Waiting
Elaborazione accesso...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

ביסוס מודל סרטן קולופרוקטיטיס בעכברים והערכת ההשפעה הטיפולית של הרפואה הסינית

Published: October 13, 2023 doi: 10.3791/66045
Automatic Translation
1, 2, 1, 1, 1, 1, 3
1College of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine, 2School of Clinical Medicine, Changchun University of Chinese Medicine, 3Department of Radiotherapy, Jilin Provincial Cancer Hospital

Summary

פרוטוקול זה מספק מודל עכברי של סרטן המעי הגס הקשור לקולופרוקטיטיס כיבית המושרה על ידי אזומתאן בשילוב עם דקסטרן סולפט נתרן. המודל שימש להערכת היעילות של תרכובות הרפואה הסינית המסורתית במניעה וטיפול בסרטן המעי הגס.

Abstract

סרטן המעי הגס והחלחולת (CRC) הוא ממאירות נפוצה של מערכת העיכול והפך לממאירות השלישית בשכיחותה בעולם ולגורם השני בשכיחותו למוות הקשור לממאירות. קולופרוקטיטיס כיבית (UC) היא נגע טרום סרטני, ו- CRC הקשור ל- UC (UC-CRC) הוא תת-הסוג הנפוץ ביותר של CRC. לכן, מודל UC-CRC סביר הוא אבן הפינה והערובה לפיתוח תרופות חדשות. הרפואה הסינית המסורתית (TCM) נמצאת בשימוש נרחב בטיפול ב- UC-CRC בשל יעילותה הטובה. כמרשם טוניק קלאסי של TCM, מרתח Liujunzi (LJZD) כבר בשימוש נרחב בטיפול UC-CRC. במחקר זה, מודל UC-CRC הוקם על ידי שילוב של אזומתאן ודאקסטרן סולפט נתרן, וניתן LJZD. הנתונים אישרו כי LJZD יכול לעכב ביעילות מעבר סרטן ב- UC-CRC באמצעות משקל גוף עכבר, אורך המעי הגס, גורמים פתולוגיים ודלקתיים, תפקוד מחסום המעי הגס וסמנים סרטניים. פרוטוקול זה מספק מערכת להערכת היעילות של TCM במניעה וטיפול ב- UC-CRC.

Introduction

סרטן המעי הגס והחלחולת (CRC) הוא ממאירות נפוצה במערכת העיכול, הממאירות השלישית בשכיחותה והשנייה בשכיחותה בעולם, המהווה 10% מהיארעות הסרטן העולמית ו-9.4% מכלל מקרי המוות הקשורים לסרטן 1,2. גורמים גנטיים, דלקת כרונית, תזונה עתירת שומן, סוכרת ופלורת מעיים חריגה הם גורמי סיכון ל-CRC 3,4. ביניהם, מחלות מעי דלקתיות, במיוחד קולופרוקטיטיס כיבית (UC), היא גורם סיכון ברור ל- CRC 5,6. CRC (UC-CRC) הוא תהליך מעבר של דלקת, היפרפלזיה לא טיפוסית וסרטן המבוסס על דלקת כרונית של המעי הגס, השונה ממודל התפתחות אדנוקרצינומה טיפוסי של CRC 7,8. בהשוואה לאוכלוסייה הכללית, הסיכון ל-CRC גבוה בערך פי 10-40 בחולים עם מחלות מעי דלקתיות9.

נכון לעכשיו, ניתוח הוא עדיין הטיפול הסטנדרטי עבור CRC, ובהתאם למיקום ולשלב של הגידול, הקרנות, טיפול תרופתי סיסטמי, או שילוב של שניהם אפשריים10. למרות ששיטות הטיפול המסורתיות הללו התקדמו מאוד, בשל ההטרוגניות הגבוהה ושיעור ההישנות של CRC, הפרוגנוזה גרועה, והשפעת הטיפול אינה אידיאלית11,12. לכן, גילוי מוקדם, אבחון מוקדם וטיפול מקיף הם המפתח לשיפור שיעור ההישרדות של חולי CRC, וחשוב במיוחד לשים לב לטרנספורמציה של UC ל- CRC. במהלך השנים, הרפואה הסינית המסורתית (TCM) משכה תשומת לב רבה בטיפול ב- UC-CRC או דלקת קיבה כרונית בשל תופעות הלוואי המוגבלות שלה ויעילותה המשמעותית. בהתבסס על טיפול דיאלקטי, מטפלים מפורסמים ברפואה סינית מדורות שונים יצרו מספר רב של מרשמים קלאסיים, כגון מרתח Huangqi Jianzhong13, מרתח Sijunzi14, וגלולת Sishen15.

מרתח Liujunzi (LJZD) מקורו בעבודותיו של יי שו ג'נג ג'ואן שנאספו בתקופת שושלת מינג והוא מרשם קלאסי ב-TCM16. כפי שניתן לראות בטבלה 1, LJZD מורכב משישה עשבי תיבול מסורתיים, כולל Codonopsis pilosula (Franch.) נאן. (Dangshen), Poria cocos (Schw.) Wolf (Fuling), Atractylodes macrocephala Koidz. (Baizhu), Glycyrrhiza uralensis Fisch. (Gancao), Citrus reticulata Blanco (Chenpi) ו-Pinellia ternata (Thunb.) Breit (Banxia), אשר יש את ההשפעה של חידוש צ 'י וחיזוק הטחול, ייבוש רטיבות, ופתרון ליחה. בפרקטיקה הקלינית המודרנית, הוא משמש לעתים קרובות לטיפול בגסטריטיס כרונית, כיבי קיבה וכיבים בתריסריון. מחקר פרמקולוגי מודרני הראה כי LJZD ו- LJZD שונה יש ערך יישום גבוה בטיפול האדג'ובנטי של UC וסרטן דרכי העיכול 17,18,19.

כיום, ישנן דרכים רבות לבנות מודלים של עכברי UC-CRC, אך מודל העכבר המושרה אזוקסימתאן (AOM)/דקסטרן סולפט נתרן (DSS) הוא מודל UC-CRC הנפוץ ביותר; הסימפטומים הקליניים, התצפיות המורפולוגיות והפתולוגיות הוכיחו כי המודל דומה מאוד ל- UC-CRC20,21 האנושי. העיקרון הבסיסי הוא לגרום תחילה לקרצינוגנזה עם AOM כימי מסרטן ולאחר מכן לחשוף עכברים באופן רציף לסביבת הגירוי הדלקתי של DSS כדי לדמות את הנזק המתמשך והתיקון של אפיתל רירית המעי, ובכך לבנות מודל עכבר UC-CRCמודל 22. מטרת מחקר זה היא לבסס מודל עכברי של UC-CRC על ידי הזרקה תוך צפקית של AOM וגירוי מחזורי של DSS בטווח הקצר ולהעריך את השפעת התרופה והמנגנון המולקולרי של LJZD על UC-CRC על מנת לספק בסיס מדעי לטיפול ב- UC-CRC.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

הליך בעלי החיים אושר על ידי ועדת האתיקה של אוניברסיטת צ'אנגצ'ון לרפואה סינית (מספר שיא: 2021214). עכברי C57BL/6J ספציפיים נטולי פתוגן (8-10 שבועות, משקל 18-22 גרם), זכר ונקבה, שוכנו בכלובים מאווררים באופן עצמאי בטמפרטורה של 22 מעלות צלזיוס ולחות יחסית של 65%. העכברים החלו את הניסוי לאחר 7 ד' של הזנה אדפטיבית, שבמהלכה הייתה להם גישה חופשית למים ולתזונה.

1. הכנת סמים

  1. הכנת LJZD
    הערה: התרופה הסינית שבה נעשה שימוש נרכשה מבית החולים המסונף של אוניברסיטת צ'אנג-צ'ון לרפואה סינית וזוהתה כרפואה סינית מקורית (ראה טבלה 1).
    1. שים Dangshen (12 גרם), Baizhu (12 גרם), Gancao (6 גרם), Chenpi (12 גרם), Jiangbanxia (9 גרם) לתוך סיר קרמיקה מיוחד (ראה טבלה של חומרים). הוסיפו 1000 מ"ל מים מזוקקים והשרו בטמפרטורת החדר למשך שעה אחת (ראו איור 1A).
    2. אבקה 12 גרם ממלאים לאבקה דקה עם מטחנה ומשרים 300 מ"ל מים מזוקקים במיכל אחר למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר.
    3. מערבבים את הרפואה הסינית הנ"ל בסיר הקרמיקה המיוחד. מרתיחים את התערובת ולאחר מכן לשמור על להבה בינונית עד רק 300 מ"ל של מרתח נשאר. השתמש גזה רפואית לסינון ולשמר את התסנין בטמפרטורת החדר.
    4. מוסיפים 1000 מ"ל מים מזוקקים וחוזרים על פעולת המרתח הנ"ל פעם נוספת. סנן שוב באמצעות גזה רפואית. מערבבים את התסנין ומרתיחים אותו עד שנשאר רק 150 מ"ל.
    5. צנטריפוגות את הנוזל המרוכז ב 10,000 x גרם במשך 5 דקות, ועוד לרכז את supernatant המתקבל ל 30 מ"ל על אש בינונית. מעבירים את התרכיז הסופי לצלחת ומייבשים אותו באמצעות תנור ייבוש חשמלי עד שרק המומס נשאר כאבקה.
    6. לשקול את מוצק לעיל ולהמיס אותו במים מזוקקים סטריליים כדי לקבל תמיסה המכילה 22.85 מ"ג של תרופה לכל 0.2 מ"ל (114.16 מ"ג / מ"ל), שהוא המינון היומי של עכברים.
  2. הכנת חומצה סליצילית 5-אמינו
    הערה: לחומצה סליצילית 5-אמינו (5-ASA; ראה טבלת חומרים) יש השפעה מונעת טובה על UC-CRC, והיא שימשה כתרופה חיובית במחקר זה23.
    1. יש להמיס 64 מ"ג אבקת 5-ASA ב-200 מ"ל מים מזוקקים סטריליים לקבלת תמיסת 5-ASA במינון 1.82 מ"ג/מ"ל. המינון היומי לעכבר בודד היה 0.2 מ"ל.
  3. הכנת תמיסת הזרקת AOM
    1. יש להוסיף 2.5 מ"ל מים מזוקקים סטריליים לאבקת AOM במינון 25 מ"ג (ראו טבלת חומרים), ולערבב במערבולת מערבולת (ראו טבלת חומרים) להכנת תמיסת מלאי AOM במינון 10 מ"ג/מ"ל, לאחסן בטמפרטורה של -20°C עד לשימוש.
    2. הכן את תמיסת הזרקת AOM על ידי דילול תמיסת מלאי AOM במים מזוקקים סטריליים ביחס של 10:1 (1 מ"ג/מ"ל).

2. הקמת מודל UC-CRC

הערה: הניסוי חולק ל-4 קבוצות: קבוצת ביקורת, מודל, LJZD וקבוצת 5-ASA, 10 עכברים בכל קבוצה. מלבד קבוצת הביקורת, הקבוצות האחרות טופלו ב-AOM וב-DSS.

  1. הזרקה תוך צפקית של תמיסת הזרקת AOM
    הערה: לאחר הזנה אדפטיבית במשך 7 ד', עכברים קיבלו תמיסת הזרקת AOM (1 מ"ג/מ"ל) באמצעות הזרקה תוך-צפקית (ראו איור 1B).
    1. החזק את העכבר עם בטנו למעלה וראשו מעט למטה. אחזו בעור הגב כדי להדק את עור הבטן ונקבו את העור כ-1 ס"מ מימין להצטלבות קו השורש של שתי הירכיים בקו אמצע הבטן בעזרת מזרק בנפח 1 מ"ל (ראו טבלת חומרים).
    2. דחפו את מחט המזרק 1 מ"ל למרחק של 3-5 מ"מ מתחת לעור, שמרו אותה מקבילה לקו האמצע של הבטן, והכניסו את המחט 0.3-0.5 מ"מ לתוך חלל הבטן ב 45°.
    3. לאחר שהקצה עובר דרך שריר הבטן, המפעיל חש אובדן התנגדות פתאומי. לאחר מכן, משוך את המזרק החוצה ואחורה כדי לבחון אם מתרחשת חלחול נוזלי. אם לא, דחפו את תמיסת הזרקת AOM באיטיות לתוך העכברים ב-0.1 מ"ל/10 גרם.
  2. גירוי מחזורי של 2% פתרון DSS
    הערה: כל עכבר המושרה על ידי AOM קיבל 500 מ"ל של תמיסת DSS בשבועות 3, 6 ו -9, והעכברים שתו בחופשיות במהלך תקופה זו.
    1. הכן תמיסת 2% DSS על-ידי הוספת 500 מ"ל מים מזוקקים סטריליים ל-10 גרם DSS (ראה טבלת חומרים). מערבבים עם מערבל מערבולת ומאחסנים ב-4°C עד לשימוש.
    2. כל עכבר המושרה על ידי AOM שותה 500 מ"ל של תמיסת 2% DSS באופן חופשי במשך 7 d בשבועות 3, 6 ו -9 לאחר השראת AOM.

3. טיפול תרופתי

הערה: בני אדם בוגרים זקוקים ל-63 גרם LJZD ליום. על פי נוסחת ההמרה של מינון ניסיוני של עכברים ותרופות אנושיות, מינון ניסיוני שווה ערך לעכברים (מ"ג/ק"ג) = מינון אנושי (מ"ג/ק"ג)/משקל גוף (60 ק"ג) x 9.1, המינון היומי של עכברים היה כ-9.6 גרם לק"ג.

  1. יש לטפל בקבוצת LJZD ו-5-ASA עם 0.1 מ"ל/10 גרם של תמיסת LJZD מוכנה ו-5-ASA על ידי גבאז' קיבה בשבוע 7 ובשבוע 15, בהתאמה.
    1. עבור ניהול intragastric בעכברים, לבצע את ההליך הבא. החזק את העכבר ביד שמאל, וביד ימין, החזק את מנגנון זילוח הבטן. הכנס את מחט המזרק לפה והחליק אותה במורד הקיר האחורי של הלוע של העכברים. החליקו במורד הלוע כשהעכברים בולעים והמשיכו לנוע קדימה. כאשר הייתה תחושה של התנגדות, וניתן היה לדחוף את המזרק לתוך הלוע, משכו את המחט החוצה והשלימו את ההזרקה.
  2. יש לטפל בקבוצת הבקרה ובקבוצת הדגם באותה כמות של מלח (ראו טבלת חומרים).
  3. לטפל בעכברים בכל קבוצה עם תרופה מתאימה פעם ביום באותו זמן במהלך תקופת הממשל.

4. הערכת מודל UC-CRC ויעילות LJZD

  1. ציון מדד פעילות המחלה
    הערה: על פי טבלה 2, מדד פעילות המחלה (DAI) הוערך על ידי שילוב של ירידה במשקל, צמיגות צואה ודימום צואה של העכברים.
    1. רשום את משקל העכברים מדי יום מתחילת האכלה אדפטיבית ועד סוף הטיפול התרופתי.
    2. שימו לב היטב לעקביות הצואה של כל עכבר ניסוי ותיעדו את תנועות המעיים כאחד משלושת התנאים: צואה רגילה ורכה ושלשול מימי.
    3. רשום את הדימום הצואתי של חיות ניסוי כאחד משלושת התנאים: ללא דימום, דימום מועט ודם גלוי בצואה.
  2. איתור רמת IL-6 בסרום
    1. טפל בעכברים עם LJZD או 5-ASA במשך 9 שבועות. תקן את העכברים על ידי אחיזת עור הצוואר של העכבר ביד שמאל ולחץ בעדינות על שולחן הניסוי כדי לקחת את המיקום decubitus לרוחב. חותכים את השפם של העכברים עם מספריים. חתכו את שפם העכברים במספריים בזהירות (ראו טבלת חומרים) כדי למנוע זיהום דם.
      הערה: עכברים שלא יכלו להתנועע בחופשיות נחשבו לקבועים כראוי. אם זה לא קורה, יש לתקן את העכברים.
    2. מרדימים את העכבר על ידי שאיפה של 2% isoflurane. לעקר את העור סביב גלגל העין עם אתנול (ראה טבלה של חומרים). לחץ על עור העין בצד בעדינות כדי להפוך את גלגל העין צפוף ובולט.
    3. הדקו את גלגל העין בפינצטה למרפק והסירו את גלגלי העיניים בצורה מדויקת ומהירה. תנו לדם לטפטף לתוך הצינור הצנטריפוגלי (ראו טבלת חומרים). תוך כדי כך, הקש על לב העכבר כדי להאיץ את איסוף הדם.
    4. שמור את הדם שנאסף בטמפרטורת החדר במשך 30 דקות וצנטריפוגה אותו ב 3,500 x גרם במשך 10 דקות. אסוף את הסופרנאטנט וזהה את רמת IL-6 בהתאם להוראות ערכת זיהוי התוכן IL-6 (ראה טבלת חומרים).
  3. הפרדת רקמת המעי הגס
    1. יש להרדים את העכברים לאחר דגימת דם על ידי שאיפת איזופלורן 5% ממנת יתר ונקע צוואר הרחם (ראו טבלת חומרים) בהתאם לאתיקה של בעלי חיים.
    2. שמור את העכברים בסביבה אנטומית קריוגנית. לשתק את העכברים במצב שכיבה. חותכים את שיער הבטן התחתונה במספריים ומחטאים אותו באתנול.
    3. צבטו את נקודת ההצטלבות בין שני שורשי הירך לקו האמצע של הבטן בעזרת מלקחיים בעפעפיים (ראו טבלת חומרים). חותכים חתך רוחבי על 1-1.5 ס"מ עם מספריים.
    4. חותכים חתך אורכי לאורך הקו החציוני של הבטן מנקודת האמצע של החתך הרוחבי לכיוון תהליך הקסיפואיד.
    5. הסר את הרקמות peri-colorectal לכיוון פי הטבעת כדי להפריד את המעי הגס מן הרקמה שמסביב. היזהר לא לפגוע במעי הגס.
    6. לדחוף את העור של הבטן לצדדים כדי לחשוף באופן מלא את המעי הגס. הסר את המעי הגס מחלל הבטן עם מלקחיים עפעפיים לחתוך את הקטעים מפי הטבעת אל cecum (לא כולל); אורכו הכולל כ-10 ס"מ. לאחסן את רקמות המעי הגס המתקבל מלוחים ב 4 °C (75 °F).
  4. הערכת אורך ומשקל פי הטבעת
    1. חלצו את המלח בטמפרטורה של 4°C בעזרת מחט בנפח 5 מ"ל (ראו טבלת חומרים) כדי לשטוף את החלק הפנימי של המעי הגס. לאחר מכן, הניחו את המעי הגס על נייר סופג כדי לספוג את לחות הרקמה.
    2. שקלו את רקמות המעי הגס ולאחר מכן הניחו אותן על נייר A4 כדי למדוד את אורכן.
  5. למדוד את מספר הגידולים במעי הגס
    1. חותכים את המעי הגס לאורכו כדי לפתוח אותו במלואו ולהתבונן במספר ובגודל הגידולים בקולורקטום .
  6. ניתוח פתולוגי של המעי הגס
    1. תקן את המעי הגס ב 4% paraformaldehyde במשך 24 שעות. הטמע את הרקמה הרקטלית הקבועה בפרפין מותך וחתך ברציפות בעובי של 5 מיקרומטר על ידי מיקרוטום מקפיא רקמה.
    2. על פי הנוהל של Hou et al.24, שעווה את החלקים בקסילן ולאחר מכן לייבש אותו עם ריכוזים סדרתיים של אתנול. לאחר צביעה בתמיסת המטוקסילין במשך 5 דקות, שטפו את החלקים במים טהורים. לאחר מכן, יש להכתים בתמיסת אאוזין 0.5% למשך דקה אחת (ראו טבלת חומרים).
    3. בצע שוב התייבשות הדרגתית וטיפול שקוף קסילן. אטמו את המקטעים והתבוננו בהם תחת המיקרוסקופ האופטי (ראו טבלת חומרים) והתצלום, כפי שתוארו על ידי Xie et al.25.
  7. ניתוח אימונוהיסטוכימי של קולורקטום
    1. יש להדיח ולייבש את החלקים בהתאם לשיטה הנ"ל. לתקן את האנטיגן בקטעים עם טכניקה תיקון תרמי בלחץ גבוה, כפי שתואר על ידי Gok et al.26.
    2. משרים את החלקים בחוסמי פרוקסידאז אנדוגניים בטמפרטורת החדר למשך 15 דקות. אטמו את החלקים בסרום עיזים (ראו טבלת חומרים).
    3. הוסף את הנוגדן העיקרי ZO-1 (1:1000), אוקלודין (1:1000) ו- KI67 (1:500; ראה טבלת חומרים) למקטעים ודגור לילה ב -4 מעלות צלזיוס. שטפו את המקטעים עם חיץ PBS (ראו טבלת חומרים), הוסיפו לו נוגדן משני לשימוש כללי (1:5000; ראו טבלת חומרים) ודגרו בטמפרטורה של 37°C למשך 30 דקות.
    4. הוסף את פתרון DAB (ראה טבלת חומרים) למקטעים לפיתוח צבע. כתם נגדי את החלקים עם תמיסת hematoxylin.
    5. יש לייבש, לשקוף ולאטום שוב את המקטעים. שימו לב לביטוי של חלבון על ידי המיקרוסקופ האופטי.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

המרתח של LJZD הוכן לפי יחס הרכב התרופות בטבלה 1 ושיטת המרתח של TCM באיור 1A. לפי נקודת הזמן המצוינת באיור 1B, עכברים קיבלו הזרקה תוך-צפקית של 1 מ"ג/מ"ל AOMביום השביעי, ולעכברים ניתנה גישה חופשית למי שתייה המכילים 2% DSSבשבועות השלישי, השישי והתשיעי. מודל העכבר UC-CRC הוקם בהצלחה בשבוע ה-15. בינתיים, עכברים טופלו ב- LJZD על ידי gavage משבוע 7 עד שבוע 15. הנתונים הראו כי בהשוואה לקבוצת הביקורת, קבוצת מודל UC-CRC חוותה ירידה משמעותית במשקל, אשר הוקלה על ידי טיפול ב- LJZD (איור 2A, P < 0.01). בסוף הניסוי, טיפול ב-LJZD שיפר את ציון ה-DAI בהשוואה לקבוצת המודל של UC-CRC (איור 2B). בהשוואה לקבוצת הביקורת, לקבוצת המודל UC-CRC היה אורך מעי גס קצר יותר, אשר הוגדל על-ידי טיפול ב-LJZD (איור 2C,D, P < 0.01). היחס בין משקל המעי הגס למשקל הגוף משקף התפתחות CRC בעכברים, ויחס גבוה יותר מצביע על התפתחות גידול חריפה27. בהשוואה לקבוצת הביקורת, מדד איברי המעי הגס של קבוצת המודל עלה באופן משמעותי, וטיפול ב- LJZD הפחית מאוד את מדד איברי המעי הגס (איור 2E, P < 0.05). נוסף על כך, הטיפול ב-LJZD גם עיכב היווצרות גידולים במעי הגס (איור 2F, P < 0.01) ואת רמת הגורם הפרו-דלקתי IL-628 בסרום (איור 2G, P < 0.05).

תוצאות פתולוגיות אישרו כי בהשוואה לקבוצת הביקורת, לעכברים בקבוצת המודל UC-CRC היו גידולים גדולים יותר במעי הגס והם יצרו אדנוקרצינומה, בעוד שטיפול ב- LJZD הפחית את גודל ודרגת הגידולים (איור 3). נתונים אימונוהיסטוכימיים הראו כי טיפול ב-LJZD שיפר את תפקוד מחסום המעי הגס בעכברי מודל UC-CRC, כפי שמצוין על-ידי ביטוי חלבון מוגבר של ZO-1 ו-Occludin29 (איור 4). במקביל, הטיפול ב-LJZD דיכא את רמות ביטוי החלבונים של סמן הסרטן KI6730 (איור 4).

Figure 1
איור 1: הכנת LJZD והקמת מודל עכברי של סרטן קולופרוקטיטיס.( A) תערובת של Dangshen (12 גרם), Baizhu (12 גרם), Gancao (6 גרם), Chenpi (12 גרם) ו Ban Xia מעובד זנגביל (9 גרם) היה טובל 1000 מ"ל של מים מזוקקים בטמפרטורת החדר במשך 1 שעה. אבקת פולינג במשקל 12 גרם הושרה ב-300 מ"ל מים מזוקקים בטמפרטורת החדר למשך שעה. התערובת של ששת עשבי התיבול הנ"ל עברה מרתח בטמפרטורה של 100 מעלות צלזיוס למשך 40 דקות. (B) ביום השביעי, עכברי C57BL/6J הוזרקו תוך צפקית עם 1 מ"ג/מ"ל AOM. עכברים קיבלו מים שהכילו 2% DSS ad libitum בשבועהשלישי,השישי והתשיעי . בין 7 ל -15 שבועות, עכברים קיבלו LJZD על ידי gavage. קיצורים: AOM, azomethane; DAI, מדד פעילות המחלה; DSS, דקסטרן סולפט נתרן; LJZD, מרתח Liujunzi; ו, שבוע. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 2
איור 2: הערכת מודל UC-CRC ויעילות LJZD. (A) LJZD שיפר את משקל הגוף בעכברים מדגם UC-CRC. (B) LJZD הקל על ציוני DAI בעכברי מודל UC-CRC. (ג, ד) LJZD הגדיל את אורך המעי הגס בעכברי מודל UC-CRC. (E) LJZD הפחית את אינדקס האיבר של המעי הגס בעכברי מודל UC-CRC. (F) LJZD עיכב גידולים במעי הגס בעכברי מודל של סרטן קולופרוקטיטיס. (G) רמת IL-6 בסרום מדוכאת LJZD בעכברי מודל UC-CRC. #P< 0.05 ו - ##P< 0.01, בהשוואה לקבוצת הביקורת; *P < 0.05 ו - **P< 0.01, בהשוואה לקבוצת הדגמים. הנתונים בוטאו כממוצע ± סטיות תקן (n=10) ונותחו על ידי ניתוח חד-כיווני של שונות (ANOVA) ואחריו מבחן Tukey. P < 0.05 הצביע על הבדל מובהק סטטיסטית. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 3
איור 3: הערכת המאפיינים הפתולוגיים של רקמות המעי הגס בעכברים על-ידי צביעת המטוקסילין-אאוסין. לא היה נזק פתולוגי בקבוצת הביקורת. רקמת הגידול של קבוצת המודל UC-CRC הייתה גדולה ויצרה אדנוקרצינומה וניאופלזיה בדרגה גבוהה, בעוד שבקבוצת הטיפול ב- LJZD הייתה רקמת גידול מופחתת מלווה בכמות קטנה של אדנומה מקומית וניאופלזיה בדרגה נמוכה. החץ השחור מייצג את בלוטת הגידול הדיספלסטי הטרום סרטנית. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 4
איור 4: השפעת LJZD על תפקוד מחסום המעי הגס וסמן סרטן בעכברי מודל UC-CRC. (A) תמונות אימונוהיסטוכימיות של ZO-1, Occludin ו-KI67. (B) תוצאות סטטיסטיות של ביטוי חלבונים של ZO-1, Occludin ו-KI67. הטיפול ב-LJZD הגביר את הביטוי של חלבונים פונקציונליים של מחסום המעי הגס ZO-1 ואוקלודין, תוך הפחתת רמת סמן הסרטן KI67 בעכברי מודל UC-CRC. ## P < 0.01, בהשוואה לקבוצת הביקורת; ** P < 0.01, בהשוואה לקבוצת המודל. הנתונים בוטאו כממוצע ± סטיות תקן (n=10) ונותחו על ידי ניתוח חד-כיווני של שונות (ANOVA) ואחריו מבחן Tukey. P < 0.05 הצביע על הבדל מובהק סטטיסטית. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

רכיבים פיניין משקל (גרם)
קודונופסיס רדיקס דאנגשן 12
פוריה קוקוס פולינג 12
Atractylodis Macrocephalae Rhizoma באייז'ו 12
שוש גאנקאו 6
קליפת תפוז מיובשת צ'נפי 12
קנה שורש Pinelliae Preparata ג'יאנגבנשיה 9

טבלה 1: הרכב ושיעור התרופות ב-LJZD.

פריטים ציון או תסמינים ציונים
במשקל < 1% 0
1%-5% 1
5%-10% 2
10%-15% 3
≥15% 4
בדיקת דם סמוי בצואה שלילי 0
חיובי 2
דם גלוי בצואה בעין בלתי 4
עקביות צואה רגיל 0
שרפרף רופף 2
שלשול מימי 4

טבלה 2: ציון מדד פעילות המחלה עבור מודל UC-CRC בעכברים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

CRC הוא אחד מסוגי הסרטן הנפוצים ביותר בעולם, עם כ-1,148,000 מקרים חדשים ויותר מ-576,000 מקרי מוות מדי שנה. CRC ניתן לחלק לשלושה סוגים על פי סיבות שונות, כולל תורשתי, ספורדי UC-CRC31. שכיחות CRC בחולים עם מחלות מעי דלקתיות כגון UC גבוהה משמעותית מזו שבאוכלוסייה הכללית. UC מגרה את התפתחות CRC באמצעות מסלול סרטן דלקתי, אשר שונה ממסלול אדנוקרצינומה טיפוסי6. נכון לעכשיו, הגורם UC-CRC אינו ידוע, נגרם בעיקר על ידי דלקת כרונית חוזרת לטווח ארוך, עם שיעור תמותה של עד 60% 32,33. אין טיפול יעיל ל- UC-CRC, שהיה מוקד המחקר בשנים האחרונות. הבנת המנגנון המולקולרי של UC-CRC חיונית לגילוי מוקדם ולטיפול מדויק ב-UC-CRC.

נכון לעכשיו, ישנן שיטות רבות לבניית מודלים בעלי חיים של UC-CRC, ומנגנוני היווצרות שונים. נוקאאוט הגן IL-10 או Muc2/4, הגורם לפגמים במחסום האפיתל, יכול לגרום לקוליטיס ספונטנית בעכברים, ולכן הוא משמש לעתים קרובות לבניית מודלים של CRC בבעלי חיים המבוססים על פגמים גנטיים הקשורים ל- UC 34,35,36. עם זאת, המודל החייתי של UC-CRC המושרה על ידי נוקאאוט גנטי אינו יכול לדמות את הפתוגנזה המלאה של המחלה, ושיטת הפעולה שלו מורכבת, הניסוי יקר, ויש לו מגבלות ברורות. אינדוקציה כימית היא השיטה הקלאסית והנפוצה לבניית מודלים של בעלי חיים UC-CRC37,38. DSS, AOM ודימתילהידרזין הם כולם גורמים כימיים נפוצים לבניית UC-CRC. עם זאת, שימוש בריאגנטים כימיים אלה בלבד כדי לבסס מודלים של בעלי חיים לוקח זמן רב ויש לו שיעור הצלחה נמוך39. מחקרים הראו כי שכיחות UC-CRC המושרה על ידי שילוב של AOM ו- DSS יכולה להגיע כמעט 100%40. בהשוואה לשיטות אחרות, לשילוב של AOM/DSS יש את היתרונות של פעולה פשוטה, יכולת שליטה חזקה, מחזור קצר וקצב שכפול גבוה, והוא יכול לדמות טוב יותר UC-CRC אנושי במונחים של פתולוגיה ומנגנון מולקולרי40,41,42. למרות שלשימוש בגירוי מחזור AOM/DSS לבניית מודל UC-CRC יש יתרונות רבים, יש לו גם את החסרונות של זמן מידול ארוך, ריאגנטים יקרים למידול, ועדיין לא יכול לדמות באופן מלא את הפתוגנזה של UC-CRC אנושי.

על מנת לחפש יעד טיפולי פוטנציאלי עבור UC-CRC, השתמשנו ב-AOM, חומר כימי מסרטן, בשילוב עם עכברים הנגרמים על ידי DSS כדי ליצור מודל UC-CRC. במחקר זה, עכברים שנחשפו ל-AOM ולגירוי מחזורי של DSS הראו דרגות שונות של תסמינים הקשורים ל-UC-CRC. בהשוואה לקבוצת הביקורת, ציון ה- DAI של קבוצת המודל עלה באופן משמעותי, אשר התבטא בירידה במשקל, צואה בדם, צואה רכה או שלשול מימי. ואילו LJZD הפחית משמעותית את ציון ה- DAI. קיצור אורך המעי הגס הוא סמן חשוב לתגובה דלקתית ב- UC-CRC43,44. במחקר זה, אורך המעי הגס של עכברי המודל היה קצר משמעותית מזה של קבוצת הביקורת, ו- LJZD יכול לשפר את המעי הגס המקוצר. רירית המעי הגס מפתחת דלקת כרונית, אשר מתפתחת בהדרגה hyperplasia לא טיפוסי של רקמת המעי הגס ובסופו של דבר גורם לסרטן45. במחקר זה, מספר הגידולים ברקמת המעי הגס של עכברים בקבוצת המודל גדל משמעותית בהשוואה לקבוצת הביקורת, ובהתאם גם משקל רקמת המעי הגס עלה. לאחר הטיפול ב- LJZD, מספר הגידולים ירד באופן משמעותי, ומשקל המעי הגס ירד. מוצע כי ל- LJZD יש השפעה מעכבת משמעותית על היווצרות CRC המושרה על ידי UC. מחקרים קודמים מצאו כי LJZD יכול להקל על דלקת ולהפחית את רמות הביטוי של TNF-α, IL-6 ו- IL-1β in vivo 16,28,46. במחקר זה, רמת IL-6 בסרום של עכברים בקבוצת המודל הועלתה, אך הייצור של IL-6 בסרום עוכב באופן משמעותי לאחר טיפול ב- LJZD.

תצפית מיקרוסקופית הראתה חדירה דלקתית של רקמת פי הטבעת, הרס מחסום הרירית, הפחתת הפרשת ריר, אי סדירות או היעלמות של תאי גביע, עיוות או ניוון של קריפטים במעי, והפרעה ברורה במבנה הבלוטה בעכברים שטופלו ב-AOM/DSS. לאחר הטיפול ב- LJZD, המורפולוגיה של תאי גביע ברקמת המעי הגס הייתה תקינה, מבנה ההפסקה והבלוטה היה סדיר, והנזק למחסום הרירית שופר. צומת אפיתל הדוק (TJ) הוא מחסום מכני חיוני לשמירה על שלמות התאים וחדירותם, בעיקר כולל ZO-1 ואוקלודין29. דווח כי הביטוי של חלבוני TJ כגון ZO-1 ברקמת המעי הגס של חולי UC-CRC מופחת באופן משמעותי47,48. מחקר זה הראה כי מבנה רקמת רירית המעי הגס של עכברי UC-CRC נהרס, והביטוי של ZO-1 ואוקלודין ברקמה ירד, בעוד LJZD יכול להפוך ירידה זו, דבר המצביע על כך ש- LJZD עשוי להגן על שלמות מחסום רירית המעי הגס על ידי הגברת הביטוי של ZO-1 ואוקלודין. אנטיגן הקשור לגרעין (KI67) הוא מרכיב חיוני בוויסות מחזור התא ונמצא בשימוש נרחב כאינדיקטור לפעילות שגשוג של תאי גידול30,49. במחקר זה, ביטוי חלבון KI67 היה מוגבר בקבוצת המודל בהשוואה לקבוצת הביקורת, מה שמצביע על שגשוג משמעותי של תאי הגידול ברקמת המעי הגס. לאחר הטיפול ב- LJZD, הביטוי של חלבון KI67 ירד, מה שהראה כי ל- LJZD הייתה השפעה טובה על UC-CRC.

לסיכום, הזרקה תוך צפקית AOM וגירוי מחזור DSS יכולים לבסס ביעילות מודל UC-CRC בתקופה קצרה ודומים ל- UC-CRC האנושי במונחים של היסטופתולוגיה ומנגנוני היווצרות מולקולריים. כמרשם קלאסי, LJZD יכול להפחית את ציון DAI, משקל רקמת המעי הגס ורמות הגורמים הדלקתיים, לעכב ביעילות את קיצור אורך המעי הגס, ולשחק תפקיד בשלב של UC בעכברי UC-CRC. במקביל, הוא יכול להגביר את הביטוי של חלבוני TJ, לשפר באופן משמעותי את הנזק הפתולוגי של רקמת המעי הגס, להפחית את הביטוי של חלבון KI67, להפחית באופן משמעותי את שכיחות גידולי הרקמה, ולעכב את תהליך השינוי של UC ל- CRC. מחקר זה מספק רעיון חדש לטיפול ב- UC-CRC.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

למחברים אין מה לחשוף.

Acknowledgments

עבודה זו נתמכה על ידי מחלקת המדע והטכנולוגיה של מחוז ג'ילין (YDZJ202201ZYTS181).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Azoxymethane Sigma A5486
5-amino salicylic acid Kuihua Pharmaceuticals Group Jiamusi Luling Pharmaceutical Co., Ltd 3819413
C57BL/6J mice Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd NO 210726210100853716
Cover slip Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd 10212432C
DAB color development kit Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd 2005289
Dewatering machine  Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd JJ-12J
Dextran sulfate sodium Dalian Meilun Biotechnology Co., Ltd MB5535
Embedding machine Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd JB-P5
Hematoxylin-eosin dye Wuhan Hundred Degree Biotechnology Co., Ltd B1000
IL-6 Jiangsu Meimian Industrial Co., Ltd MM-0163M2
Isoflurane RWD Life Science Co., Ltd R510-22-10
KI67 primary antibody Google Biotechnology Inc GB121141
Neutral gum Wuhan Hundred Degree Biotechnology Co., Ltd 10004160
Object slide Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd 10212432A
Occludin primary antibody Affnity DF7504
Orthostatic optical microscope Nikon Nikon Eclipse CI
Pathological microtome Shanghai Leica Instrument Co., Ltd RM2016
ZO-1 primary antibody Abcam ab221547

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 Cancers in 185 Countries. CA Cancer J Clin. 71 (3), 209-249 (2021).
  2. Tsai, K. Y., et al. Novel heavily fucosylated glycans as a promising therapeutic target in colorectal cancer. J Transl Med. 21 (1), 505 (2023).
  3. Chen, X., et al. Smoking, genetic predisposition, and colorectal cancer risk. Clin Transl Gastroenterol. 12 (3), e00317 (2021).
  4. Keum, N., Giovannucci, E. Global burden of colorectal cancer: emerging trends, risk factors and prevention strategies. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 16 (12), 713-732 (2019).
  5. Sninsky, J. A., Shore, B. M., Lupu, G. V., Crockett, S. D. Risk factors for colorectal polyps and cancer. Gastrointest Endosc Clin N Am. 32 (2), 195-213 (2022).
  6. Rivera, A. P., et al. Ulcerative colitis-induced colorectal carcinoma: A deleterious concatenation. Cureus. 14 (2), e22636 (2022).
  7. Faye, A. S., Holmer, A. K., Axelrad, J. E. Cancer in inflammatory bowel disease. Gastroenterol Clin North Am. 51 (3), 649-666 (2022).
  8. Becker, W. R., et al. Single-cell analyses define a continuum of cell state and composition changes in the malignant transformation of polyps to colorectal cancer. Nat Genet. 54 (7), 985-995 (2022).
  9. Choi, J. K., Kim, D. W., Shin, S. Y., Park, E. C., Kang, J. G. Effect of ulcerative colitis on incidence of colorectal cancer: Results from the nationwide population-based cohort study (2003-2013). J Cancer. 7 (6), 681-686 (2016).
  10. Gallo, G., Kotze, P. G., Spinelli, A. Surgery in ulcerative colitis: When? How. Best Pract Res Clin Gastroenterol. 32-33, 71-78 (2018).
  11. Shah, S. C., Itzkowitz, S. H. Colorectal cancer in inflammatory bowel disease: Mechanisms and management. Gastroenterology. 162 (3), 715.e3-730.e3 (2022).
  12. Fabregas, J. C., Ramnaraign, B., George, T. J. Clinical updates for colon cancer care in 2022. Clin Colorectal Cancer. 21 (3), 198-203 (2022).
  13. Hu, J., et al. Pharmacological and molecular analysis of the effects of Huangqi Jianzhong decoction on proliferation and apoptosis in GES-1 cells infected with H. pylori.Front Pharmacol. 13, 1009705 (2022).
  14. Shang, L., et al. Mechanism of Sijunzi decoction in the treatment of colorectal cancer based on network pharmacology and experimental validation. J Ethnopharmacol. 302 (Pt A), 115876 (2023).
  15. Zhang, X. Y., et al. Sishen pill maintained colonic mucosal barrier integrity to treat ulcerative colitis via Rho/ROCK signaling pathway. Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 5536679 (2021).
  16. Wu, X., Dai, Y., Nie, K. Research progress of Liujunzi decoction in the treatment of tumor-associated anorexia. Drug Des Devel Ther. 16, 1731-1741 (2022).
  17. Han, Y., et al. Liujunzi decoction exerts potent antitumor activity in oesophageal squamous cell carcinoma by inhibiting miR-34a/STAT3/IL-6R feedback loop and modifies antitumor immunity. Phytomedicine. 111, 154672 (2023).
  18. Chen, D., Zhao, J., Cong, W. Chinese herbal medicines facilitate the control of chemotherapy-induced side effects in colorectal cancer: Progress and perspective. Front Pharmacol. 9, 1442 (2018).
  19. Wang, M., Wang, S., Su, Q., Ma, T. Effect of combining early chemotherapy with Zhipu Liujunzi decoction under the concept of strengthening and consolidating body resistance for gastric cancer patients and nursing strategy. Contrast Media Mol Imaging. 2021, 2135924 (2021).
  20. Lin, Y., Koumba, M. H., Qu, S., Wang, D., Lin, L. Blocking NFATc3 ameliorates azoxymethane/dextran sulfate sodium induced colitis-associated colorectal cancer in mice via the inhibition of inflammatory responses and epithelial-mesenchymal transition. Cell Signal. 74, 109707 (2020).
  21. Yu, C. T., et al. Identification of significant modules and targets of Xian-Lian-Jie-Du decoction based on the analysis of transcriptomics, proteomics and single-cell transcriptomics in colorectal tumor. J Inflamm Res. 15, 1483-1499 (2022).
  22. Lin, L., Wang, D., Qu, S., Zhao, H., Lin, Y. miR-370-3p alleviates ulcerative colitis-related colorectal cancer in mice through inhibiting the inflammatory response and epithelial-mesenchymal transition. Drug Des Devel Ther. 14, 1127-1141 (2020).
  23. Qiu, X., Ma, J., Wang, K., Zhang, H. Chemopreventive effects of 5-aminosalicylic acid on inflammatory bowel disease-associated colorectal cancer and dysplasia: a systematic review with meta-analysis. Oncotarget. 8 (1), 1031-1045 (2017).
  24. Hou, Y., et al. Longzhibu disease and its therapeutic effects by traditional Tibetan medicine: Ershi-wei Chenxiang pills. J Ethnopharmacol. 249, 112426 (2020).
  25. Xie, N., et al. Rhodiola crenulate alleviates hypobaric hypoxia-induced brain injury via adjusting NF-κB/NLRP3-mediated inflammation. Phytomedicine. 103, 154240 (2022).
  26. Gok, A., et al. Role of reduced Bdnf expression in novel Apc mutant allele-induced intestinal and colonic tumorigenesis in mice. In Vivo. 37 (4), 1562-1575 (2023).
  27. Lin, Y., et al. Pou3f1 mediates the effect of Nfatc3 on ulcerative colitis-associated colorectal cancer by regulating inflammation. Cell Mol Biol Lett. 27 (1), 75 (2022).
  28. Xu, W., Zhao, R., Yuan, B. The therapeutic effect of traditional LiuJunZi decoction on ovalbumin-induced asthma in Balb/C mice. Can Respir J. 2021, 6406295 (2021).
  29. Kaihara, T., et al. Redifferentiation and ZO-1 reexpression in liver-metastasized colorectal cancer: possible association with epidermal growth factor receptor-induced tyrosine phosphorylation of ZO-1. Cancer Sci. 94 (2), 166-172 (2003).
  30. Lei, H. T., et al. Ki67 testing in the clinical management of patients with non-metastatic colorectal cancer: Detecting the optimal cut-off value based on the restricted cubic spline model. Oncol Lett. 24 (6), 420 (2022).
  31. Olén, O., et al. Colorectal cancer in ulcerative colitis: a Scandinavian population-based cohort study. Lancet. 395 (10218), 123-131 (2020).
  32. Arnold, M., et al. Global patterns and trends in colorectal cancer incidence and mortality. Gut. 66 (4), 683-691 (2017).
  33. Biller, L. H., Schrag, D. Diagnosis and treatment of metastatic colorectal cancer: A review. Jama. 325 (7), 669-685 (2021).
  34. Talero, E., et al. Expression patterns of sirtuin 1-AMPK-autophagy pathway in chronic colitis and inflammation-associated colon neoplasia in IL-10-deficient mice. Int Immunopharmacol. 35, 248-256 (2016).
  35. Qian, Z., et al. Mulberry fruit prevents LPS-induced NF-κB/pERK/MAPK signals in macrophages and suppresses acute colitis and colorectal tumorigenesis in mice. Sci Rep. 5, 17348 (2015).
  36. Pothuraju, R., et al. Depletion of transmembrane mucin 4 (Muc4) alters intestinal homeostasis in a genetically engineered mouse model of colorectal cancer. Aging. 14 (5), 2025-2046 (2022).
  37. Perše, M., Cerar, A. Dextran sodium sulphate colitis mouse model: traps and tricks. J Biomed Biotechnol. 2012, 718617 (2012).
  38. Zeng, B., et al. Dextran sodium sulfate potentiates NLRP3 inflammasome activation by modulating the KCa3.1 potassium channel in a mouse model of colitis. Cell Mol Immunol. 19 (8), 925-943 (2022).
  39. Parang, B., Barrett, C. W., Williams, C. S. AOM/DSS model of colitis-associated cancer. Methods Mol Biol. 1422, 297-307 (2016).
  40. Tanaka, T., et al. A novel inflammation-related mouse colon carcinogenesis model induced by azoxymethane and dextran sodium sulfate. Cancer Sci. 94 (11), 965-973 (2003).
  41. Suzuki, R., Kohno, H., Sugie, S., Nakagama, H., Tanaka, T. Strain differences in the susceptibility to azoxymethane and dextran sodium sulfate-induced colon carcinogenesis in mice. Carcinogenesis. 27 (1), 162-169 (2006).
  42. De Robertis, M., et al. The AOM/DSS murine model for the study of colon carcinogenesis: From pathways to diagnosis and therapy studies. J Carcinog. 10, 9 (2011).
  43. Song, J. L., et al. Dietary mixed cereal grains ameliorate the azoxymethane and dextran sodium sulfate-induced colonic carcinogenesis in C57BL/6J mice. J Med Food. 23 (4), 440-452 (2020).
  44. Zou, Y. F., et al. Effects of Huaier extract on ameliorating colitis-associated colorectal tumorigenesis in mice. Onco Targets Ther. 13, 8691-8704 (2020).
  45. Luo, X., et al. Obacunone reduces inflammatory signalling and tumour occurrence in mice with chronic inflammation-induced colorectal cancer. Pharm Biol. 58 (1), 886-897 (2020).
  46. Dai, Y., et al. Liujunzi Decoction ameliorated cisplatin-induced anorexia by inhibiting theJAK-STAT signaling pathway and coordinating anorexigenic and orexigenic neuropeptides in rats. J Ethnopharmacol. 285, 114840 (2022).
  47. Ghosh, D., Dutta, A., Kashyap, A., Upmanyu, N., Datta, S. PLP2 drives collective cell migration via ZO-1-mediated cytoskeletal remodeling at the leading edge in human colorectal cancer cells. J Cell Sci. 134 (18), jcs253468 (2021).
  48. Yan, S., et al. Berberine regulates short-chain fatty acid metabolism and alleviates the colitis-associated colorectal tumorigenesis through remodeling intestinal flora. Phytomedicine. 102, 154217 (2022).
  49. Ma, Y. L., et al. Immunohistochemical analysis revealed CD34 and Ki67 protein expression as significant prognostic factors in colorectal cancer. Med Oncol. 27 (2), 304-309 (2010).

Tags

מודל סרטן קולופרוקטיטיס עכברים אפקט טיפולי רפואה סינית סרטן המעי הגס מערכת העיכול ממאירות נגע טרום סרטני CRC הקשור ל- UC פיתוח תרופות חדשות רפואה סינית מסורתית מרתח Liujunzi אזומתאן נתרן דקסטרן סולפט משקל גוף עכבר אורך המעי הגס גורמים פתולוגיים גורמים דלקתיים תפקוד מחסום המעי הגס סמני סרטן מניעה וטיפול
ביסוס מודל סרטן קולופרוקטיטיס בעכברים והערכת ההשפעה הטיפולית של הרפואה הסינית
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Lyu, D., Wang, W., Xu, H., Li, P.,… More

Lyu, D., Wang, W., Xu, H., Li, P., Zhang, W., Meng, X., Liu, S. Establishment of Coloproctitis Cancer Model in Mice and Evaluation of Therapeutic Effect of Chinese Medicine. J. Vis. Exp. (200), e66045, doi:10.3791/66045 (2023).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter