Encyclopedia of Experiments: Biology
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- 먼저 마취곤충을 70% 에탄올 용액으로 침수하여 큐티클의 소수성을 감소시켰다.
다음으로, 흉부에서 머리와 복부를 제거합니다. 집게를 사용하여 coxa-흉부 접합에 부드러운 압력을 가하고 다리를 분리하십시오.
이어서, 고정용액을 제거하고 세제를 함유하는 인산염 완충식식염수로 조직을 여러 번 세척한다.
마지막으로, 다리를 장착 매체의 한 방울에 장착. 현미경 슬라이드와 커버슬립 사이에 스페이서를 사용하여 시편이 손상되지 않도록 하고 매니큐어로 마운트를 고정하십시오.
다음 예에서는 드로소필라 멜라노가스터 다리의 해부, 고정 및 장착을 볼 수 있습니다.
- 유리 멀티웰 플레이트에 적절한 수의 우물을 70% 에탄올로 채우는 것으로 시작합니다. 브러쉬를 사용하여 모든 연령 또는 성별의 15~20개의 이산화탄소 마취 파리를 각 우물에 추가하고 완전히 물에 잠길 때까지 파리를 에탄올에 부드럽게 두드려 주세요.
1분 이상 후, 시동당 10분 이상 인산염 완충식식염에 0.3% nonionic 계면활성제 세제용액으로 파리를 세 번 헹구는 다. 마지막 세척 후, 집게를 사용하여 흉부 세그먼트 또는 다리를 손상시키지 않고 각 플라이의 머리와 복부를 제거하고 미세 포셉 한 쌍의 끝을 사용하여 코카 흉부 접합에 압력을 부드럽게 바르지만 단단히 가하여 흉부 세그먼트에서 한 쪽 다리를 분리합니다.
갓 준비된 4% 파라포름알데히드를 얼음 위에 담은 새로운 멀티웰 플레이트의 한 웰에 다리를 놓고 섭씨 4도에서 하룻밤 동안 배양을 합니다.
- 다리를 고정 버퍼에 부드럽게 밀어 넣는 것이 중요합니다.
- 다음 날, 신선한 0.3 % nonionic 계면 활성제 세제 용액으로 다리를 세척 당 20 분 동안 5 번 세척하십시오. 마지막 세척 후 세제를 장착 매체로 교체하고 다리를 장착 매체에 24 시간 이상 유지하십시오.
다음 날, 유리 현미경 슬라이드의 코팅 된 끝 옆에 70 % 글리세롤의 약 20 마이크로 리터를 추가하고 22 에서 22 밀리미터 커버 슬립으로 글리세롤을 덮습니다.
미세한 집게를 사용하여, 중간 크기의 멀티웰 플레이트에서 10 마이크로리터 스트립으로 외부 측 또는 아래 방향에서 장착 매체로 옮기십시오. 6~8개의 다리가 장착되고 정렬될 때까지 반복하고, 두 번째 커버슬립이 첫 번째 커버슬립에 약간 놓이도록 다리에 두 번째 커버슬립을 놓는 다음, 커버슬립의 각 모서리에 매니큐어를 사용하여 고정을 고정합니다.
