Summary
Een tweetraps methode om chronische nierziekte (CKD) in de Lewis rat vast door operatief verwijderen 5/6th van renale massa wordt beschreven. Combinatie van de chirurgische procedure, NOS-remming en een hoge zoutconcentratie dieet leidt tot een model lijkt op menselijke CKD, waardoor studie van causale mechanismen en de ontwikkeling van nieuwe behandelingen.
Abstract
Chronische nierziekte (CKD) is een wereldwijd probleem. Vertragen CKD progressie is een belangrijke prioriteit voor de gezondheid. Aangezien CKD wordt gekenmerkt door complexe verstoringen van homeostase, integratieve diermodellen noodzakelijk om ontwikkeling en progressie van CKD bestuderen. Om de ontwikkeling van CKD en nieuwe therapeutische interventies bij CKD bestuderen, gebruiken we de 5/6th nefrectomie ablatie-model, een bekend experimenteel model van progressieve nierziekte, die lijkt op een aantal aspecten van het menselijk CKD. De bruto vermindering van de renale massa veroorzaakt progressieve glomerulaire en tubulo-interstitiële schade, verlies van overblijvende nefronen en de ontwikkeling van systemische en glomerulaire hypertensie. Het is ook geassocieerd met progressieve intrarenaal capillaire verlies, ontsteking en glomerulosclerose. Risicofactoren voor CKD steevast invloed op de endotheelfunctie. Om dit na te bootsen, combineren we het verwijderen van 5/6th van renale massa met stikstofmonoxide (NO) uitputting en een hoog zout dieet. Na aankomst en acclimatisatie, dieren opnieuwontvangstbericht NO synthase remmer (NG-nitro-L-arginine) (L-NNA) aangevuld in drinkwater (20 mg / L) gedurende 4 weken, gevolgd door rechtszijdige uninephrectomy. Een week later, wordt een subtotaal nefrectomie (SNX) uitgevoerd aan de linkerkant. Na SNX, worden dieren toegelaten om te herstellen voor twee dagen, gevolgd door LNNA in drinkwater (20 mg / L) voor een periode van 4 weken. Een hoog zout dieet (6%), aangevuld in de grond chow (zie tijdslijn figuur 1), wordt voortgezet gedurende het experiment. De progressie van nierfalen wordt gevolgd in de tijd door het meten van plasma-ureum, systolische bloeddruk en proteïnurie. Door zes weken na SNX heeft nierfalen ontwikkelde. Nierfunctie wordt gemeten met behulp van 'gouden standaard' inuline en para-amino hippuurzuur (PAH) klaring technologie. Dit model van CKD wordt gekenmerkt door een vermindering van de glomerulaire filtratiesnelheid (GFR) en de effectieve renale plasma flow (ERPF), hypertensie (systolische bloeddruk> 150 mmHg), proteïnurie (> 50 mg/24 uur) En milde uremie (> 10 mM). Histologische kenmerken zijn tubulo-interstitiële schade weerspiegeld door een ontsteking, tubulaire atrofie en fibrose en focale glomerulosclerose leidt tot massale vermindering van gezonde glomeruli binnen de resterende populatie (<10%). Follow-up tot 12 weken na SNX toont verdere progressie van CKD.
Introduction
Door zijn progressieve aard, voortvloeiende eindstadium nierziekte, en bijbehorende cardiovasculaire morbiditeit en mortaliteit, CKD is een groeiend probleem voor de volksgezondheid 1. Vertragen CKD progressie is daarom een belangrijke prioriteit voor de gezondheid. Aangezien CKD wordt gekenmerkt door complexe verstoringen van homeostase, integratieve diermodellen noodzakelijk om ontwikkeling en progressie van CKD bestuderen. De nier bestaat uit een groot aantal verschillende celtypen met elkaar. Deze complexiteit kan niet worden nagebootst in vitro.
Om nieuwe therapeutische interventies bestuderen in CKD, gebruiken we de 5/6th nefrectomie ablatie-model, een bekend experimenteel model van progressieve nierziekte, die lijkt op een aantal aspecten van het menselijk CKD 2,3. De bruto vermindering van de renale massa veroorzaakt progressieve glomerulaire en tubulo-interstitiële schade, verlies van overblijvende nefronen en de ontwikkeling van systemische en glomerulaire hypertensie. Het wordt geassocieerd met progressive intrarenale capillaire verlies 4, ontsteking en glomerulosclerose. Risicofactoren voor CKD steevast invloed op de endotheelfunctie 5. We gebruikten een rat stam (Lewis) die relatief resistent tegen de ontwikkeling van CKD dus combineerden we verwijderd 5/6th van niermassa met stikstofoxide (NO) uitputting 6, 7, 8 en een hoog zoutdieet 9. Na aankomst en acclimatisatie, dieren krijgen een NO-synthase remmer (L-NNA) aangevuld tot drinkwater (20 mg / L) voor een periode van 4 weken, gevolgd door een recht eenzijdig uninephrectomy (UNX) met voortzetting van L-NNA na twee dagen . Een week later, wordt subtotaal nefrectomie (SNX) dwz verwijdering van 2/3e van renale massa uitgevoerd op de linkerkant. Na SNX worden dieren men herstellen gedurende 2 dagen, gevolgd door nogmaals 20 mg / L LNNA in drinkwater gedurende 4 weken. Een hoog zout dieet (6%), aangevuld in de grond chow (zie tijdslijn figuur 1), wordt voortgezet gedurende het experiment. Thij redenen de UNX voeren op de rechterkant en de SNX aan de linkerkant is de niervaten langer aan de linkerkant die het gemakkelijker maakt toegang tot de nier zonder de vaten strekken te veel als de nier wordt blootgesteld buiten het lichaam . In de literatuur worden beschreven modellen waarbij de polen van de linker nier eerst worden verwijderd, gevolgd door UNX van de rechter nier een week later 10,11,12. In onze handen bleek bij dit model een veel snellere ontwikkeling van nierfalen, maar ook een veel grotere variatie in verlies van nierfunctie. De progressie van nierfalen wordt gevolgd in de tijd door het meten van plasma-ureum, systolische bloeddruk en proteïnurie. Door zes weken na SNX heeft nierfalen ontwikkeld, gekenmerkt door duidelijke vermindering van glomerulaire filtratiesnelheid (69%) en een effectieve renale plasmastroom (62%) 13 hypertensie (systolische bloeddruk> 150 mmHg), proteïnurie (> 50 mg/24 hr) en milde uremie (> 10 mM). Histologische kenmerken zijn Tubulo-interstitiële schade weerspiegeld door een ontsteking, tubulaire atrofie en fibrose en focale glomerulosclerose leidt tot massale vermindering van gezonde glomeruli binnen de resterende populatie (<10%). Follow-up tot 12 weken na SNX toont verdere progressie van CKD, het verstrekken van een window of opportunity voor de evaluatie van therapeutische interventies.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle experimenten worden uitgevoerd in overeenstemming met het dier experimentele ethische richtlijnen van de Utrechtse proefdier commissie. Het protocol wordt uitgevoerd onder de leiding en goedkeuring van de auteur instelling dierlijke zorg en gebruik commissie.
CKD wordt geïnduceerd in mannelijke inteelt Lewis ratten (Charles River, Sulzfeld, Duitsland) op de leeftijd van 8 weken. Ratten worden gehuisvest onder standaard omstandigheden in een licht, temperatuur en vochtigheid geregelde omgeving.
1. Operatie Voorbereiding
- Steriliseren chirurgische instrumenten:
- 1 student weefsel tang 1-2 tanden 12 cm
- 1 student standaardpatroon tang
- 2 Semken tang
- 1 Mayo schaar
- 1 student iris schaar
- 1 Olsen-Hegar naaldhouder met een schaar
- Deken
- Controleer inventarislijst:
- Operatietafel met warming pad en lamp
- O
- Weefsels
- Scheerapparaat
- Weegschaal
- Steriele operatiekamer set
- Steriel gaas 5x5 en 10x10
- 70% alcohol
- 0,9% NaCl-oplossing
- 1 ml spuit
- Naalden (25G)
- Gel foam pads: Spongostan
- Vicryl 4.0 en 5.0
- Buprenorfine 0,03 mg / kg (1:10 verdund in fysiologisch zout)
- Schone kooi voor ratten na de operatie
2. Right Side Uninephrectomy
- Ontsmet de tafel met 70% alcohol.
- Plaats rat in inductie doos en induceren anesthesie met 4% isofluraan en 1 liter stroom van O 2. Opmerking: afhankelijk van de rat gebruikte stam, zijn pre-en peri-operatieve analgesie voorgeschreven, moet dit met de lokale dierenarts te bespreken.
- Overdragen rat aan tafel en plaats neus in kegel. De rat en de neuskegel zijn op een verwarmingselement geplaatst om de lichaamstemperatuur van de rat te behouden. De rat is geventileerd met een mengsel van 2% isofluraan en 1 liter O 2.
- Scheer de flank van de rat en te desinfecteren met alcohol. Was en desinfecteer handen en draag steriele chirurgische handschoenen. Draag een hoofdkap en een masker. Maak een 1-1,5 cm incisie evenwijdig aan de ribben met behulp van anatomische pincet en botte schaar. Expose de nier door stompe dissectie van de rugspieren.
- De onderste pool van de nier is zichtbaar, zorgvuldig gebruik maken van de kleine stompe tang om de perirenaal vetweefsel grijpen. Externaliseren de nier door zachtjes te trekken op de perirenaal vet met een tang. Zorg ervoor dat de bijnier tijdens deze procedure niet storen. De bijnier kan gemakkelijk worden verwijderd door een pincet op de mediale site in het vetweefsel en voorzichtig omhoog bewogen tussen de bijnier en de nier zoals weergegeven in figuur 2.
- Plaats nier zachtjes op gaas en helder van omringende vet en bindweefsel. Identificeer de nierslagader en ader en plaats een ligatuur (5.0vicryl) met een enkele knoop rond de vaten, maar niet afhechten de knoop.
- Verplaats de losse knot voorzichtig langs de vaten naar de aorta met ongeveer 0,5 cm, de ruimte tussen de nier en de knoop te creëren. Dit wordt gedaan om de ligatuur wegglijdt na snijden.
- Bind knoop met twee dubbele knopen. Als perfusie gestopt, zal de kleur van de nier onmiddellijk bruin veranderen. Niet knippen de uiteinden van de ligatuur.
- Snijd de renale vaten dichtbij de nier en verwijder de nier. Trek voorzichtig aan de lange zijden van de ligatuur te controleren op bloedingen van de renale vaten. De ligatuur moet blijven in plaats op het schip. Snijd de lange uiteinden van de ligatuur. Merk op, het overblijfsel niervaten trekken onmiddellijk in de buikholte.
- Dep weggesneden nier drogen en wegen.
- Sluit de skeletspieren incisie met hechtingen lopen met Vicryl 5.0. Injecteer 0,10 ml (0,03 mg / kg) buprenorfine im in de achterste ledematen. Sluit dehuid met Vicryl 4.0 met intracutane hechtingen. Dit voorkomt het openen van de ratten wond. Opmerking: als gevolg van respiratoire depressie bij Lewis ratten, geven we alleen postoperatieve analgesie net voor het uitschakelen van de isofluraan.
- Huisvesten van de rat in een schone eenzame kooi met gemakkelijke toegang tot voedsel en water. Plaats de kooi helft op aarde pad O / N en controleer de rat zorgvuldig de volgende dag. Wanneer de wond wordt gesloten en de rat actief, gewoonlijk tussen 6 en 12 uur na de operatie, kan de rat worden teruggeplaatst in groepshuisvesting.
3. Left Side Subtotaal Nephrectomy
- Zeven dagen later, worden dezelfde voorbereidingen aan de linkerzijde als de rechterzijde beschreven 2,1-2,5. Voor de operatie wordt de hoeveelheid nierweefsel die moet overeenkomen met ongeveer 2/3e van het gewicht van de rechter nier verwijderd worden berekend. Bereid kleine stukjes gel schuim (Spongostan, Johnson & Johnson, New Jersey) voor de operatie. Plaats scherpe schaar rond het bovenste pool van de linker nier en resect de bovenste paal in een slag (voor schaar locatie, zie figuur 3). Bedek onmiddellijk met een stukje gel schuim en oefenen lichte druk met een steriel gaasje.
- Herhaal dit met de onderste pool van de nier als in 3.3.
- Til nier te klonteren op de huid te voorkomen. Handhaaf milde druk op zowel gel foam pads met een steriel gaasje totdat het bloeden stopt. Bij het bloeden aanhoudt, voeg een ander foam pad.
- Plaats overblijfsel nier met aanhangend gel foam pads in de buik. Sluit de spieren en de huid en volg 2,9-2,12.
4. Sham Chirurgie
- Sham bediende ondergaan dezelfde procedure om de nieren bloot te leggen. In plaats van het uitroeien van de nier of het snijden van de polen een week later, zijn zowel de nieren ontkapseld op een interval, de zorg niet aan de bijnieren verstoren. Wondsluiting en post-operatieve zorg zijn identical om 2.11 en 2.12.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Na subtotaal nefrectomie ongeveer 1/6e van de totale nierweefsel overblijft. Figuur 4 toont het gewicht van het verwijderde gedeelte van de rechter nier met gemiddelde en standaardafwijking twee eerdere experimenten. Men moet in gedachten houden dat in de week na UNX, hypertrofie van de linker nier plaatsvindt, blijkt dat het gewicht dat verwijderd moet worden berekend op basis van het gewicht van de rechter nier altijd resulteert in minder dan 5/6th verwijderen. Aangezien het niet mogelijk is het gewicht van de linker nier tijdens de operatie bepalen, dit is de meest nauwkeurige manier om ongeveer 5/6th van de oorspronkelijke niermassa verwijderen.
Na verloop van tijd, ratten met CKD ontwikkelen hypertensie, uremie, bloedarmoede, proteïnurie en een significante daling van GFR en ERPF. Na 6 weken, heeft vastgesteld CKD ontwikkeld, een geschikte tijd-punt te redden interventies te testen. Na verloop van tijd, wordt een sterke progressie van hypertensie en proteïnurie waargenomen terwijl hematocrieten nierfunctie (GFR en ERPF) tonen milde verslechtering (figuur 5). Andere symptomen die we niet focussen op in onze experimenten zijn verstoringen in het calcium-fosfaat-en vetstofwisseling, en vele anderen. Afhankelijk van de stam van ratten, kan ontwikkeling van CKD sterk verschillen 14, 15, 2. Wij voegden de hoge zout dieet en een NO blocker om hypertensie en endotheliale dysfunctie veroorzaken.
De progressie van nierfalen wordt bijgehouden door inzameling van de urine (voor het meten van de hoeveelheid eiwitten en creatinine), bloed (plasma ureum en creatinine) en systolische bloeddruk. We beseffen dat de ontwikkeling van hypertensie kan nauwkeuriger worden gevolgd bij het gebruik van telemetrie in plaats van de staart manchet plethysmografie. Creatinineklaring kan worden berekend, maar heeft de neiging om de daling van de GFR onderschatten vanwege het omvangrijke tubulaire secretie van creatinine bij ratten 16, onderstrepen het belang van de gouden standaard methode om de nierfunctie te bepalen door inuline en PAH speling 17, 18, 19. Koeners et al.. beschreef de volledige procedure 20. Inuline en PAH klaring worden berekend uit de concentratie in de urine (U), urinestroom (V) en de plasma concentratie (P). We toonden eerder een duidelijke vermindering van de GFR en ERPF in dit model met behulp van klassieke klaring technologie, terwijl dit was minder duidelijk uit veranderingen in plasma creatinine, plasma ureum of creatinine klaring 13.
Figuur 1. Tijdslijn van de L-NNA, hoge zout dieet, UNX en SNX. Longitudinale metingen om de nierfunctie en de beëindiging tijd-punt te bepalen worden aangegeven. Bij een langere follow-up is nodig na SNX, kan 6% NaCl dieet worden voortgezet in de tijd.
98fig2.jpg "/>
Figuur 2. Bijnier dissectie. Om de bijnier te verwijderen zonder ze te storen, plaats tang in het vet tussen de nier en de bijnier en de beweging van het schip paal boven aan de top als aan te geven door de rode lijn. Figuur aangepast van het 20e Amerikaanse editie van Gray's Anatomy van het menselijk lichaam, 1918.
Figuur 3. Subtotaal nefrectomie. Rode lijnen geven snijkanten. Figuur aangepast van het 20e Amerikaanse editie van Gray's Anatomy van het menselijk lichaam, 1918.
Figuur 4. Percentage verwijderd nierweefsel na subtotaal nefrectomie in twee verschillende experimenten. Exp 1, n = 16, exp 2, n = 23.
Figuur 5. Ontwikkeling van nierfalen CKD ratten 6 weken na beëindiging SNX (sdashed lijnen n = 5) versus gezonde controles (n = pdashed lijn 5) en CKD ratten beëindigd na 12 weken SNX (£ n = 8) versus gezonde controles (• n = 8). CKD ratten kregen L-NNA tot week 4 en hoog zout dieet van week 1 tot beëindiging (niet in grafieken weergegeven). SNX induceert hypertensie (gemeten tailcuff plethysmografie) (A), uremie (B), anemie (C) en proteïnurie (D) en duidelijke vermindering van GFR (E) en ERPF (F) 13. * Aangegeven p <0,05 versus gezonde controles voor elk tijdstip getest door twee-weg ANOVA met Bonferroni post-test voor grafieken A, B en D. Grafieken C, E en F worden getest met een tweezijdiget-test voor 6 en 12 weken tijdstip. Klik hier om een grotere afbeelding te bekijken .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Chirurgische verwijdering van 5/6th van nierweefsel in de Lewis rat, gecombineerd met een hoge zoutconcentratie dieet en tijdelijke NOS remming leidt tot een model van CKD dat menselijke CKD lijkt en maakt studie van causale mechanismen en effectiviteit van therapeutische interventies bij CKD.
De 5/6th nefrectomie model is een bekende en uitvoerig beschreven model voor CKD. Echter, simpelweg verwijderen van 5/6th van renale massa niet leiden tot een onmiddellijke nierfalen in alle ratten stammen. We gebruiken Lewis ratten om de effecten van cel-gebaseerde therapieën in CKD de beschikbaarheid van GFP + Lewis ratten 21 studie laat cellen volgen van toegediende donor cellen in de ontvanger (nonGFP +) rat. De Lewis rat is relatief resistent tegen de ontwikkeling van nierschade en de ontwikkeling van CKD is traag in vergelijking met andere stammen 22, 15. Daarom combineren we het verwijderen van 5/6th van renale massa met NO uitputting en een hoog zout dieet, omdat dit lijkt op een aantal aspecten van het menselijk CKDzoals hoge zoutinname en endotheliale dysfunctie. Lezers moeten in gedachten houden dat de behoefte aan het combineren 5/6th nefrectomie met een hoog zout dieet en / of NO depletie hangt af van de stam van ratten gebruikt voor de experimenten.
We voerden 5/6th nefrectomie in een twee-staps procedure in plaats van een een-stap procedure dit beschouwd als minder belastend voor het dier, wordt geassocieerd met minder operatie mortaliteit en de voorkeur van onze dierexperimentele commissie. We liever flank insnijding plaats laparatomy de nieren bereiken laparotomie wordt geassocieerd met een hoger risico van wondinfectie, loszittende steken, subcutane herniatie en verklevingen de darmen opzichte flank incisie. Bovendien, als het experimenteel ontwerp houdt een interventie met laparotomie - zoals het geval is in onze experimentele studies voor het beheer van beenmergcellen in de nierslagader van het overblijfsel nier-presterende laparotomieën voor SNX is niet voorafverhandelbare als herhaalde laparotomie moet worden vermeden.
Na chirurgische verwijdering van 5/6th van renale massa, kan een aantal kritieke problemen voordoen. Tijdens UNX kunnen er moeilijkheden stabiliseren de nier omdat de omringende vet zal gemakkelijk los. Twee methoden kunnen worden gebruikt om de nier blootgesteld. 1) Gebruik kleinere tang om grip op de renale vaten krijgen door zachtjes naar beneden van de onderste pool van de nier naar de bloedvaten en trek totdat je de nieren kan stabiliseren. 2) Gebruik stompe tang om trek voorzichtig de nier uit de buik. Wanneer de nier wordt blootgesteld, kan gaas worden gebruikt om het bloeden die kunnen optreden tijdens deze procedure afbreken. Om bloeden te voorkomen, beginnen te trekken het vet bij de onderste pool van de nier, waar het vet sterk aan de nier.
Het is belangrijk om ruimte tussen de knoop rond renale vaartuig en nieren bloeden na verwijdering van de nier te voorkomen creëren de knoop kan glijdende niervaten door de inkomende bloedstroom snel vullen van de buik met bloed. Een gaas kan worden gebruikt om het bloed te verwijderen en te worden uitgeoefend om het bloeden te stoppen. Gebruik een tang om de renale grijpen en plaats een nieuwe ligatuur. Bij een gestoorde schepen niet te herleiden zijn, handhaven de druk tot bloeden is gestopt. Voeg 1 ml van fysiologisch zout uitdroging door bloeden in de buikholte voorkomen en wacht ongeveer 5 minuten voor het sluiten van de spieren en huidlaag. Monitor rat extra voorzichtig voor de volgende dagen. Wanneer de ligatuur is nog op zijn plaats na verwijdering van de nier, maar renale vaten worden bloeden, kan de lange uiteinden van de ligatuur worden gebruikt om afhechten de schepen.
Wanneer na dissectie van de polen, ondanks houden de druk op gel foam pads als de bloeding aanhoudt, is dit waarschijnlijk te wijten aan schade aan een groot nierslagader of het nierbekken. Deze bloeding kan worden gestopt door het plaatsen van nieuwe gel foam pads op de wond, zorg niet te bewegende foam pad tijdens het optillen van de rest omdat de grotere schepen zijn dicht bij de navel, en wachten voor een langere periode.
Bloed in de urine worden getraceerd tot 2 dagen na de operatie. Wanneer het nierbekken beschadigd of grote nier vaartuig blijft bloeden, zal er een blijvende spoor van hematurie zijn. Ratten met persisterende hematurie na operatie moet euthanized omdat het niet mogelijk om het bloeden te stoppen. Als hematurie wordt waargenomen op een later tijdpunt na de operatie, die kan optreden binnen 2 weken na de operatie moet de ratten worden gedood omdat bloed is gestold in het nierbekken en uiteindelijk verstoppen de ureter en blaas, leidt tot obstructie.
Bij snellere ontwikkeling van nierfalen is vereist, kan het protocol worden omgekeerd, dat wil zeggen eerst de polen gevolgd door uninephrectomy een week later te verwijderen. Deze omgekeerde model gebruikt in andere rattenstammen, zie bijvoorbeeld Liu et al..
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Auteurs hebben niets te onthullen.
Acknowledgments
Wij danken Krista den Ouden voor haar uitstekende technische bijstand. Deze techniek werd financieel ondersteund door de Nederlandse Nierstichting, subsidie C06.2174. MCV wordt door Nederland ondersteunde organisatie voor Wetenschappelijk Onderzoek (NWO) Vidi-subsidie 016.096.359.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagent | |||
| L-NNA | Sigma-aldrich | N5501 | |
| Spongostan dental: gel foam pads 1x1x1 cm | Johnson&Johnson | Ms0005 | |
| Ethicon Vicryl FS-2S naald 4/0 V392H p/36 | Ethicon | V303H | |
| Ethicon Vicryl RB-1+ naald 5/0 V303H p/36 | Ethicon | V392H | |
| Buprenorphine (0.3 mg/ml) | Via local pharmacist ordered by Reckitt Benckiser pharmaceuticals | unknown | |
| Equipment | |||
| Student Tissue Forceps - 1x2 Teeth 12 cm | Fine Science Tools (FST) | 91121-12 | |
| Student Standard Pattern Forceps | FST | 91100-12 | |
| Mayo Scissors | FST | 14010-15 | |
| 2X Semken Forceps | FST | 11008-13 | |
| Student Iris Scissors | FST | 91460-11 | |
| Olsen-Hegar Needle Holder | FST | 12002-14 | |
|
|||
References
- AS, G. o, Chertow, G. M., Fan, D., McCulloch, C. E., Hsu, C. Y. Chronic kidney disease and the risks of death, cardiovascular events, and hospitalization. N. Engl. J. Med. 351 (13), 1296-1305 (2004).
- Fleck, C., Appenroth, D., et al. Suitability of 5/6 nephrectomy (5/6NX) for the induction of interstitial renal fibrosis in rats--influence of sex, strain, and surgical procedure. Exp. Toxicol. Pathol. 57 (3), 195-205 (2006).
- Griffin, K. A., Picken, M. M., Churchill, M., Churchill, P., Bidani, A. K. Functional and structural correlates of glomerulosclerosis after renal mass reduction in the rat. J. Am. Soc. Nephrol. 11 (3), 497-506 (2000).
- Kang, D. H., Kanellis, J., et al. Role of the microvascular endothelium in progressive renal disease. J. Am. Soc. Nephrol. 13 (3), 806-816 (2002).
- Baylis, C. Nitric oxide synthase derangements and hypertension in kidney disease. Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. 21 (1), 1-6 (2012).
- Bongartz, L. G., Braam, B., et al. Transient nitric oxide reduction induces permanent cardiac systolic dysfunction and worsens kidney damage in rats with chronic kidney disease. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 298 (3), 815-823 (2010).
- Fujihara, C. K., De N, G., Zatz, R. Chronic nitric oxide synthase inhibition aggravates glomerular injury in rats with subtotal nephrectomy. J. Am. Soc. Nephrol. 5 (7), 1498-1507 (1995).
- Fujihara, C. K., Sena, C. R., Malheiros, D. M., Mattar, A. L., Zatz, R. Short-term nitric oxide inhibition induces progressive nephropathy after regression of initial renal injury. Am. J. Physiol. Renal Physiol. 290 (3), F632-F640 (2006).
- Dikow, R., Kihm, L. P., et al. Increased infarct size in uremic rats: reduced ischemia tolerance? J. Am. Soc. Nephrol. 15 (6), 1530-1536 (2004).
- Elrashidy, R. A., Asker, M. E., Mohamed, H. E. Pioglitazone attenuates cardiac fibrosis and hypertrophy in a rat model of diabetic nephropathy. J. Cardiovasc. Pharmacol. Ther. 17 (3), 324-333 (2012).
- Haylor, J., Schroeder, J., et al. Skin gadolinium following use of MR contrast agents in a rat model of nephrogenic systemic fibrosis. Radiology. 263 (1), 107-116 (2012).
- Moriguchi, Y., Yogo, K., et al. Left ventricular hypertrophy is associated with inflammation in sodium loaded subtotal nephrectomized rats. Biomed. Res. 32 (2), 83-90 (2011).
- van Koppen, A., Joles, J. A., et al. Healthy bone marrow cells reduce progression of kidney failure better than CKD bone marrow cells in rats with established chronic kidney disease. Cell Transplant. , (2012).
- Baylis, C., Corman, B. The aging kidney: insights from experimental studies. J. Am. Soc. Nephrol. 9 (4), 699-709 (1998).
- Szabo, A. J., Muller, V., Chen, G. F., Samsell, L. J., Erdely, A., Baylis, C. Nephron number determines susceptibility to renal mass reduction-induced CKD in Lewis and Fisher 344 rats: implications for development of experimentally induced chronic allograft nephropathy. Nephrol. Dial Transplant. 23 (8), 2492-2495 (2008).
- Darling, I. M., Morris, M. E. Evaluation of "true" creatinine clearance in rats reveals extensive renal secretion. Pharm. Res. 8 (10), 1318-1322 (1991).
- Levey, A. S. Measurement of renal function in chronic renal disease. Kidney Int. 38 (1), 167-184 (1990).
- Myers, G. L., Miller, W. G., et al. Recommendations for improving serum creatinine measurement: a report from the Laboratory Working Group of the National Kidney Disease Education Program. Clin. Chem. 52 (1), 5-18 (2006).
- Hostetter, T. H., Meyer, T. W. The development of clearance methods for measurement of glomerular filtration and tubular reabsorption. Am. J. Physiol. Renal Physiol. 287 (5), F868-F870 (2004).
- Koeners, M. P., Racasan, S., Koomans, H. A., Joles, J. A., Braam, B. Nitric oxide, superoxide and renal blood flow autoregulation in SHR after perinatal L-arginine and antioxidants. Acta. Physiol. (Oxf). 190 (4), 329-338 (2007).
- van den Brandt, J., Wang, D., Kwon, S. H., Heinkelein, M., Reichardt, H. M. Lentivirally generated eGFP-transgenic rats allow efficient cell tracking in vivo. Genesis. 39 (2), 94-99 (2004).
- Kreutz, R., Kovacevic, L., Schulz, A., Rothermund, L., Ketteler, M., Paul, M. Effect of high NaCl diet on spontaneous hypertension in a genetic rat model with reduced nephron number. J. Hypertens. 18 (6), 777-782 (2000).
- Liu, Z. C., Chow, K. M., Chang, T. M. Evaluation of two protocols of uremic rat model: partial nephrectomy and. 25 (6), 935-943 (2003).
- Griffin, K. A., Picken, M., Bidani, A. K. Method of renal mass reduction is a critical modulator of subsequent hypertension and glomerular injury. J. Am. Soc. Nephrol. 4 (12), 2023-2031 (1994).
- Meyer, F., Ioshii, S. O., et al.
