Waiting
Elaborazione accesso...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

Visualisering av mitokondrie lungfunktion med hjälp av cytokrom C Oxidas / succinatdehydrogenas (COX / SDH) Dubbelklicka märkning Histochemistry

Published: November 23, 2011 doi: 10.3791/3266
Automatic Translation
1,2
1Department of Neuroscience, Karolinska Institutet, 2National Institute on Drug Abuse (NIDA)

Summary

Cytokrom c oxidas / natrium dehydrogenas (COX / SDH) dubbel-märkning metoden möjliggör direkt visualisering av mitokondrie respiratoriska enzym brister i söt-frysta vävnadssnitt. Detta är en rättfram histokemiska teknik och är användbar för att utreda mitokondriella sjukdomar, åldrande och åldersrelaterade sjukdomar.

Abstract

Mitokondrie-DNA (mtDNA) defekter är en viktig orsak till sjukdom och kan ligga bakom åldrande och åldersrelaterade förändringar 1,2. Den mitokondriella teori om åldrandet antyder en roll för mtDNA mutationer, som kan förändra bioenergetik homeostas och cellulära funktion i åldrandeprocessen 3. En mängd bevis har sammanställts till stöd för denna teori 1,4, ett exempel är mtDNA Mutator musen 5, men det är den exakta rollen av mtDNA skador i åldrande inte helt förstått 6,7.

Observation av aktiviteten av andningsskydd enzymer är en enkel metod för att undersöka mitokondriell dysfunktion. Komplexa IV eller cytokrom c oxidas (COX), är viktigt för mitokondriell funktion. Den katalytiska subenheter av COX kodas av mtDNA och är avgörande för montering av komplexa (Figur 1). Således är korrekt syntes och funktion stor del baserat på mtDNA integritet 2.Även andra respiratoriska komplex kunde undersökas, komplex IV och II är de mest mottagliga för histokemiska undersökningen 8,9. Komplexa II, eller succinatdehydrogenas (SDH), är helt kodas av kärn-DNA (figur 1) och dess verksamhet är normalt inte påverkas av nedsatt mtDNA, men en ökning kan tyda på mitokondriell biogenes 10-12. Den försämrad mtDNA observerats i mitokondriella sjukdomar, åldrande och åldersrelaterade sjukdomar leder ofta till förekomsten av celler med låg eller obefintlig COX aktivitet 2,12-14. Även COX-och SDH-aktiviteter kan undersökas individuellt, har sekventiell dubbel märkning metod 15,16 visat sig vara fördelaktigt att lokalisera celler med mitokondriell dysfunktion 12,17-21.

Många av de bästa konstitutioner analysen har fastställts, såsom substrat koncentration, elektron acceptanter / givare, mellan elektron bärare, påverkan av pH, och t reaktionIME 9,22,23. 3,3 '-Diaminobenzidin (DAB) är ett effektivt och tillförlitligt elektron donator 22. I celler med fungerande COX, kommer den bruna indamine polymera produktsystem lokalisera i mitokondriernas cristae och mätta celler 22. Dessa celler med dysfunktionella COX kommer därför inte att mättat av DAB-produkt, vilket möjliggör visualisering av SDH aktivitet genom reduktion av nitroblue tetrazolium (NBT), en elektronacceptor, en blå formazanförening slutprodukt 9,24. Cytokrom c och natrium substrat succinat läggs för att normalisera endogena nivåer mellan kontroll och sjuk / mutant vävnader 9. Katalas läggs till som en försiktighetsåtgärd för att undvika eventuella kontaminerande reaktioner från peroxidasaktivitet 9,22. Phenazine methosulfate (PMS), en intermediär elektron bärare, används tillsammans med natriumazid, en andningskedjan hämmare, för att öka bildandet av den slutliga reaktionen 9,25. Trots detta informeraring, några kritiska detaljer som påverkar resultatet av denna passande enkla analys utöver specificitet kontroller och framsteg inom teknik, ännu inte har presenterats.

Protocol

1. Mjukpapper förberedelse för cryosectioning

  1. Sacrifice djuret antingen halsdislokation eller halshuggning, i enlighet med gällande etiska tillstånd.
  2. Snabbt samlar vävnader av intresse (t.ex.. Hjärnan), och snabbt frysa på torr is (vävnader kan kräva frysning i isopentan eller propan kyld med flytande kväve för att uppnå optimal morfologi). Förvara vävnader i aluminiumfolie vid -80 ° C tills den ska avsnitt.
  3. Bädda frysta vävnader inför cryosectioning.
  4. Samla 14-ìm kryostatsnitt vid -21 ° C (kan behöva justera temperaturen ± 1-2 ° C). Tina delar ut bilder med hjälp värmeblock, och diabilder förvaras utan coverslipping vid -20 ° C tills den ska användas.

2. COX histokemi

  1. Låt objektglasen torka i rumstemperatur i 1 timme. Sätt bilder i en slide-färgning kammare med våta filterpapper, skuren i strimlor. För att få consistent resultaten i varje försök, rekommenderas att bearbeta högst tio bilder per experiment för att minimera fördröjningar.
  2. Förbered under en kemisk huva 1X DAB, cytokrom 100 mikroM C i 0,1 M PBS pH = 7,0. Vortex snabbt.
  3. Tillsätt 2 mikrogram nötkreatur katalas (2 mikrogram ml -1 eller cirka 4 IE ml -1). Blanda väl genom att vortexa att bryta upp alla korn av katalas.
  4. Applicera 150 till 200 mikroliter av inkubationen medellång till varje bild, använda pipettspetsen för att sprida jämnt på alla sektioner.
  5. Inkubera objektglasen i 40 minuter vid 37 ° C.
  6. Ta bort överflödig lösning från bilderna. Tvätta diabilder 4 gånger 10 minuter varje gång, i 0,1 M PBS pH = 7,0.
  7. Återgå diabilder till slide-färgning kammare med våta pappersremsor.

3. SDH histokemi

  1. Förbered under en kemisk huva 1,5 mm NBT, 130 mm natrium succinat, 0,2 mM PMS, och 1,0 mm natriumazid i 0,1 M PBS pH = 7,0. Ta försiktighet för att skyddaPMS från ljus. Vortex snabbt.
  2. Applicera 150-200 mikroliter av inkubationen medellång till varje bild, använda pipettspetsen för att sprida jämnt på alla sektioner.
  3. Inkubera objektglasen i 40 minuter vid 37 ° C.
  4. Ta bort överflödig lösning från bilderna. Tvätta diabilder 4 gånger 10 minuter varje gång, i 0,1 M PBS pH = 7,0.
  5. Torka objektglasen i 2 minuter i följande koncentrationer av etanol: 70%, 70%, 95%, 95%, 99,5%. Låt sedan 10 minuter i en ytterligare 99,5% steg.
  6. Placera objektglasen i xylen i 10 minuter. Montera med Entellan och täckglas. Låt objektglasen torka över natten, eller minst 1-2 timmar i ett ventilerat utrymme.

4. Fastställande av mitokondriell dysfunktion

  1. Mängden mitokondriell dysfunktion indikeras av mängden cellulära blå färgning. Till semi-kvantifiera dessa belopp bör diabilder kodas och visualiseras i starkt fält mikroskopi. Semi-kvantifiering bör utföras på en blind grunden med hjälp av en skala, till exempel 0-4 (0, ingen blå färgning, 4, endast blå färgning). Det är bäst att utföra denna typ av semi-kvantifiering av flera sektioner från ett givet ämne / djur för att beräkna ett medelvärde för varje ämne / djur.
  2. Statistik ska utföras med en icke-parametrisk test, som Mann-Whitney och Kruskal-Wallis.

5. Lämpliga specificitet kontroller

  1. För specificitet kontroller för COX aktivitet, upprepa "COX histokemi" steg, och lägg 2,5 azide mM natrium, en terminal andningskedjan hämmare.
  2. För specificitet kontroller för SDH aktivitet, upprepa "SDH histokemi" steg med avskaffandet av natrium succinat och tillägget av 50 mm malonate, en kompetitiv hämmare av SDH.
  3. Tvätta och torka avsnitt i en etanol-serien, och sedan montera och täckglas på bilderna som beskrivs i steg från 3,4 till 3,6.

6. Representativa resultat:

tält "> är den övergripande planen för COX / SDH dubbel-märkning histokemiska analys illustreras i figur 2. Representativa exempel på lämpliga COX / SDH dubbel-märkning histokemi i hjärnan sektioner från vildtyp och för tidigt åldrande mtDNA möss Mutator visas i figur 3. mörkbrun färgning i vildtyp möss (Figur 3, till vänster) visade normala COX aktivitet. Celler med andningskedjan brister, vilket indikeras av den blå färgning, uppenbarades i 12 veckor gamla mtDNA Mutator möss, och dessa brister blev mer utbrett som mtDNA Mutator möss åldern till 46 veckor (Figur 3, mitten och höger panel).

Exempel på olämpliga COX / SDH dubbel-märkning i hjärnan sektioner från vildtyp möss på grund av otillräcklig COX märkning visas i Figur 4. Otillräcklig inkubationstid för demonstration av COX aktivitet, eller minska tillgängligheten av molekylärt syre coverslipping bilden under inkubationen, resulterade i ett minskat nedfall av DAB reagerarjon produkt, och därmed möjliggjorde bildandet av det blå formazanförening slutprodukten under SDH inkubation.

COX-och SDH-aktiviteter kan också utredas separat (Figur 5, vänster och mitten), men det är den sekventiella märkning till hjälp för att identifiera celler med COX brister, på grund av bildandet av det blå fällning under SDH inkubationen (Figur 3, centrum och höger). Specificitet kontroller för COX-och SDH aktiviteter kan också göras (Figur 5, höger).

Figur 1
Figur 1. Mitokondriell andningsorganen Complexes IV. Den mitokondriella andningskedjan ligger inom det inre membranet och omfattar fem komplex. Syftet med andningskedjan är att transportera elektroner från komplex I-IV och därmed skapar en proton gradient över det inre membranet används av komplex V (ATPas) för att producera ATP. Red hexagoner represent subenheter kodas av mtDNA. Vit hexagoner representerar subenheter kodas av kärn-DNA (observera att Complex II är helt kodad från den nukleära genomet). Således kan mutationer i mitokondriernas arvsmassa orsaken dysfunktion i andningskedjan grund av mutationer i subenheter av andningskedjan komplex.

Figur 2
Figur 2. Flödesschema av COX / SDH dubbel-märkning histokemiska analys. Dissekera organ av intresse, snabbt frysa vävnaderna på torr is, och förvara dem vid - 80 ° C. Samla kryostatsnitt och hålla vid - 20 ° C fram till användning. Låt delarna lufttorka i rumstemperatur i 1 timme. Förbered inkubation medium för COX histokemi, applicera den på bilderna, och inkubera i 40 minuter vid 37 ° C. Tvätta delarna i PBS 4 gånger 10 minuter varje tvätt. Förbered inkubation medium för SDH histokemi, applicera den på SLIdes, och igen inkubera i 40 minuter vid 37 ° C. Tvätta delarna igen i PBS, torkar i en etanol-serien, och sedan montera och täckglas bilderna. COX / SDH dubbel-märkta avsnitt är redo att se i starkt fält mikroskopi inom 1-2 timmar.

Figur 3
Figur 3. Representativa exempel på COX / SDH dubbel-märkning. Hjärnans delar från vildtyp och för tidigt åldrande mtDNA möss Mutator var sekventiellt märkta för COX-och SDH aktiviteter. (Skala:. 200 mikrometer) Normal COX aktivitet (indikeras med mörkbrun färg) visades i hippocampus från vildtyp möss (till vänster). COX brister (markeras med blå färg) avslöjades i hippocampus från mtDNA Mutator möss (mitten och höger). Det fanns en ytterligare minskning av COX aktivitet med 46 veckors ålder i mtDNA Mutator möss, vilket tyder på omfattande försämring av andningskedjan dysfunktion. Den observerade Mitochondrial dysfunktion i mtDNA Mutator möss 12 orsakas av höga nivåer av mtDNA punktmutationer samt ökade nivåer av linjära strykningar 5.

Figur 4
Figur 4. Exempel på olämpliga COX / SDH dubbel-märkning. Hjärnans delar från vildtyp möss sekventiellt märkta för COX-och SDH aktiviteter. (Skala:. 200 mikrometer) Otillräcklig inkubationstiderna (10 och 25 minuter) för demonstration av COX aktivitet resulterade i ett minskat nedfall av den bruna DAB reaktionsprodukt, jämfört med 40-minuters inkubationstiden (vänster och mitten). Den förkortade inkubationstider tillåtet för bildandet av det blå formazanförening slutprodukten under SDH inkubationen, vilket tyder på vilseledande närvaro av celler med COX brister. Coverslipping bilderna under COX inkubation också resulterat i felaktiga bildningen av DAB reagerarion produkt (höger).

Figur 5
Figur 5. Jag ndividual COX-och SDH-märkning och specificitet kontroll. Hjärnans delar från vildtyp möss separat märkta för COX-och SDH aktiviteter, vilket indikeras av den mörka bruna färgen och den blå färgen, respektive (vänster och mitten). Även COX-och SDH-aktiviteter kan vara individuellt märkt, har den sekventiella märkning visat sig vara fördelaktigt att lokalisera celler med mitokondriell dysfunktion. Ett exempel på en specificitet kontroll för COX-och SDH aktiviteter i hjärnan från en vildtyp möss visade avsaknad av märkning (till höger). (Skala:. 200 mikrometer)

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Den kombinerade COX / SDH histokemiska metod gör att den visualisering av celler med mitokondriell dysfunktion. Denna teknik, med tidiga studier som går tillbaka till 1968, är fortfarande populär, med många med tanke på den "gyllene standarden" för att identifiera mitokondriella sjukdomar hos patienter 14,19,26,27. Det är nu ofta används för att undersöka mtDNA mutation driven åldrande och åldersrelaterade sjukdomar 12,13,18,20,21,24. COX / SDH dubbel-märkning metoden används ofta parallellt med andra tekniker för att identifiera specifika mtDNA mutationer och att ytterligare utreda mitokondriella respiratoriska enzymer, såsom oximetric mätningar och spektrofotometrisk enzym analys 28,29.

Trots sin långvarig användning, har viktiga detaljer, enkla kontroller specificitet, och förskott för att förbättra metoden ännu inte presenterats. I fråga om att hantering av vävnad, är det viktigt att använda färsk-fryst vävnad med detta techniqUE, för även COX kommer att överleva formalin fixering, SDH inte. Även om detta är en begränsning av tekniken, har ingen obduktion fördröjning visats störa denna metod 24, men det föreslås att snabbt ta bort organ av intresse att bevara morfologi. Dock bör ständiga frys-tö cykler av vävnader och sektioner undvikas. Vävnadsprover kan frysas på torr-is, men kan vissa vävnader kräver frysning i isopentan eller propan kyls med flytande kväve för att uppnå optimal morfologi och för att undvika frysning artefakter. Lämplig tjocklek kryostatsnitt, beroende på vävnad-typ, bör också fastställas. Det rekommenderas att samla in mellan 8 - 14-ìm sektioner, tunt nog för penetration av de lösningar men tjock nog för att bevara anatomiska funktioner efter uttorkning. Den föreslagna kryostat temperatur -21 ° C kan behöva justeras ± 1-2 ° C. Om provet är för kallt, kan avsnittet curl, omdet är för varmt, kan den del fastnar på kniven. När det gäller hanteringen av bilderna,, användningen av ett fett penna, som ofta är fördelaktigt att hålla inkubationstiden medium på bilden bör undvikas. Använd i stället 150 till 200 l av inkubationen medel per bild, beroende på antal avsnitt. Användning av ett täckglas under inkubationen bör också undvikas tills bilden är klar att monteras, eftersom molekylärt syre måste vara närvarande vid COX märkning steg (Figur 4). Slutligen är det rekommenderat att använda kommersiellt tillgängliga DAB-lösning (t.ex. Sigma), ett säkrare alternativ till att förbereda DAB-lösning från kristallint fast. DAB-lösning kan också göras från tillgängliga tabletter, men inkonsekventa COX märkning resultat hittades när denna tablett-baserade DAB-lösning användes.

För att få konsekventa och tillförlitliga resultat från denna biokemiska analys är följande punkter rekommenderas. Använd nyberedda PBS och etanol i varje experimentt. Bered stamlösningar av cytokrom c, NBT, PMS (sköld mot ljus), natrium succinat, natriumazid och malonate i 0,1 M PBS pH = 7,0, justera pH till 7,0 med 0,1 M HCl eller 0,1 M NaOH. Alikvotera och lagra stamlösningen vid -20 ° C, och snabbt tina lösningar strax före användning. För att få konsekventa resultat i varje försök, rekommenderas att bearbeta högst tio bilder per experiment för att minimera fördröjningar. Det finns en viss variation mellan experiment, och därför bör delar från varje ämne / djur upprepas minst tre till fyra gånger, och lämpliga kontroller bör användas i varje försök. Slutligen, eftersom inkubationstiderna gör påverkar mängden av COX-märkning (Figur 4, vänster och mitten paneler) och SDH-märkning, är det inte rekommenderat att variera inkubationstiderna med mer än 5% (2 min).

Den kombinerade COX / SDH-protokollet som presenteras här är baserade på principer som tidigare beskrivits 9,22,23,25. Precis som medmånga technqiues, variationer av detta protokoll, såsom exklusive tillägg av PMS och natriumazid, med hjälp av en vattenlösning monteringsvätska, och varierande inkubationstid och skölj gånger, finns och kan fungera lika bra.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Inga intressekonflikter deklareras.

Acknowledgments

Detta arbete stöddes av National Institute of Aging (AG04418), National Institute on Drug Abuse, National Institute of Health, Karolinska Institutet Graduate Partnerships Program, Karolinska Institutet, svenska Vetenskapsrådet, svenska Brain Power, och svenska Hjärnfonden. Många tack till Mattias Karlén och Dr Giuseppe Coppotelli för kreativa stöd med figur 1 respektive 2, Karin Pernold för tekniskt bistånd, och Dr. Barry J. Hoffer, Lars Olson och Nils-Göran Larsson för mycket goda råd och diskussion.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Dry Ice AGA Gas AB block form
Isopentane (2-methylbutane) Sigma-Aldrich 277258 CAS: 78-78-4
Cyrostat embedding solution Sakura Finetek Tissue Tek 4583
Cryostat Microm International Microm Model HM 500M
Slides Thermo Fisher Scientific, Inc. Super Frost Plus Menzel Gläser J1800AMWZ
Cover glasses Borosilicate glass VWR international 16004-098 24 x 50 mm
Filter Paper Munktell Filter AB Quality: 1350 Article Number: 242 001 430 x 430 mm
3,3′-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB) Sigma-Aldrich Sigma Liquid Substrate System, D7304
Cytochrome c (Type III, from equine heart) Sigma-Aldrich C2506 CAS: 9007-43-6
Bovine catalase (from liver) Sigma-Aldrich C9322 CAS: 9001-05-2
Nitroblue tetrazolium (NBT) Sigma-Aldrich N6876 CAS: 298-83-9
Sodium succinate Sigma-Aldrich S2378 CAS: 6106-21-4
Phenazine methosulfate (PMS) Sigma-Aldrich P9625 CAS: 299-11-6 PMS is light sensitive. Shield from light.
Sodium azide Sigma-Aldrich S8032 CAS: 26628-22-8
Xylene VWR international EM-XX0060-4
Entellan VWR international 100503-870
Malonate (Malonic acid) Sigma-Aldrich M1296 CAS: 141-82-2

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Larsson, N. G. Somatic mitochondrial DNA mutations in mammalian aging. Annu. Rev. Biochem. 79, 683-706 (2010).
  2. Cottrell, D. A. Role of mitochondrial DNA mutations in disease and aging. Ann. NY Acad. Sci. 908, 199-207 (2000).
  3. Harman, D. The biologic clock: the mitochondria. J. Am. Geriatr. Soc. 20, 145-147 (1972).
  4. Wallace, D. C. Mitochondrial genetics - a paradigm for aging and degenerative diseases. Science. 256, 628-632 (1992).
  5. Trifunovic, A. Premature ageing in mice expressing defective mitochondrial DNA polymerase. Nature. 429, 417-423 (2004).
  6. Ameur, A. Ultra-deep sequencing of mouse mitochondrial DNA: mutational patterns and their origins. PLoS Genet. 7, e1002028-e1002028 (2011).
  7. Safdar, A. Endurance exercise rescues progeroid aging and induces systemic mitochondrial rejuvenation in mtDNA mutator mice. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 108, 4135-4140 (2011).
  8. DiMauro, S., Bonilla, E., Zeviani, M., Nakagawa, M., DeVivo, D. C. Mitochondrial myopathies. Ann. Neurol. 17, 521-538 (1985).
  9. Old, S. L., Johnson, M. A. Methods of microphotometric assay of succinate dehydrogenase and cytochrome c oxidase activities for use on human skeletal muscle. Histochem. J. 21, 545-555 (1989).
  10. Chaturvedi, R. K. Impaired PGC-1alpha function in muscle in Huntington's disease. Hum. Mol. Genet. 18, 3048-3065 (2009).
  11. Edgar, D. Random point mutations with major effects on protein-coding genes are the driving force behind premature aging in mtDNA mutator mice. Cell. Metab. 10, 131-138 (2009).
  12. Ross, J. M. High brain lactate is a hallmark of aging and caused by a shift in the lactate dehydrogenase A/B ratio. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 107, 20087-20092 (2010).
  13. Crugnola, V. Mitochondrial respiratory chain dysfunction in muscle from patients with amyotrophic lateral sclerosis. Arch. Neurol. 67, 849-854 (2010).
  14. Nonaka, I. Muscle pathology in cytochrome c oxidase deficiency. Acta. Neuropathol. 77, 152-160 (1988).
  15. DiMauro, S. Mitochondrial encephalomyopathies. Neurol. Clin. 8, 483-506 (1990).
  16. Bonilla, E. New morphological approaches to the study of mitochondrial encephalomyopathies. Brain. Pathol. 2, 113-119 (1992).
  17. Brierley, E. J., Johnson, M. A., Lightowlers, R. N., James, O. F., Turnbull, D. M. Role of mitochondrial DNA mutations in human aging: implications for the central nervous system and muscle. Ann. Neurol. 43, 217-223 (1998).
  18. Borthwick, G. M., Johnson, M. A., Ince, P. G., Shaw, P. J., Turnbull, D. M. Mitochondrial enzyme activity in amyotrophic lateral sclerosis: implications for the role of mitochondria in neuronal cell death. Ann. Neurol. 46, 787-790 (1999).
  19. Gellerich, F. N. Mitochondrial respiratory rates and activities of respiratory chain complexes correlate linearly with heteroplasmy of deleted mtDNA without threshold and independently of deletion size. Biochim. Biophys. Acta. 1556, 41-52 (2002).
  20. Larsson, N. G. Mitochondrial transcription factor A is necessary for mtDNA maintenance and embryogenesis in mice. Nat. Genet. 18, 231-236 (1998).
  21. Ekstrand, M. I. Progressive parkinsonism in mice with respiratory-chain-deficient dopamine neurons. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 104, 1325-1330 (2007).
  22. Seligman, A. M., Karnovsky, M. J., Wasserkrug, H. L., Hanker, J. S. Nondroplet ultrastructural demonstration of cytochrome oxidase activity with a polymerizing osmiophilic reagent, diaminobenzidine (DAB). J. Cell. Biol. 38, 1-14 (1968).
  23. Dubowitz, V., Brooke, M. Muscle Biopsy: A Modern Approach. , Saunders. (1973).
  24. Cottrell, D. A. Cytochrome c oxidase deficient cells accumulate in the hippocampus and choroid plexus with age. Neurobiol. Aging. 22, 265-272 (2001).
  25. Blanco, C. E., Sieck, G. C., Edgerton, V. R. Quantitative histochemical determination of succinic dehydrogenase activity in skeletal muscle fibres. Histochem. J. 20, 230-243 (1988).
  26. Moraes, C. T., Ricci, E., Bonilla, E., DiMauro, S., Schon, E. A. The mitochondrial tRNA(Leu(UUR)) mutation in mitochondrial encephalomyopathy, lactic acidosis, and strokelike episodes (MELAS): genetic, biochemical, and morphological correlations in skeletal muscle. Am. J. Hum. Genet. 50, 934-949 (1992).
  27. Petruzzella, V. Extremely high levels of mutant mtDNAs co-localize with cytochrome c oxidase-negative ragged-red fibers in patients harboring a point mutation at nt 3243. Hum. Mol. Genet. 3, 449-454 (1994).
  28. Tulinius, M. H., Holme, E., Kristiansson, B., Larsson, N. G., Oldfors, A. Mitochondrial encephalomyopathies in childhood. I. Biochemical and morphologic investigations. J. Pediatr. 119, 242-250 (1991).
  29. Haas, R. H. The in-depth evaluation of suspected mitochondrial disease. Mol. Genet. Metab. 94, 16-37 (2008).

Tags

Cellbiologi åldrande hjärna COX / SDH histokemi mitokondrier mitokondriell sjukdom mitokondriell dysfunktion mtDNA mtDNA mutationer andningskedjan
Visualisering av mitokondrie lungfunktion med hjälp av cytokrom<em> C</em> Oxidas / succinatdehydrogenas (COX / SDH) Dubbelklicka märkning Histochemistry
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Ross, J. M. Visualization of… More

Ross, J. M. Visualization of Mitochondrial Respiratory Function using Cytochrome C Oxidase / Succinate Dehydrogenase (COX/SDH) Double-labeling Histochemistry. J. Vis. Exp. (57), e3266, doi:10.3791/3266 (2011).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter