Overview
I denne videoen beskriver vi en teknikk for å administrere en løsning av interesse i mammarykanalen til en kanin og bekrefte leveransen ved høyoppløselig ultralydavbildning av kontrastmidler.
Protocol
1. Preoperativ forberedelse
- Registrer kroppsvekten til hver kanin. Som med alle prekliniske studier, overvåke dyrevekter regelmessig for å vurdere potensiell toksisitet.
- Før du bedøver kaninen, fyll et 50 ml konisk rør med kommersielt tilgjengelig ultralydgel og spinn på 500 x g i 30 s; Det skal ikke være synlige bobler i gelen når sentrifugeringen er fullført.
- Administrer glykopyrrolat subkutant i en dose på 0,1 mg/kg og acepromazin intramuskulært i en dose på 0,75 mg/kg. Vent 15-20 min for at beroligende skal tre i kraft mens du overvåker vitale tegn og oppførsel.
MERK: Glykopyrrolat er et antikolinerge middel som forhindrer bradykardi og reduserer respiratoriske og GI-sekreter. Acepromazin er et beroligende middel som fungerer som en premedikasjon for anestesi. - Administrer 35 mg/kg ketamin og 5 mg/kg xylazin subkutant som bedøvelsesmiddel. Men etter hvert som operatøren blir mer erfaren og kan oppnå intraductal levering raskere, redusere legemiddeldosene til 15 mg / kg ketamin og 3 mg / kg xylazin subkutant; Dette vil forkorte anestesitiden og tiden som kreves for at dyret skal komme seg fra anestesi.
- Kontroller og dokumenter hjertefrekvensen, SPO2, temperatur, åndedrettsfrekvens og slimmembranfarge hvert 15. Påfør øyesmøremiddel på begge øynene.
MERK: Bare personell som har gjennomgått passende opplæring og er godkjent av institusjonens IACUC, bør administrere eller overvåke anestesi. Bruken av en veterinærbedøvelsesmonitor kan bidra til å skaffe vitale tegn og anbefales. Veterinærbedøvelsesmonitoren erstatter imidlertid ikke behovet for å manuelt sjekke dyret hvert 15. Se produsentens instruksjoner for riktig bruk av en veterinærmonitor. - Bekreft utbruddet av anestesi ved en mild tåklemme; kaninen skal være ikke-responsiv før du fortsetter.
- Barber forsiktig kaninens kaudale underliv i området rundt de tredje og fjerde par inguinal teats.
- Når mesteparten av håret er fjernet, påfør en over-the-counter hårfjerningskrem på det barberte området. Fjern fløten 10 min etter påføring med fuktige papirhåndklær fuktet med varmt vann.
MERK: Kaninhuden er svært skjør/følsom. Hårfjerningskremen skal ikke brukes i mer enn 10 minutter. Faktisk er det tryggere å prøve et "teststed" på 5 min og bare la det være lenger hvis teststedet indikerer at en lengre tidsperiode er nødvendig. - Tørk av området med alkohol-gjennomvåt gasbind pads for å rengjøre injeksjonsstedet.
- Plasser kaninen på dorsum i et v-formet trough foret med et resirkulerende varmt vannteppe og en absorberende pute.
2. Forberedelse av kontrastmiddelet
- Rekonstituer det ikke-målrettede kontrastreagenset i henhold til produsentens instruksjoner. Pipette opp og ned forsiktig for å blande.
MERK: Kontrastmiddelet som brukes i denne protokollen er stabil ved romtemperatur i 4 - 6 timer etter rekonstituering. Gyng hetteglasset forsiktig mellom hver gjenfinning.
MERK: Det nødvendige oppløsningsvolumet avhenger av antall kanaler som skal injiseres. Kaninen har 4 kanalåpninger per smokt, og 0,2 ml løsning er tilstrekkelig til å fylle ett kanaltre av en voksen New Zealand White Rabbit (Oryctolaguscuniculus). Dermed kan et totalt volum på 0,8 ml leveres til en brystkjertel.
3. Intraductal levering
- Finn de riktige smokkene som skal injiseres; de 3rd og 4th par inguinal teats anbefales, da de lett visualiseres når dyret er plassert på dorsum.
- Legg 0,2 ml steril 0,9 % saltvann i en 1 ml Luer-lock tuberkulinsprøyte med en 22 G kanyle. Kast 22 G kanylen på riktig måte når saltvannsvæsken er i sprøyten og erstatt den med en steril 25-gauge nål. Tørk forsiktig av området med 85% isopropylalkohol på en gasbindpute.
- Med nålens skråkant opp og sprøyten parallelt med dyrets kropp, sett nålens skråkant inn i siden av smokken og injiser sakte 0,1-0,2 ml saltvann; Dette vil tillate bedre visualisering av kanalåpningene.
- Legg 0,2 ml injeksjonsvæske, oppløsning i en 1 ml Luer-lock tuberkulinsprøyte.
- Hold smokken forsiktig med tommelen og pekefingeren og løft den litt for å plassere den for intraductal injeksjon; en bærbar okulær lupe kan hjelpe til med å visualisere kanalåpningene.
- Mens du opprettholder den løftede posisjonen til smokken, kanyler du forsiktig kanalen av interesse ved hjelp av en 25 G stump spissnål.
- Etter kanylering, vri luerlåssprøyten forsiktig på navet på infusjonsnålen med stump spiss til den er låst på plass.
- Løft smokken og injiser løsningen sakte for å minimere potensiell skade forårsaket av raskt bevegelig væske i kanalen; Det skal ikke være motstand når du injiserer oppløsningen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
MicroMarker non-targeted contrast reagent | VisualSonics | VS-11694 | |
Luer Lock 1 mL Syringes | BD | 309628 | |
Glycopyrrolate 0.2 mg/mL | Wedgewood Compounding Pharmacy | GLYCOP-INJ013VC | 6 month shelf life, supply may be limited. |
Ketamine HCL 100 mg/mL | Animal Health International | 21250699 | http:// www.animalhealthinternational.com/ |
Acepromazine 10 mg/mL | Animal Health International | 17640541 | |
Xylazine 20 mg/mL | Animal Health International | 20101547 | |
Hair Removing Cream | Veet | Sensitive skin solution. Available through local retailers. | |
Blunt tip infusion needles | Sai Infusion Technology | B14-50 | http://www.sai-infusion.com/ collections/blunt-needles |
Veterinary Pulse Oximeter | EdanUSA | VE-H100B | http://www.edanusa.com/Product/ VE-H100B-Veterinary-PulseOximeter.html |
Warm Water Pump | Gaymar | TP700 | |
Warm Water Blanket | Animal Health International | 21232696 | Maxi-Therm Lite Warming Pads |