Modellazione di morte neuronale e degenerazione in neuroni cerebellari del granello primario del Mouse

Matthew Laaper; Takrima Haque; Ruth S. Slack; Arezu Jahani-Asl

doi:10.3791/55871

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Articolo metodologico

Modellazione di morte neuronale e degenerazione in neuroni cerebellari del granello primario del Mouse

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DOI:

10.3791/55871

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6 novembre 2017

Matthew Laaper¹^,² , Takrima Haque¹ , Ruth S. Slack³ , Arezu Jahani-Asl¹^,²^,⁴

¹Lady Davis Institute for Medical Research, Jewish General Hospital, ²Integrated Program in Neuroscience, McGill University, ³Department of Cellular and Molecular Medicine, University of Ottawa, ⁴Department of Oncology, Faculty of Medicine, McGill University

In questo articolo

Sommario

Questo protocollo descrive un metodo semplice per isolare e neuroni di granulo cerebrale primario del mouse (CGNs) da cuccioli di 6-7 giorno vecchio, trasduzione efficiente di CGNs per la perdita e guadagno di funzione studia, la coltura e la modellazione eccitotossicità neuronale indotta da NMDA, basso-potassio-indotta delle cellule morte, danni al DNA e stress ossidativo utilizzando lo stesso modello di cultura.

Abstract

I neuroni cerebellari del granello (CGNs) sono un modello comunemente usato neuronale, formando una popolazione omogenea abbondante nel cervelletto. Alla luce del loro sviluppo post-natale, abbondanza e accessibilità, CGNs sono un modello ideale per studiare processi neuronali, compreso lo sviluppo neuronale, migrazione neuronale e stimolazione di attività neuronale fisiologica. Inoltre, culture CGN forniscono un eccellente modello per studiare le diverse modalità di morte cellulare tra cui excitotoxicity e apoptosi. All'interno di una settimana nella cultura, CGNs esprimere recettori N-metil-D-aspartato (NMDA), un recettore di glutammato di specifici recettori ionotropici con molte funzioni critiche in un neurone salute e nella malattia. L'aggiunta di basse concentrazioni di NMDA in combinazione con la depolarizzazione della membrana di roditore colture primarie di CGN è stato utilizzato per modellare la stimolazione fisiologica attività neuronale, mentre l'aggiunta di alte concentrazioni di NMDA può essere impiegato per modellare lesione di un neurone excitotoxic. Qui, un metodo di isolamento e coltura di CGNs da cuccioli 6 giorno precedente così come la manipolazione genetica di CGNs da adenovirus e lentivirus sono descritti. Siamo anche presenti protocolli ottimizzati su come stimolare eccitotossicità indotta da NMDA, apoptosi indotta da basso-potassio, stress ossidativo e danno al DNA dopo la trasduzione di questi neuroni.

Introduzione

I neuroni cerebellari del granello (CGNs) sono ben caratterizzati in cultura e hanno servito come un modello efficace per studiare la morte neuronale e sviluppo ¹^,²^,³^,⁴^,⁵^, ⁶. l'espressione precoce dei recettori N-metil-D-aspartato (NMDA) CGN culture in vitro di li rende un modello interessante per studiare NMDA-indotta di segnalazione. L'attivazione di questi recettori con NMDA in combinazione con la depolarizzazione della membrana viene utilizzata per modellare l....