Coltura rapida di melanociti murini primari e fibroblasti: isolamento di melanociti e fibroblasti da un campione di pelle intera murina

- La pelle è costituita da varie cellule che popolano i suoi diversi strati. I melanociti, le cellule produttrici di melanina, si localizzano alla giunzione epidermico-dermica, mentre i fibroblasti, le cellule che generano il tessuto connettivo, risiedono nel derma.

Per isolare rapidamente melanociti e fibroblasti, inizia prendendo la proboscide di un cucciolo di topo soppresso. Tagliare la pelle ventralmente per tutta la lunghezza del tronco. Staccare la pelle contenente lo strato epidermico e dermico e tritare il tessuto in piccoli pezzi.

Ora, trattare con un tampone digestivo contenente tripsina e collagenasi enzimi che degradano la matrice extracellulare, rilasciando le cellule in sospensione. Centrifugare per pellettizzare le celle e scartare il surnatante. Risospendere le cellule in un terreno melanocitario e trasferire la sospensione in una piastra multipozzetto.

Durante la coltura, la maggior parte dei fibroblasti aderisce al fondo del pozzetto, mentre i melanociti e le altre cellule epidermiche rimangono in sospensione. Aspirare le cellule sospese e aggiungere terreni specifici per i fibroblasti alla coltura dei fibroblasti per favorirne la crescita. Trasferire la sospensi