Centrifugazione con gradiente di densità: un metodo per isolare le cellule CLL dal sangue periferico

- Nei pazienti con leucemia linfatica cronica, o LLC, i linfociti a cellule B aumentano significativamente nel midollo osseo e nel sangue. Per isolare queste cellule CLL da un campione di sangue, in primo luogo, trattare il campione con un cocktail di arricchimento di cellule B umane che separa le cellule B utilizzando la selezione negativa. Gli anticorpi nel cocktail riconoscono e reticolano in modo specifico gli antigeni espressi dalle cellule non B e dagli eritrociti, formando complessi densi.

Quindi, sovrapporre il campione su un mezzo a gradiente di densità avente una densità ottimale per l'isolamento dei linfociti. Con la successiva centrifugazione, i diversi componenti del sangue si separano in base alle variazioni della loro densità rispetto al mezzo di gradiente. I complessi di cellule RBC-non-B con densità più elevate si depositano attraverso il mezzo, formando un pellet. La frazione plasmatica meno densa forma lo strato più superficiale. Le cellule CLL meno dense formano uno strato bianco all'interfaccia plasma-mezzo di densità.

Trasferire con cura lo strato bianco in un tubo nuovo. Centrifugare nuovamente per ottenere un pellet contenente cellule CLL purificate. Nel seg