Name: Visualizzazione della funzione respiratoria mitocondriale utilizzando Citocromo C Ossidasi / succinato deidrogenasi (COX / SDH) Doppio etichettatura Istochimica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-23T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 53 s
Description: Scopri la doppia marcatura istochimica COX/SDH per visualizzare le carenze enzimatiche respiratorie mitocondriali in sezioni di tessuto congelato fresco. Questa tecnica aiuta a diagnosticare malattie mitocondriali e disturbi legati all'invecchiamento.

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Questo lavoro è stato sostenuto dal National Institute of Aging (AG04418), National Institute on Drug Abuse, National Institute of Health, Karolinska Institutet Programma Graduate Partnership, Karolinska Institutet, Consiglio svedese della ricerca, Brain Power svedese, e Brain Foundation svedese. Molte grazie a Mattias Karlen e il Dr. Giuseppe Coppotelli per il supporto creativo di figura 1 e 2, rispettivamente; Karin Pernold di assistenza tecnica; e Drs. Barry J. Hoffer, Lars Olson, e Nils-Göran Larsson per molti consigli utili e di discussione.

1. Preparazione dei tessuti per criosezionamento <ol><li> Sacrificare l'animale da una dislocazione cervicale o la decapitazione, secondo disponibili permettono di etica. </li><li> Raccogliere velocemente i tessuti di interesse (ad es. Cervello), e congelare rapidamente in ghiaccio secco (può richiedere il congelamento dei tessuti in isopentano o propano refrigerata con azoto liquido per ottenere morfologia ottimale). Negozio di tessuti in fogli di alluminio a -80 ° C fino al momento di sezione. </li><li> Incorpora tessuti congelati in preparazione criosezionamento. </li><li> Colleziona 14 micron sezioni al criostato a -21 ° C (potrebbe essere necessario regolare la temperatura ± 1-2 ° C). Scongelare sezioni su vetrini con blocco riscaldante, e conservare i vetrini senza coprire i vetrini a -20 ° C fino al momento dell'uso. </li></ol> 2. COX istochimica <ol><li> Permettere che i vetrini ad asciugare a temperatura ambiente per 1 ora. Mettete le diapositive in una slide-colorazione da camera con carta da filtro bagnata, tagliata a strisce. Per ottenere consistenrisultati t in ogni esperimento, si raccomanda di elaborare un massimo di dieci diapositive per esperimento per minimizzare i ritardi di tempo. </li><li> Preparare sotto cappa chimica 1X DAB, 100 mM citocromo c in 0.1 M PBS pH = 7.0. Vortex rapidamente. </li><li> Aggiungere 2 mcg bovina catalasi (2 mg ml -1 o circa 4 UI ml -1). Mescolare bene nel vortex per rompere tutti i granelli di catalasi. </li><li> Applicare 150-200 ml di mezzo di incubazione di ogni diapositiva, utilizzare puntale a diffondersi in modo uniforme su tutte le sezioni. </li><li> Incubare i vetrini per 40 minuti a 37 ° C. </li><li> Rimuovere la soluzione in eccesso dalle diapositive. Lavare i vetrini 4 volte, 10 minuti ogni volta, di 0,1 M PBS pH = 7.0. </li><li> Ritorna diapositive slide-colorazione da camera con strisce di carta bagnata. </li></ol> 3. SDH istochimica <ol><li> Preparare sotto cappa chimica 1,5 mM NBT, 130 mM sodio succinato, 0,2 PMS mM e 1,0 mM di sodio azide in 0.1 M PBS pH = 7.0. Fare attenzione a proteggere ilPMS dalla luce. Vortex rapidamente. </li><li> Applicare 150-200 ml di mezzo di incubazione di ogni diapositiva, utilizzare puntale a diffondersi in modo uniforme su tutte le sezioni. </li><li> Incubare i vetrini per 40 minuti a 37 ° C. </li><li> Rimuovere la soluzione in eccesso dalle diapositive. Lavare i vetrini 4 volte, 10 minuti ogni volta, di 0,1 M PBS pH = 7.0. </li><li> Disidratano le diapositive per 2 minuti a le seguenti concentrazioni di etanolo: 70%, 70%, 95%, 95%, 99,5%. Quindi consentire 10 minuti in un ulteriore passaggio al 99,5%. </li><li> Collocare le diapositive in xilene per 10 minuti. Montare con Neo Entellan e coprioggetto. Lasciare che il vetrini si asciughino ore durante la notte, o almeno 1-2 in una zona ventilata. </li></ol> 4. Determinazione della disfunzione mitocondriale <ol><li> La quantità di disfunzione mitocondriale è indicata dal numero di cellulare colorazione blu. Per semi-quantificare tali somme, vetrini devono essere codificati e visualizzati sotto la luce-microscopia campo. Semi-quantificazione deve essere effettuata su un cieco base utilizzando una scala, per esempio 0-4 (0, nessuna colorazione blu, 4, solo colorazione blu). E 'meglio effettuare questo tipo di semi-quantificazione in diverse sezioni di un dato soggetto / animale per calcolare un valore medio per ciascun soggetto / animale. </li><li> Le statistiche devono essere eseguiti utilizzando un test non parametrico, come Mann-Whitney o Kruskal-Wallis. </li></ol> 5. Specificità controlli appropriati <ol><li> Per i controlli di specificità per l'attività COX, ripetere "COX istochimica" passi e aggiungere 2,5 mM di sodio azide, un inibitore terminale della catena respiratoria. </li><li> Per i controlli di specificità per l'attività SDH, ripetere "SDH istochimica" passi con la rimozione di sodio succinato e l'aggiunta di 50 malonato mM, un inibitore competitivo di SDH. </li><li> Lavare e disidratare le sezioni in una serie di etanolo, e poi montare e applicare il coprioggetto le diapositive come descritto nei punti 3,4-3,6. </li></ol> 6. Rappresentante dei risultati: tenda "&gt; Lo schema complessivo della COX / SDH a ​​doppia etichettatura saggio istochimico è illustrato in Figura 2. esempi rappresentativi di appropriati COX / SDH a ​​doppia etichettatura istochimica in sezioni cerebrali da wild-type e prematuro invecchiamento topi mutatore mtDNA sono illustrate nella figura 3. La colorazione marrone scuro in topi wild-type (Figura 3, pannello di sinistra) ha mostrato la normale attività COX. cellule con difetti della catena respiratoria, indicato dalla colorazione blu, sono stati rivelati in 12 settimane di età topi mutatore mtDNA, e queste carenze si più diffusa come topi mutator mtDNA di età compresa a 46 settimane (Figura 3, il centro e il pannello di destra). Esempi di inappropriati COX / SDH a ​​doppia etichettatura in sezioni cerebrali di topi a causa di insufficiente etichettatura COX wild-type sono mostrati in figura 4. Tempo di incubazione inadeguata per la dimostrazione di attività COX, o riducendo la disponibilità di ossigeno molecolare da montavetrini la diapositiva durante l'incubazione, ha provocato una deposizione ridotta del reazione DABione del prodotto e, quindi, ha permesso per la formazione del prodotto finale formazan blu durante l'incubazione SDH. Attività COX e SDH possono essere indagati separatamente (Figura 5, sinistra e centro), ma l'etichettatura sequenziale è utile per identificare cellule con carenze COX, a causa della formazione del precipitato blu durante l'incubazione SDH (figura 3, centro e a destra). Controlli di specificità per le attività COX e SDH può essere fatto anche (Figura 5, a destra). <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/3266/3266fig1.jpg"> Figura 1. Respiratoria mitocondriale Complessi IV. La catena respiratoria mitocondriale si trova all'interno della membrana interna e comprende cinque complessi. Lo scopo della catena respiratoria è per il trasporto di elettroni dal complesso I al IV, e così facendo crea un gradiente di protoni attraverso la membrana interna utilizzata da Complesso V (ATPasi) per produrre ATP. Rosso esagoni represent subunità codificata dal mtDNA. Esagoni bianchi rappresentano subunità codificate dal DNA nucleare (si noti che Complesso II è completamente codificata dal genoma nucleare). Così, le mutazioni nel genoma mitocondriale può causare disfunzione della catena respiratoria dovuta a mutazioni nel subunità dei complessi della catena respiratoria. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/3266/3266fig2.jpg"> Figura 2. Diagramma di flusso del COX / SDH a doppia etichettatura saggio istochimico. Sezionare gli organi di interesse, rapidamente congelare i tessuti in ghiaccio secco, e conservarli a - 80 ° C. Raccogliere sezioni congelate e tiene a - 20 ° C fino al momento dell'uso. Lasciare sezioni per asciugare a temperatura ambiente per 1 ora. Preparare il mezzo di incubazione per istochimica COX, si applicano le diapositive, e incubare per 40 minuti a 37 ° C. Lavare le sezioni in PBS 4 volte per 10 minuti ogni lavaggio. Preparare il mezzo di incubazione per istochimica SDH, si applicano alle slides, e ancora incubare per 40 minuti a 37 ° C. Lavare le sezioni di nuovo in PBS, disidratano in una serie di etanolo, e poi montare e applicare il coprioggetto le diapositive. La COX / SDH a ​​doppia etichetta sezioni sono pronti a vedere in campo chiaro microscopia entro 1-2 ore. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/3266/3266fig3.jpg"> Figura 3. Esempi rappresentativi di COX / SDH a doppia etichettatura. Sezioni di cervello da wild-type e prematuramente l'invecchiamento nei topi mutatore mtDNA sono stati etichettati in modo sequenziale per le attività COX e SDH. (Bar Scala:. 200 micron) Attività normale COX (indicata dal colore marrone scuro) è stato mostrato in ippocampo di topi wild-type (a sinistra). Carenze COX (indicata dal colore blu) sono stati rivelati in ippocampo dal mtDNA topi mutatore (centro ea destra). C'è stato un ulteriore calo dell'attività COX da 46 settimane di età nel mtDNA topi mutatore, suggerendo esacerbazione diffusa di disfunzione della catena respiratoria. Il osservato mitoDisfunzione mitocondriale nel mtDNA mutator topi 12 è causato da alti livelli di mutazioni puntiformi del mtDNA come pure un aumento dei livelli di delezioni lineari 5. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/3266/3266fig4.jpg"> Figura 4. Esempi di inappropriati COX / SDH a doppia etichettatura. Sezioni di cervello da topi wild-type sono stati etichettati in modo sequenziale per le attività COX e SDH. (Bar Scala:. 200 micron) i tempi di incubazione inadeguata (10 e 25 minuti) per la dimostrazione di attività COX comportato una ridotta deposizione del prodotto marrone reazione DAB, rispetto ai 40 minuti di tempo di incubazione (a sinistra e al centro). I tempi di incubazione ridotto permesso per la formazione del prodotto finale formazan blu durante l'incubazione SDH, fuorviante suggerire la presenza di cellule con deficienze COX. Montavetrini le diapositive durante l'incubazione della COX ha portato anche nella formazione imprecise e deposizione delle reagire DABione del prodotto (a destra). <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/3266/3266fig5.jpg"> Figura 5. Ndividual I COX SDH e di etichettatura e di controllo specificità. Sezioni di cervello da topi wild-type sono stati etichettati separatamente per le attività COX e SDH, indicato dal colore marrone scuro e il colore azzurro, rispettivamente, (a sinistra e al centro). Anche se le attività COX e SDH possono essere etichettate singolarmente, l'etichettatura sequenziale si è dimostrata vantaggiosa in localizzare le cellule con disfunzione mitocondriale. Un esempio di controllo di specificità per le attività COX e SDH nel cervello da una wild-type topi ha dimostrato una mancanza di etichettatura (a destra). (Bar Scala:. 200 micron)

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Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Il combinato COX / SDH metodo istochimico permette la visualizzazione di cellule con disfunzione mitocondriale. Questa tecnica, con i primi studi risalgono al 1968, resta popolare, con molti considerato il &quot;gold standard&quot; per identificare le malattie mitocondriali nei pazienti 14,19,26,27. Ora è spesso utilizzato per indagare mutazioni del mtDNA-driven invecchiamento e patologie legate all&#39;invecchiamento 12,13,18,20,21,24. La COX / SDH a doppia etichettatura metodo viene spesso utiliz...

<table border="1"><tr><td> Nome del reagente </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti (opzionale) </td></tr><tr><td> Ghiaccio secco </td><td> AGA Gas AB </td><td> blocco modulo </td><td></td></tr><tr><td> Isopentano (2-metilbutano) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 277258 CAS: 78-78-4 </td><td></td></tr><tr><td> Cyrostat embedding soluzione </td><td> Sakura Finetek </td><td> Tissue Tek 4583 </td><td></td></tr><tr><td> Criostato </td><td> Microm </td><td> Microm modello HM 500M </td><td></td></tr><tr><td> Diapositive </td><td> Thermo Scientific </td><td> Super gelo Plus. Menzel Gläser J1800AMWZ </td><td></td></tr><tr><td> Coprire gli occhiali Vetro borosilicato </td><td> VWR International </td><td> 16004-098 </td><td> 24 x 50 mm </td></tr><tr><td> Filtro di carta </td><td> Munktell Filtro AB </td><td> Qualità: 1350 ArticoloNumero: 242 001 </td><td> 430 x 430 mm </td></tr><tr><td> 3,3 &#39;-diaminobenzidina tetraidrocloruro (DAB) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> Sigma sistema substrato liquido, D7304 </td><td></td></tr><tr><td> Citocromo c (Tipo III, dal cuore equino) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C2506 CAS: 9007-43-6 </td><td></td></tr><tr><td> Bovina catalasi (dal fegato) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C9322 CAS: 9001-05-2 </td><td></td></tr><tr><td> Tetrazolio (NBT) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> N6876 CAS: 298-83-9 </td><td></td></tr><tr><td> Sodio succinato </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S2378 CAS: 6106-21-4 </td><td></td></tr><tr><td> Phenazine methosulfate (PMS) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P9625 CAS: 299-11-6 </td><td> PMS è sensibile alla luce. Scudo dalla luce. </td></tr><tr><td> Di sodio azide </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S8032 CAS: 26628-22-8 </td><td></td></tr><tr&gt; <td> Xilene </td><td> VWR International </td><td> EM-XX0060-4 </td><td></td></tr><tr><td> Entellan </td><td> VWR International </td><td> 100503-870 </td><td></td></tr><tr><td> Malonato (Acido malonico) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M1296 CAS: 141-82-2 </td><td></td></tr></table>

visualizzazione della funzione respiratoria mitocondriale utilizzando citocromo c ossidasi / succinato deidrogenasi (cox / sdh) doppio etichettatura istochimica

Visualization of Mitochondrial Respiratory Function using Cytochrome C Oxidase / Succinate Dehydrogenase (COX/SDH) Double-labeling Histochemistry

DNA mitocondriale (mtDNA) difetti sono una causa importante di malattia e può essere alla base dell&#39;invecchiamento e all&#39;invecchiamento 1,2 alterazioni. La teoria mitocondriale dell&#39;invecchiamento suggerisce un ruolo per le mutazioni del mtDNA, che possono alterare l&#39;omeostasi bioenergetica e la funzione cellulare, nel processo di invecchiamento 3. Una ricchezza di prove è stato redatto a sostegno di questa teoria 1,4, un esempio è il mtDNA mutator mouse 5, tuttavia, il ruolo preciso dei danni del DNA mitocondriale nell&#39;invecchiamento non è del tutto compreso 6,7. Osservando l&#39;attività degli enzimi respiratori è un approccio semplice per lo studio disfunzione mitocondriale. Complesso IV o citocromo c ossidasi (COX), è essenziale per la funzione mitocondriale. La subunità catalitica del COX sono codificati da mtDNA e sono essenziali per l&#39;assemblaggio del complesso (Figura 1). Così, la sintesi corretta e la funzione sono in gran parte sulla base di mtDNA integrità 2.Anche se altri complessi respiratori potrebbero essere indagati, Complessi IV e II sono i più suscettibili di esame istochimico 8,9. Complesso II, o succinato deidrogenasi (SDH), è interamente codificato dal DNA nucleare (Figura 1), e la sua attività non è in genere affetti da compromissione del mtDNA, anche se un aumento potrebbe indicare la biogenesi mitocondriale 10-12. Il mtDNA alterato osservati in malattie mitocondriali, invecchiamento e malattie legate all&#39;età conduce spesso alla presenza di cellule con scarsa o assente attività COX 2,12-14. Anche se le attività COX e SDH possono essere analizzati individualmente, il sequenziale a doppia etichettatura 15,16 metodo ha dimostrato di essere vantaggioso per localizzare le cellule con disfunzione mitocondriale 12,17-21. Molte delle costituzioni ottimale del test sono stati determinati, come la concentrazione del substrato, accettori di elettroni / donatori, intermedio trasportatori di elettroni, l&#39;influenza del pH, e t reazioneime 9,22,23. 3,3 &#39;-diaminobenzidina (DAB) è un donatore di elettroni efficace ed affidabile 22. Nelle cellule con il funzionamento della COX, il marrone indamine polimero prodotto sarà localizzare in creste mitocondriali e saturare le cellule 22. Queste cellule disfunzionali con COX quindi non sarà saturata dal prodotto DAB, consentendo la visualizzazione di attività SDH con la riduzione del tetrazolio (NBT), accettore di elettroni, di un blu prodotto finale formazan 9,24. Citocromo c e substrati succinato di sodio vengono aggiunte per normalizzare i livelli endogeni tra controllo e malati / mutante tessuti 9. Catalasi viene aggiunto come precauzione per evitare possibili reazioni contaminazione da attività di perossidasi 9,22. Methosulfate Phenazine (PMS), un vettore intermedio di elettroni, viene utilizzato in combinazione con sodio azide, un inibitore della catena respiratoria, per aumentare la formazione di prodotti di reazione finale di 9,25. Nonostante questo informarezione, alcuni dettagli fondamentali che influenzano il risultato di questo test conveniente semplice, in aggiunta ai controlli specificità e avanzamenti nella tecnica, non sono ancora stati presentati.

Il citocromo c ossidasi / sodio deidrogenasi (COX / SDH) doppio metodo di etichettatura permette di visualizzare direttamente mitocondriale deficit enzimatici respiratori nei fresco congelato sezioni di tessuto. Questa è una tecnica semplice istochimiche ed è utile nelle indagini malattie mitocondriali, invecchiamento e patologie legate all&#39;invecchiamento.

Visualizzazione della funzione respiratoria mitocondriale utilizzando Citocromo C Ossidasi / succinato deidrogenasi (COX / SDH) Doppio etichettatura Istochimica

I difetti del DNA mitocondriale (mtDNA) rappresentano un'importante causa di patologia e possono essere alla base dell'invecchiamento e delle alterazioni correlate all'età 1,2. La teoria mitocondriale di...

L'obiettivo generale di questa procedura è consentire la visualizzazione diretta delle carenze degli enzimi respiratori mitocondriali in sezioni di tessuto fresco congelato. Questo viene ottenuto innanzitutto raccogliendo sezioni criostatiche dall'organo di interesse. Il secondo passaggio della procedura consiste nell'eseguire l'istochimica della Cox, seguita dall'istochimica della SDH.Infine, le sezioni di tessuto vengono disidratate, montate e coperte con un vetrino. In definitiva, i risultati possono mostrare il grado di disfunzione mitocondriale in base all'intensità della colorazione blu cellulare. Ciao. Oggi parleremo della tecnica istochimica di doppia marcatura Cox-SCH.E mentre questo metodo può essere applicato per lo studio delle malattie mitocondriali, può anche fornire informazioni sull'invecchiamento e sui disturbi correlati all'età. Dopo aver rimosso il cervello da un animale sacrificato in conformità al permesso etico, congelarlo rapidamente su ghiaccio secco. Il tessuto congelato può essere conservato a meno 80 gradi Celsius, avvolto in foglio di alluminio, fino al momento del sezionamento.Preparare il tessuto per la criosezione posizionando il cervello su un mandri

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La microscopia confocale a scansione viene applicato per l'imaging eventi mitocondriali singoli in cuore perfuso o muscoli scheletrici in animale vivo. Monitoraggio in tempo reale dei processi mitocondriali singoli, come vampate di superossido e di membrana potenziali fluttuazioni consente la valutazione della funzione mitocondriale in un contesto fisiologicamente rilevanti e durante le perturbazioni patologiche.

Imaging confocale delle singole mitocondriali superossido illumina di cuore intatto o In Vivo

Vi presentiamo un protocollo di come raccogliere e elettrone processo di crio-tomografie di tutta mitocondri. La tecnica fornisce approfondimenti dettagliati sulla struttura, funzione, e l'organizzazione di grandi complessi proteici di membrana nelle membrane biologiche autoctone.

Visualizzazione di ATP sintetasi Dimeri nei mitocondri da Electron Cryo-tomografia

Sono descritti metodi per la biopsia di vasto laterale, la preparazione dei mitocondri purificati, e profilatura respirometrico. L'uso di piccolo volume muscolare rende questa tecnica adatta per applicazioni di ricerca clinica.

Preparazione e respirometrici valutazione dei mitocondri isolati dal tessuto muscolare scheletrico Ottenuto dalla biopsia percutanea

Ad alta risoluzione respirometria è utilizzato per determinare il consumo di ossigeno mitocondriale. Questa è una tecnica semplice per determinare mitocondriale complessi della catena respiratoria '(I-IV) frequenza respiratoria, la capacità del sistema di trasporto degli elettroni mitocondriale massima, e l'integrità della membrana mitocondriale esterna.

Ad alta risoluzione respirometria mitocondriale per valutare la funzione in permeabilizzate e cellule intatte

Presentiamo un protocollo per studiare la distribuzione di mitocondri e reticolo endoplasmico in intere cellule dopo la modificazione genetica utilizzando la microscopia elettronica di luce e volume correlata, tra cui l'ascorbate perossidasi 2 e la colorazione della perossidia di rafano, sezionamento seriale di cellule con e senza il gene bersaglio nella stessa sezione e imaging seriale tramite microscopia elettronica.

Mitocondri e reticulum imaging endoplasmico di microscopia elettronica di luce correlata e volume

Abbiamo sviluppato un protocollo pratico e un approccio analitico per valutare la fosforilazione ossidativa mitocondriale e la capacità di trasferimento di elettroni negli omogeneizzati tumorali freschi. Questo protocollo può essere facilmente adattato per esaminare varie funzioni mitocondriali che contribuiscono all'inizio, alla progressione e alla risposta al trattamento del cancro.

Determinazione analitica della funzione mitocondriale degli omogeneizzati tumorali solidi asportati

La respirometria ad alta risoluzione accoppiata a sensori di fluorescenza determina il consumo di ossigeno mitocondriale e la generazione di specie reattive dell'ossigeno (ROS). Il presente protocollo descrive una tecnica per valutare le frequenze respiratorie mitocondriali e la produzione di ROS nel nervo sciatico permeabilizzato.

Valutazione della funzione mitocondriale nel nervo sciatico mediante respirometria ad alta risoluzione

Questo protocollo descrive un test comparativo, utilizzando attività complesse mitocondriali CI+CIII e CII+CIII in presenza o assenza di Na+, per studiare l'esistenza di pool di CoQ funzionali parzialmente segmentati.

La sensibilità della membrana mitocondriale interna a Na+ rivela pool di CoQ funzionali parzialmente segmentati

Qui, presentiamo una raccolta di saggi per misurare direttamente la funzione mitocondriale nelle cellule di mammifero indipendentemente dalla loro capacità di consumare ossigeno molecolare.

Saggi indipendenti dall'ossigeno per misurare la funzione mitocondriale nei mammiferi

Questo protocollo presenta un flusso di lavoro per la propagazione, la differenziazione e la colorazione di cellule SH-SY5Y in coltura e neuroni ippocampali primari di ratto per la visualizzazione e l'analisi dell'ultrastruttura mitocondriale utilizzando la microscopia a deplezione di emissione stimolata (STED).

Utilizzo dell'imaging STED su cellule vive per visualizzare l'ultrastruttura della membrana interna mitocondriale in modelli di cellule neuronali

Qui, descriviamo un metodo completo per misurare la fosforilazione ossidativa mitocondriale in fibre muscolari scheletriche fresche permeabilizzate da muscolo umano o di topo. Questo metodo consente la quantificazione in tempo reale della respirazione mitocondriale e la valutazione della preferenza per il carburante e della flessibilità metabolica, preservando le reti mitocondriali esistenti e l'integrità della membrana.

Misurazione della respirazione mitocondriale nelle fibre muscolari scheletriche umane e di topo mediante repirometria ad alta risoluzione

Scopri la doppia marcatura istochimica COX/SDH per visualizzare le carenze enzimatiche respiratorie mitocondriali in sezioni di tessuto congelato fresco. Questa tecnica aiuta a diagnosticare malattie mitocondriali e disturbi legati all'invecchiamento.

Visualizzazione della funzione respiratoria mitocondriale utilizzando Citocromo C Ossidasi / succinato deidrogenasi (COX / SDH) Doppio etichettatura Istochimica (Video) | JoVE Journal

Visualizzazione della funzione respiratoria mitocondriale utilizzando Citocromo C Ossidasi / succinato deidrogenasi (COX / SDH) Doppio etichettatura Istochimica

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