10338.pdf">https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2Fmp10338.pdf</a> (2024).</li>
<li>Bouïs, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelium+in+vitro%3A+A+review+of+human+vascular+endothelial+cell+lines+for+blood+vessel-related+research%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Endothelium in vitro: A review of human vascular endothelial cell lines for blood vessel-related research.</a> Angiogenesis. 4 (2), 91-102 (2001).</li>
<li>Ades, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HMEC-1%3A+establishment+of+an+immortalized+human+microvascular+endothelial+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">HMEC-1: establishment of an immortalized human microvascular endothelial cell line.</a> J Invest Dermatol. 99 (6), 683-690 (1992).</li>
<li>Chi, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+diversity+revealed+by+global+expression+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell diversity revealed by global expression profiling.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100 (19), 10623-10628 (2003).</li>
<li>Brignole, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((213+ESC+Guidelines+on+cardiac+pacing+and+cardiac+resynchronization+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Heart+J%22%5BJournal%5D)">213 ESC Guidelines on cardiac pacing and cardiac resynchronization therapy.</a> Eur Heart J. 34 (29), 2281-2329 (2013).</li>
<li>Greenspon, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trends+in+permanent+pacemaker+implantation+in+the+United+States+from+1993+to+2009%3A+Increasing+complexity+of+patients+and+procedures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Trends in permanent pacemaker implantation in the United States from 1993 to 2009: Increasing complexity of patients and procedures.</a> J Am Coll Cardiol. 60 (16), 1540-1545 (2012).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Prioritized+Research+Agenda+for+Prevention+and+Control+of+Noncommunicable+Diseases%22">Prioritized Research Agenda for Prevention and Control of Noncommunicable Diseases</a>. Mendis, S. A., Alwan, A. , World Health Organization. Geneva. (2011).</li>
<li>Brown, O. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+among+diabetes%2C+obesity%2C+and+cardiovascular+disease+phenotypes%3A+A+UK+biobank+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Relationship among diabetes, obesity, and cardiovascular disease phenotypes: A UK biobank cohort study.</a> Diabetes Care. 46 (8), 1531-1540 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>170L CO2 Incubator</td><td>GS Biotech</td><td>170G-014</td><td></td></tr><tr><td>2-NBDG (2-(N-(7-Nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)Amino)-2-deoxyglucose)</td><td>Invitrogen</td><td>N13195</td><td></td></tr><tr><td>4% PARAFIX מאגר היסטולוגי קיבוע</td><td>VWR כימיקלים</td><td>PRC/R/38/1</td><td></td></tr><tr><td>Akt (tAkt) Rabbit&nbsp; 1:1000</td><td>טכנולוגיית איתות תאים</td><td>9272</td><td></td></tr><tr><td>BD Venflon Pro Safety 14 גרם x 45 מ"מ, כתום, 50/pk</td><td>Medisave</td><td>393230</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת אלבומין סרום בקר, 7.5%</td> <td>Merck</td><td>A8412-100ML</td><td></td></tr><tr><td>CD144&nbsp;( VE-Cadherin) נוגדן, אנטי אנושי, PE, REAfinity</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-118-495</td><td></td></tr><tr><td>CD31 נוגדן, אנטי אנושי, PerCP-Vio 700, REAfinity</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-110-811</td><td></td></tr><tr><td>CD31 MicroBead Kit, אנושי, 1 ערכה</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-935</td><td></td></tr><tr><td>CD45 נוגדן, אנטי אנושי, FITC, REAfinity</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-110-769</td><td></td></tr><tr><td>מיצוי תאים מאגר</td><td>Invitrogen</td><td>FNN0011</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה 5804 R</td><td>Eppendorf</td><td>5805000060</td><td></td></tr><tr><td>Click-iT EdU ערכת התפשטות תאים להדמיה, Alexa Fluor 488 צבע</td><td>Invitrogen</td><td>C10337</td><td>ערכת הדמיה של התפשטות תאים</td></tr><tr><td>קולגנאז / דיספאז, 500 מ"ג</td><td>Roche / Merck</td><td>11097113001</td><td></td></tr><tr><td>Corning Matrigel Growth Factor מופחת (GFR) מטריצת קרום הבסיס</td><td>קורנינג&nbsp;</td><td>354230</td><td>קרנינג מטריצת ממברנה מרתף</td></tr><tr><td>100 מ"מ קורנינג צלחת תרבית מטופלת TC</td><td>&nbsp;</td><td></td><td></td>430167</tr><tr><td>Costar 24 בארות צלחות מרובות שטופלו ב-TC, עטופות בנפרד,</td><td>קורנינג סטרילי&nbsp;</td><td>3526</td><td></td></tr><tr><td>Costar 6 בארות שקופות TC צלחות מרובות, עטופות בנפרד,</td><td>קורנינג סטרילי&nbsp;</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>CytoFLEX S &ndash; 4 זרימה בלייזר ציטומטר</td><td>בקמן</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ערכת הסרת תאים מתים</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-101</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco & prime; s פוספט חוצץ מלח</td><td>Merck</td><td>D8537-500ML</td><td></td></tr><tr><td>EASYstrainer מסננת תאים לצינורות 50 מ"ל, 70 ומיקרו; m רשת, כחול, סטרילי, 50/pk</td><td>גריינר Bio-One</td><td>542070</td><td></td></tr><tr><td>גידול תאי אנדותל בינוני MV</td><td>PromoCell</td><td>C-22020</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf מבחנות מיקרו נעילה בטוחה Merck</td><td></td><td>EP0030120094</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת חומצה אתילנדיאמינטטראצטית</td><td>Merck</td><td>E8008-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 24 Well TC-מטופל בתא פוליסטירן חדיר תמיכה צלחת נלווית, עם מכסה, סטרילי, 1/חבילה, 50/מארז</td><td>Appleton Woods</td><td>CF537</td><td></td></tr><tr><td>Falcon תמיכה חדירה לצלחת 24 בארות עם 0.4 ומיקרו; m קרום PET שקוף, סטרילי, 1/חבילה, 48/מארז</td><td>Appleton Woods</td><td>CF521</td><td></td></tr><tr><td>הקפאה בינונית Cryo-SFM</td><td>PromoCell</td><td>C-29912</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת ג'לטין, 2% במים</td><td>Merck</td><td>G1393-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Gibco Antibiotic-Antimycotic (100x), 100 מ"ל</td><td>Fisher Scientific</td><td>11570486</td><td></td></tr><tr><td>Gibco TrypLE Select Enzyme (1x), ללא פנול אדום</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td>12563029</tr><tr><td>הנקס אנד פריים; תמיסת מלח מאוזנת</td><td>Merck</td><td>H6648-500ML</td><td></td></tr><tr><td>תאי קדם-אדיפוציטים תת עוריים אנושיים</td><td>Lonza</td><td>PT-5020</td><td></td></tr><tr><td>Incucyte ZOOM</td><td>Essen BioScience</td><td></td><td>מערכת ניתוח תאים חיים</td></tr><tr><td>תמיסת אינסולין אנושית</td><td>Merck</td><td>I9278-5ML</td><td></td></tr><tr><td>עמודות LS, 25/pk</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>MACS MultiStand</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>MACS פתרון אחסון רקמות</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-100-008</td><td></td></tr><tr><td>MACSmix Tube Rotator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-753</td><td>Tube Rotator</td></tr><tr><td>MS Columns, 25/pk</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>NuPAGE 4&ndash; 12% ביס-טריס ג'ל</td><td>Invitrogen</td><td>NP0322BOX</td><td></td></tr><tr><td>מפריד OctoMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-109</td><td></td></tr><tr><td>PGM-2 Preadipocyte Growth Medium-2 BulletKit</td><td></td><td>Lonza PT-8002</td><td></td></tr><tr><td>Phospho (Ser1177) eNOS Rabbit 1:1000</td><td>טכנולוגיית איתות תאים</td><td>9570</td><td></td></tr><tr><td>Phospho-Akt (Ser473) Rabbit&nbsp; 1:1000</td><td>טכנולוגיית</td> <td>איתות תאים4060</td><td></td></tr><tr><td>מסנני הפרדה מוקדמת 30 ומיקרו; m, 50/pk</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-041-407</td><td></td></tr><tr><td>Propidium Iodide (PI)/RNase תמיסת צביעה</td><td>טכנולוגיית איתות תאים</td><td>4087</td><td></td></tr><tr><td>מפריד QuadroMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-976</td><td></td></tr><tr><td>אזמל חד פעמי בסגנון סטרילי 10</td><td>VWRI</td><td>501</td><td></td></tr><tr><td>צינור מכסה בורג, 15 מ"ל, (Lx&Oslash;): 120 x 17 מ"מ, PP, עם הדפס</td><td>Sarstetd</td><td>62.554.502</td><td></td></tr><tr><td>צינור מכסה בורג, 50 מ"ל, (Lx&Oslash;): 114 x 28 מ"מ, PP, עם הדפס</td><td>Sarstedt</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>צינור מכסה בורג, 50 מ"ל, (Lx&Oslash;): 114 x 28 מ"מ, PP, עם הדפס</td><td>Sarstetd</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>סה"כ עכבר eNOS 1:1000</td><td>BD Biosciences</td><td>610297</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100, BioUltra, לביולוגיה מולקולרית</td><td>Merck</td><td>93443-500ML</td><td></td></tr><tr><td>&בטא;-אקטין (C4) עכבר 1:5000</td><td>סנטה קרוז ביוטכנולוגיה</td><td>&nbsp; SC-47778</td><td></td></tr></tbody></table>

חקר שיחות צולבות של תאי אנדותל שומן/אדיפוציטים ברקמת שומן תת-עורית אנושית

Studying Adipose Endothelial Cell/Adipocyte Cross-Talk in Human Subcutaneous Adipose Tissue

טוהר ופנוטיפ hSATMVEC hSATMVEC מבודד ממטופלי ביקורת (כלומר, אנשים ללא היסטוריה של מחלות לב-מטבוליות) היו 99.5% CD31+CD144+CD45- על ציטומטריית זרימה (איור 2). ל-hSATMVEC מבודד הייתה מורפולוגיה דמוית אבן מרוצפת האופיינית ל-ECs (איור 3A). זמן הכפלת האוכלוסייה הממוצע של hSATMVECs היה 56.6 שעות ±-8.1 שעות (ממוצע ± SEM, n = 10) (איור 3B), ושכפול דנ"א פעיל ב-hSATMVECs אושר באמצעות ערכת הדמיה של התפשטות תאים (איור 3C).
hSATMVEC התנהג כמו MVECs מתפקדים ויצר צינורות במטריג'ל (איור 3D). הביטוי היחסי של חלבוני מפתח המעורבים במסלול איתות האינסולין Akt-eNOS מוצג באיור 3E. גם eNOs וגם Akt הדגימו עלייה בזרחון המושרה על ידי אינסולין, המיוצג כיחס בין חלבון זרחן/חלבון כולל מנורמל ל-ß-actin (איור 3E).
hSATMVEC-adipocyte תרבות משותפת מודל להמחשה של תרבית משותפת hSATMVEC-adipocyte ניתן לראות באיור 4A. ככל שהקדם-אדיפוציטים הלבנים התת-עוריים האנושיים נעשים מובחנים יותר, ניתן להבחין בהתפתחות של ואקולים ליפידים (איור 4B), אשר ניתן לכמת באמצעות צביעת שמן אדום O (איור 4B).
ניגודיות פאזה להמחשה והדמיית פלואורסצנטיות (עירור 440-480 ננומטר/פליטה 504-544 ננומטר) של אדיפוציטים ממוינים לאחר 30 דקות דגירה עם גלוקוז 2-NBD של 20 מיקרומטר מוצגים באיור 4C. ניתן לכמת ספיגת גלוקוז על ידי מדידת שטח ירוק כאחוז משטח התא הכולל.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66608/66608fig01v2.jpg"> איור 1: סכמטי המדגים את הקציר והעיבוד של hSATMVECs <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66608/66608fig01large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66608/66608fig02.jpg"> איור 2: תפוקה אופיינית של ניתוח ציטומטריית זרימה של hSATMVECs בתרבית. (A) תרשים פיזור של אזור פיזור צדדי (SSC-A) ואזור פיזור קדמי (FSC-A) המראה gating (תיבה אדומה) של hSATMVECs בתרבית סביב צפיפות אוכלוסיית תאים ספציפית. (B) תרשים פיזור של רוחב פיזור קדמי (FSC-Width) ו-FSC-A המציג gating (תיבה אדומה) של hSATMVECs בתרבית סביב צפיפות אוכלוסיית תאים ספציפית. (C) היסטוגרמה המראה פלואורסצנטיות של תאים מגודרים ל-CD45-FITC. (D) תרשים פיזור של עוצמת פלואורסצנטיות של CD144-PE (ציר x) ו- CD31-PerCP (ציר y). (E) היסטוגרמה המראה פלואורסצנטיות של תאים מגודרים ל-CD144-PE. (F) היסטוגרמה המראה פלואורסצנטיות של תאים מגודרים ל-CD31-PerCP. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66608/66608fig02large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66608/66608fig03.jpg"> איור 3: פנוטיפ hSATMVEC. (A) תמונה במיקרוסקופ אור של hSATMVEC ליד מפגש המראה דמוי אבן מרוצפת. (B) זמן הכפלה hSATMVEC - מיקרוסקופ אור של HATEC בהפרש של 24 שעות מדגים את מידת התפשטות התאים. (C) התפשטות hSATMVEC. מיקרוסקופ פלואורסצנטי של hSATMVEC עם יודיד פרופידיום ו-EdU/Alexa-fluor 488 מנבדקי ביקורת. (D) היווצרות צינור hSATMVEC מנבדקי ביקורת (תמונות שצולמו בהגדלה פי 4). (E) גירוי אינסולין של HATECs - מראה ביטוי יחסי של Akt זרחני (סרין 473) לסך הכל Akt (פאנל שמאלי) eNOS פוספורילציה (serine 1177) לסך eNOS (פאנל ימני) בריכוזי אינסולין הולכים וגדלים עם כתמים מערביים להמחשה מתחת מתוקננים ל-B-actin. הנתונים מוצגים כממוצע ± SEM. גדלים לדוגמה נמצאים מתחת לכל חלונית. קיצורים: 5-Ethynyl-2'-deoxyuridine (EdU), תאי אנדותל מיקרו-וסקולריים של רקמת שומן תת-עורית אנושית (hSATMVEC), שגיאת תקן של הממוצע (SEM). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66608/66608fig03large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66608/66608fig04.jpg"> איור 4: תרבית משותפת hSATMVEC-adipocyte. (A) תמונה סכמטית של תרבית משותפת hSATMVEC-adipocyte. (B) התמיינות של אדיפוציטים. הפאנל השמאלי מראה קדם-אדיפוציטים ביום 0 והפאנל הימני מראה אדיפוציטים מובחנים ביום 10 לאחר הוספת PDM. האיור התחתון מראה את כמות השומנים המאוחסנים באדיפוציטים ובפראדיפוציטים המוכתמים בשמן אדום O. (C) בדיקת ספיגת גלוקוז. הפאנל השמאלי מראה הדמיית פאזה של אדיפוציטים לאחר תרבית משותפת ודגירה, עם 20 מיקרומטר של גלוקוז 2-NBD למשך 30 דקות. הפאנל הימני מציג הדמיה ירוקה שממנה ניתן לכמת את ספיגת הגלוקוז (כאחוז ירוק מהשטח הכולל). הנתונים מוצגים כממוצע ± SEM. קיצורים: יום 10 (D10), רקמת שומן תת-עורית אנושית תאי אנדותל מיקרו-וסקולריים (hSATMVEC), מדיה להתמיינות קדם-אדיפוציט (PDM) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66608/66608fig04large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
טבלה משלימה 1: קוקטייל צביעה לציטומטריית זרימה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66608/Supplementary%20Table%201.zip" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.</a>

Microvascular endothelial cells (MVECs) have many critical roles, including control of vascular tone, regulation of thrombosis, and angiogenesis. ...

studying-adipose-endothelial-celladipocyte-cross-talk-human

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

רקמת שומן (AT) יכולה להשפיע על הומאוסטזיס של כל הגוף, ולכן יש חשיבות להבנת המנגנונים המולקולריים של התמיינות ותפקוד אדיפוציטים. אנו מספקים פרוטוקול להשגת תובנות חדשות לגבי תהליכים אלה על ידי ניתוח הומאוסטזיס, התמיינות וחשיפה להיפוקסיה כמודל לאפופטוזיס אדיפוציטים מושרים.

מנגנון הוויסות של מספרי adipocyte למבוגרים אורגניזמים באמצעות בידול הומאוסטזיס אפופטוזיס

כאן אנו מדווחים על שיטה לבידוד של אוכלוסיות תאי אב (APC) של אדיפוציטים (APC) מתוך רקמת אדיפוס (Perivascular Adipose Tissue) (PVAT) תוך שימוש במיון תאים מגנטיים המופעל (MCS). שיטה זו מאפשרת בידוד מוגבר של APC לכל גרם של רקמת השומן בהשוואה לפלואורסצנטי המופעל תא מיון (FACS).

הרחבת אדיפוגנזה השראה של אבות אדיפוציטים מ רקמות אדיבוס perivascular מבודדים על ידי מיון מגנטי המופעל תא

הבידול של adipocytes לבן ובייז של רקמת שומן אבות כלי הדם נושא פוטנציאל שיפור חילוף החומרים ההשמנה. נתאר פרוטוקולים של CD34 + CD31 + בידוד תאי אנדותל של שומן אנושי ואת הבאים במבחנה הרחבה, בידול לתוך לבן ובייז adipocytes. הם דנו מספר יישומים במורד הזרם.

בידוד, הרחבה, אינדוקציה Adipogenic CD34 + CD31 + תאי אנדותל של אדם עם פגיעה ו התת-עורית שומן

בשל התכנים שומנים גבוהה בדם, מאתגרת רקמת שומן להמחיש היסטולוגית בשיטות מסורתיות. Adipo-ברור הוא רקמה פינוי טכניקה המאפשרת תיוג חזקים, דימות ברזולוציה של פלורסנט הנפחי של רקמת שומן. כאן, אנו מתארים את שיטות הכנת הדוגמא, רעלני, מכתים, ניקוי של הרכבה עבור הדמיה.

Adipo-ברור: רקמה ניקוי שיטה עבור הדמיה תלת-ממדית של רקמת שומן

אנו מתארים האדם 3D מטריקס-adipocyte מערכת תרבות מבחנה המאפשרת ניתוח של התפקידים של מטריקס ואדיפוציטים בתרומה לפנוטיפ רקמה מטבולית של רקמת השומן.

שלושה תלת-ממד של מטריקס-Adipocyte מודל תרבות המודל ללימוד תא מטריקס-מטבולית הסלולר

אנו מציגים פרוטוקול עבור הבידוד, התרבות, והאינדוקציה האדיגנית של הרכס העצבי (NCADSCs) מתוך רקמת השומן של ה-Wnt-1 יצורים+/-; Rosa26Rfp/+ עכברים. NCADSCs יכול להיות מקור נגיש בקלות של ADSCs עבור מידול אדיפוגנזה או ליפוגנזה ב מבחנה.

בידוד, תרבות, והשראה של הרכס העצבי המקורי אדיפוז-תאי גזע שמקורם ברקמת אדיפוז

פרוטוקול זה מתאר את הגישה הטכנית לבידוד תת-אוכלוסיות תאי סטרומה אדיפוגניים ופיברו-דלקתיים ממחסני רקמת שומן לבן תוך בטני (WAT) על ידי מיון תאים המופעלים על ידי פלואורסצנטיות או הפרדת חרוזים אימונומגנטית.

בידוד תת-אוכלוסיות תאי סטרומה אדיפוגניים ופיברו-דלקתיים ממחסני שומן תוך-בטניים של מורין

פרוטוקול זה מספק שיטת עיכול יעילה של collagenase לבידוד של אדיפוציטים בני קיימא ותאי SVF של מקטע כלי דם סטרומה משומן בטני אנושי בתהליך יחיד, כולל מתודולוגיה להשגת RNA באיכות גבוהה מאדיפוציטים ופנוטיפפיקציה של SVF-מקרופאגים באמצעות צביעה של סמנים מרובים הקשורים לממברנה לניתוח על ידי ציטומטריית זרימה.

בידוד אדיפוציטים בני קיימא ומקטע כלי דם סטרומלי מרקמת השומן הקרבית האנושית המתאימה לניתוח RNA ופנוטיפ מקרופאגים

כתב היד והסרטון הנלווה אליו מדגימים טכניקת ביופסיה מלעורית לקבלת דגימות של רקמת שומן תת עורית מאזורים המקיפים את הטבור. שיטה זו היא דרך זולה ויעילה לחקור מגוון פרמטרים (למשל, ביטוי גנים או חלבונים, פעילות אנזימים, תכולת שומנים) בתוך רקמת השומן.

דגימת רקמת שומן תת-עורית אנושית באמצעות טכניקת שאיבת שומן קטנה

פרוטוקול זה מתאר את הבידוד החצי-אוטומטי של מקטע כלי הדם סטרומה (SVF) מרקמת השומן של מורין כדי להשיג קדם-אדיפוציטים ולהשיג התמיינות אדיפוציט במבחנה. שימוש בדיסוציאטור רקמות לעיכול קולגנאז מפחית את השונות הניסיונית ומגביר את יכולת הרבייה.

בידוד חצי אוטומטי של מקטע כלי הדם הסטרומלי מרקמת השומן הלבנה באמצעות דיסוציאטור רקמות

חקור את האינטראקציה בין תאי אנדותל מיקרו-וסקולריים לתאי שומן ברקמת שומן תת-עורית אנושית. שיטה זו מאפשרת חקר מנגנוני מחלות קרדיו-מטבוליות בדגם תרבית משותף.

חקר שיחות צולבות של תאי אנדותל שומן/אדיפוציטים ברקמת שומן תת-עורית אנושית

גלה סרטונים נוספים