Modello di cancerogenesi cutanea in due stadi indotta da sostanze chimiche: un modello murino sperimentale in vivo di cancro della pelle

- Nei modelli murini sperimentali di cancro, il cancro indotto nell'animale assomiglia al cancro umano nel fenotipo. Forniscono una piattaforma efficiente per valutare l'efficacia di potenziali terapie. Per indurre un modello di cancerogenesi cutanea in due fasi, in primo luogo, preparare un topo anestetizzato immunocompromesso in posizione prona. Radersi il pelo per esporre la pelle sottostante. Nella prima fase, applicare un potente agente antitumorale sulla pelle dorsale esposta.

Quei follicoli piliferi nella loro fase di riposo o telogen, ospitano ghiandole sebacee inattive. La conseguente mancanza di flusso di sebo consente l'accumulo del composto all'interno di questi follicoli piliferi. Il composto si diffonde nelle cellule circostanti e induce la mutazione genetica bersaglio, principalmente nelle cellule staminali del follicolo pilifero o nelle cellule staminali primarie dei cheratinociti. L'espressione genica alterata provoca l'inizio del tumore in queste cellule.

Nella seconda fase, applicare ripetutamente un agente promotore della crescita tumorale adatto sulla pelle dorsale durante gli intervalli di tempo desiderati. La sostanza chimica stimola l'espansione della popolazione cellulare iniziata. La continua proliferazione cellulare porta alla formazione di escrescenze cancerogene chiamate papillomi.

Nel seguente protocollo, mostriamo la generazione di un modello murino di carcinogenesi cutanea a due stadi utilizzando le sostanze chimiche DMBA, un mutageno, e TPA, un agente che promuove la crescita.

- Prima di iniziare l'esperimento, alloggiare tutti i topi aggressivi di 7-9 settimane in gabbie separate per evitare combattimenti e lesioni cutanee. Per l'induzione del papilloma cutaneo, in primo luogo, radere le pelli posteriori degli animali da esperimento e pesare i topi individualmente. Quarantotto ore dopo la rasatura, utilizzare una pipetta per applicare 50 microgrammi di DMBA in 200 microlitri di acetone sulla zona rasata di ciascun topo anestetizzato.

Per la promozione del papilloma cutaneo, sette giorni dopo l'applicazione del DMBA, trattare la pelle con 5 microgrammi di TPA in 200 microlitri di acetone, due volte a settimana fino alla fine dell'esperimento. Esamina gli animali alla ricerca di papillomi e fotografa e registra le dimensioni di ogni singolo papilloma su una mappa, ogni settimana.

Una massa palpabile di diametro superiore a 1 millimetro è considerata un papilloma se rimane più lunga di una settimana.