0 visualizzazioni • 3:10 min. • April 30th, 2023
- Inizia con uova pellettate che sono state isolate sbiancando i vermi adulti gravidi. Assicurarsi che ogni fase di questa procedura sia condotta in modo sterile per evitare la contaminazione delle cellule in coltura. Sospendi il pellet in una soluzione di chitinasi, un enzima che scompone la chitina, un grande polisaccaride che è un componente strutturale del guscio dell'uovo.
Dopo un adeguato periodo di digestione, centrifugare delicatamente le uova e sostituire il surnatante con un terreno di coltura cellulare per fermare la digestione. Quindi, passa gli embrioni attraverso un ago calibro 18 per separare meccanicamente le singole cellule. Quindi, filtrare la soluzione per rimuovere i detriti dal guscio dell'uovo o i grumi di cellule non separati. Piastra le cellule in un piatto di coltura su un vetrino di vetro rivestito con agglutinina di arachidi, una lectina che aiuta le cellule ad attaccarsi al vetrino legando i carboidrati della superficie cellulare.
Nel protocollo di esempio, prepareremo cellule embrionali per la differenziazione morfologica e l'analisi in vitro.
- Mentre si lavora sotto una cappa a flusso laminare per evitare l'introduzione di contaminazioni batteriche, r
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