Fabbricazione di micro-tessuti utilizzando i moduli di Collagene Gel cellule contenenti

Sommario

Creazione di micro-tessuti con gel di collagene cilindriche, chiamati moduli, che contengono cellule embedded e la cui superficie è rivestita con le cellule endoteliali.

Abstract

Questo protocollo descrive la fabbricazione di un tipo di micro-tessuti chiamate moduli. L'approccio modulo genera uniforme, scalabile e tessuti vascolarizzati. I moduli possono essere fatte di collagene così come altri materiali gelable o reticolabile. Sono circa 2 mm di lunghezza e 0,7 mm di diametro sulla fabbricazione, ma ridursi in dimensione con le cellule incorporato o quando i moduli sono rivestite di cellule endoteliali. I moduli singolarmente sono abbastanza piccoli che le celle sono incorporate nel limitare la diffusione di ossigeno e altre sostanze nutritive, ma i moduli possono essere imballate insieme per formare tessuti che sono più grandi perfusable. Questi tessuti sono modulari in costruzione a causa diversi tipi di cellule possono essere incorporati in o rivestiti sui moduli prima di essere imballate insieme per formare tessuti complessi. Ci sono tre passi principali per rendere i moduli: (1) neutralizzare il collagene e l'incorporamento di cellule in esso, (2) gelificazione il collagene nel tubo e tagliare i moduli e (3) rivestimento dei moduli con le cellule endoteliali.

Protocollo

1) Preparazione dei tubi

1. Tagliare 2-3 m di lunghezza di tubo in polietilene (0,76 mm ID x 1,22 mm di diametro).
2. Infilare un ago 20 G1 in una delle estremità del tubo.
3. Bobina il tubo e posto in un self-sigillo sacchetto convertitori (7 1 / 2 "x 13"). Le due estremità del tubo deve essere collocato alla fine non sigillata della borsa e registrato sul posto con nastro a gas sterilizzazione.
4. Borsa di tenuta e di gas sterilizzare.

2) Neutralizzazione di Collagene

Nota: 1 ml di collagene riempie circa 2 metri di tubo in polietilene.

1. Mettere la quantità necess....

Discussione

Abbiamo fabbricato diversi diversi micro-tessuti con moduli integrati con diversi tipi di cellule ^1-11. Abbiamo incorporato con successo cardiomiociti primari, isolotti, le cellule staminali adipose e cellule stromali mesenchimali così come diverse linee cellulari tra cui HepG2, NIH 3T3 e clonare 9 cellule del fegato. Abbiamo ricoperto i moduli con vari tipi di cellule endoteliali, comprese le cellule endoteliali aortiche ratto, cellule endoteliali della vena ombelicale e le cellule endoteliali microvascolari.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Tubazione Intramedic PE60	BD Biosciences	427416	È possibile utilizzare tubazioni di diverso diametro per modificare il diametro dei moduli
Soluzione salina fosfato (PBS)	GIBCO, by Life Technologies	20012-027
Tripsina-EDTA	GIBCO, by Life Technologies	25200-072
Collagene acido Purcol, 3 mg/mL	Cedarlane Labs	5005-B
Bicarbonato di sodio	Sigma-Aldrich	S5761
Ago da 20G	BD Biosciences	305175	Il diametro dell'ago deve essere simile al diametro della tubazione
Siringa da 3 mL	BD Biosciences	309585
Provetta da 15 mL	BD Biosciences	352096
Provetta da 50 mL	BD Biosciences	352070
Convertitori confezionati singolarmente 7 1/2” x 13”	Cardinal Health	92713
Pipetta sierologica da 10 ml con punta larga	BD Biosciences	357504
Pipetta sierologica da 10 ml	BD Biosciences	357551
Pipetta sierologica da 5 ml	BD Biosciences	357543