Name: Fondamenti electrospinning: Soluzione Ottimizzazione e parametri Apparatus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-01-21T17:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 57 s
Description: Impara l'elettrofilatura per produrre nanofibre allineate e uniformi per applicazioni di ingegneria tessutale. Questo metodo ottimizza parametri di soluzione e apparato per supportare la crescita cellulare.

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Questo lavoro è stato sostenuto da NIH K08 EB003996 e la Paralyzed Veterans of America Research Foundation Grant 2573.

1. Scegli un polimero <ol><li> Scegli un polimero (per esempio, poli-L-lattico (PLLA), policaprolattone (PCL), polistirolo (PS) o di nylon) in base alle vostre specifiche (ad esempio, biodegradabile, termoplastico o cross-collegabili) e un solvente di quel polimero. Scegliere adeguati dispositivi di protezione individuale in base alla selezione. </li><li> Seleziona un substrato in base all'applicazione (ad esempio, wafer di vetro, plastica, metallo o silicone). </li></ol> 2. Scegli un collettore <ol><li> Scegli la geometria del collettore in base alle specifiche. Fibre casuali possono essere raccolte su piastre fisse. Fibre allineate possono essere raccolti in rapida rotazione ruote, tamburi o aste o su piastre parallele. </li><li> Il collettore deve essere conduttivo e deve rimanere isolato dal suo asse in modo che possa essere messo a terra anche senza messa a terra oggetti adiacenti, il piano del tavolo, ecc </li></ol> 3. Approssimare la concentrazione Entanglement critico empirico 1 <ol><li> Preparare diverse concentrazioni di polimero candidati (ad esempio, 4, 10, 15, 20, 30% in peso) e scegliere una concentrazione che scorre (la soluzione dovrebbe essere un liquido viscoso, ma non un gel) per iniziare. </li><li> Sistemare il dispositivo di electrospinning 2,3,4,5 (vedi Figura 1) <ol><li> Caricare la pompa a siringa e impostare la velocità della pompa in modo che ogni goccia di soluzione cancellato dalla punta viene immediatamente sostituito. </li><li> Terra il collettore e la clip il filo ad alta tensione alla piastra conduttore (un piccolo quadrato di materiali conduttivi, come un foglio di alluminio attraverso i quali il sporge siringa punta). </li><li> Avviare la ruota gira. </li><li> Assicurarsi che l'alimentazione è impostato a zero prima di accenderla. </li></ol></li><li> Osservare il flusso <ol><li> Rampa di tensione lentamente e guardare il tallone della soluzione sulla punta dell'ago. </li><li> Regolare la tensione per ottenere un flusso lungo e costante. Se un flusso costante non è possibile ottenere, regolare la concentrazione della soluzione polimerica. Vedi Tabella 1 per un esempio. </li></ol></li></ol> 4. Risoluzione dei problemi - la corrente: <ol><li> Problemi di visualizzazione del flusso <ol><li> Utilizzare uno sfondo scuro opaco e posto una sorgente di luce unidirezionale (come una torcia elettrica) tra lo spettatore e il torrente (vedi Figura 2). </li></ol></li><li> Dripping dalla siringa <ol><li> Se la soluzione polimero è sgocciolamento verso il basso senza attrazione verso la ruota, assicurarsi che la piastra conduttore è in contatto con la punta dell'ago e che il collettore è il contatto con la terra. </li><li> Se la goccia di soluzione di polimero in punta siringa è appoggiata in direzione della ruota, ma non è che formano un ruscello, aumentare la tensione. La qualità dello stream può essere regolata variando la distanza e la tensione fino a quando un flusso costante è visibile. Vedi Figura 3 per le distanze suggerite con tensioni corrispondenti per una soluzione PLLA 4% e un 8x8 piatto conduttore cm. </li></ol></li><li> Globs grande alla punta della siringa <ol><li> Quando la soluzione polimero comincia a raccogliere e ad indurire la punta di un ago swipe, il glob via con un tovagliolo di carta attaccato ad un bastone non conduttivo. </li></ol></li><li> Oscillante o 'agita' flussi Quando il flusso si agita su e giù velocemente, abbassare la tensione o aumentare la distanza tra la punta della siringa e la ruota. Se il flusso continua ad utilizzare wag una maggiore concentrazione di polimero o aggiungere un po 'di solvente con una evaporazione più lenta. </li><li> Corsi brevi o discontinue Visibile flussi costante il contatto osservabile con il set ruota a una velocità di rotazione alta resa la più alta qualità di uniformità e l'allineamento. Quando il flusso è breve e discontinua, aumentando la soluzione polimerica, aggiungendo più lenta evaporazione di solventi, e regolando la tensione a migliorare la durata e la stabilità del flusso. </li></ol> 5. Risoluzione dei problemi - Fiber Morfologia 6,7,8 (vedi figura 4) <ol><li> Bordatura Quando le gocce vengono scoperti nelle fibre, aumentare la soluzione polimerica e assicurarsi che la piastra conduttore è il contatto continuo con l'ago e che la spazzola metallica messa a terra è in contatto continuo con la ruota. </li><li> Nastri e fibre di sanguinamento Quando le fibre si stanno formando come nastri o sono il sanguinamento insieme, utilizzare una maggiore concentrazione di polimero o un solvente con un alto tasso di evaporazione (più volatili). </li><li> Fibre svolazzo o ondulato Quando le fibre si stanno formando onde o riccioli, aumentare la velocità delle ruote o spostare la punta dell'ago ulteriormente dal collettore. Inoltre, verificare che la piastra di conduttore e collezionista non sono vibranti. </li><li> Porosità 9 Se i pori sono desiderati, utilizzare un solvente evapora rapidamente. Se i pori non sono desiderati, provare ad aggiungere una piccola quantità di co-solvente che è meno volatile rispetto al solvente principali. </li><li> Allineamento 10 Quando il collettore è movzione ad un basso numero di giri oa riposo, la qualità è scarsa l'allineamento. Aumentare l'allineamento aumentando la velocità della ruota. </li></ol> 6. Rappresentante dei risultati: Si prega di fare riferimento alla Figura 4 per le raffigurazioni di risultati fibra tipici. <img src="/files/ftp_upload/2494/2494fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Electrospinning Una configurazione tipica. Una soluzione di polimero (blu) è erogato da una pompa a siringa (arancione). Un alta tensione in corrente continua (verde) ragioni un collezionista ruota in rapida rotazione (grigio) su cui sono raccolti nanofibre allineati. Il getto polimerico tra la siringa e il collettore è costituito da un segmento costante streaming e un segmento in rapida oscillazione fustigazione. <img src="/files/ftp_upload/2494/2494fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> . Figura 2 Il getto è visibile in streaming in uscita la punta della siringa, il getto fustigazione è troppo piccolo per essere visto. Approssimare la concentrazione critica groviglio di PLLA <table border="1"><tbody><tr><td> PLLA (% peso / v) </td><td> Osservazione </td><td> Concentrazione di regolazione </td></tr><tr><td> 0,5 </td><td> Gocciolamento, nessun flusso </td><td> Aumentare </td></tr><tr><td> 2,0 </td><td> Sputare globs piccoli; alcun flusso </td><td> Increse leggermente </td></tr><tr><td> 4.0 </td><td> Flusso costante </td><td> Bene </td></tr><tr><td> 6.0 </td><td> Sputare globs grande o perline </td><td> Diminuire leggermente </td></tr><tr><td> 12,0 </td><td> Aggregazione alla punta; alcun flusso </td><td> Diminuire </td></tr></tbody></table> Tabella 1. Un esempio raffigurante il ravvicinamento della concentrazione critica di entanglement PLLA. Varie concentrazioni di polimero sono provati e il conseguente flusso getti osservati fino ad un flusso costante si ottiene. <img src="/files/ftp_upload/2494/2494fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. La distanza tra la punta della siringa e il collettore deve essere bilanciata con la tensione applicata per ottenere un getto costante di streaming. L'eccesso di tensione applicata causa un oscillante o 'agita' getto di forma che si traduce in meno fibre ben allineati. Quando la tensione è troppo bassa, non getto si forma e la soluzione sarà solo gocciolare dalla punta della siringa. La regione ombreggiata rappresenta viola di sopra del range di tensione in cui un getto continuo di streaming può essere ottenuto per PLLA in funzione della siringa-to-collezionista distanza. <img src="/files/ftp_upload/2494/2494fig4.jpg" alt="Figura 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 4"> Figura 4. Fibre elettrofilate possono presentare una varietà di morfologie, tra cui bordare (A), nastri (B), ghirigori (C), globs poroso (D), un buon allineamento (E) e l'allineamento poveri (F).

<ol><li>Shenoy, S. L., Bates, W. D., Frisch, H. L., Wnek, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+chain+entanglements+on+fiber+formation+during+electrospinning+of+polymer+solutions%3A+good+solvent%2C+non-specific+polymer-polymer+interaction+limit%5BTitle%5D)+AND+%22Polymer%22%5BJournal%5D)">Role of chain entanglements on fiber formation during electrospinning of polymer solutions: good solvent, non-specific polymer-polymer interaction limit.</a> Polymer. 46, 3372-3384 (2005).</li>
<li>Gertz, C. C., Leach, M. K., Birrel, L. K., Martin, D. C., Feldman, E. L., Corey, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+neuritogenesis+and+maturation+of+primary+spinal+motor+neurons+in+response+to+nanofibers%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Accelerated neuritogenesis and maturation of primary spinal motor neurons in response to nanofibers.</a> Dev. Neurobiol. 70, 589-603 (2010).</li>
<li>Lin, D. Y., Johnson, M. A., Vohden, R. A., Chen, D., Martin, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tailored+nanofiber+morphologies+using+modulated+electrospinning+for+biomedical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Mat.+Res.+Soc.+Symp.+Proc%22%5BJournal%5D)">Tailored nanofiber morphologies using modulated electrospinning for biomedical applications.</a> Mat. Res. Soc. Symp. Proc. 736, D3.8.1-D3.8.6 (2003).</li>
<li>Corey, J. M., Gertz, C. C., Wang, B. S., Birrell, L. K., Johnson, S. L., Martin, D. C., Feldman, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+design+of+electrospun+PLLA+nanofiber+scaffolds+compatible+with+serum-free+growth+of+primary+motor+and+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Acta.+Biomater%22%5BJournal%5D)">The design of electrospun PLLA nanofiber scaffolds compatible with serum-free growth of primary motor and sensory neurons.</a> Acta. Biomater. 4, 863-875 (2008).</li>
<li>Corey, J. M., Lin, D. Y., Mycek, K. B., Chen, Q., Samuel, S., Feldman, E. L., Martin, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aligned+electrospun+nanofibers+specify+the+direction+of+dorsal+root+ganglia+neurite+growth%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Mater.+Res.+A%22%5BJournal%5D)">Aligned electrospun nanofibers specify the direction of dorsal root ganglia neurite growth.</a> J. Biomed. Mater. Res. A. 83, 636-645 (2007).</li>
<li>Tan, S. -H., Kotaki, M., Ramakrishna, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+parameter+study+for+ultra-fine+fiber+fabrication+via+electrospinning+process%5BTitle%5D)+AND+%22Polymer%22%5BJournal%5D)">Systematic parameter study for ultra-fine fiber fabrication via electrospinning process.</a> Polymer. 46, 6128-6134 (2005).</li>
<li>Yang, F., Murugan, R., Wang, S., Ramakrishna, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrospinning+of+nano%2Fmicro+scale+poly%28L-lactic+acid%29+aligned+fibers+and+their+potential+in+neural+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Electrospinning of nano/micro scale poly(L-lactic acid) aligned fibers and their potential in neural tissue engineering.</a> Biomaterials. 26, 2603-2610 (2005).</li>
<li>Li, W., Laurencin, C. T., Caterson, E. J., Tuan, R. S., Ko, F. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrospun+nanofibrous+structure%3A+A+novel+scaffold+for+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Mater.+Res.+A%22%5BJournal%5D)">Electrospun nanofibrous structure: A novel scaffold for tissue engineering.</a> J. Biomed. Mater. Res. A. 60, 613-621 (2002).</li>
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<li>Wang, H. B., Mullins, M. E., Cregg, J. M., Hurtado, A., Oudega, M., Trombley, M. T., Gilbert, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creation+of+highly+aligned+electrospun+poly-L-lactic+acid+fibers+for+nerve+regeneration+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neural+Eng%22%5BJournal%5D)">Creation of highly aligned electrospun poly-L-lactic acid fibers for nerve regeneration applications.</a> J. Neural Eng. 6, (2009).</li>
</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Nota: La maggior parte degli esempi presentati qui affrontare electrospinning poli-L-lattico (PLLA) nanofibre. Questo è semplicemente perché PLLA è il polimero più comunemente filata nel nostro laboratorio. Tuttavia, abbiamo anche utilizzato con successo questi metodi per electrospin altri polimeri (ad esempio, PLGA, PCL, PS) e credono che le tecniche qui presentate sono facilmente applicabile alla maggior parte delle medie e soluzioni ad alto peso molecolare del polimero.

<table><tbody><tr><td>Alimentatore di tensione continua ad alta tensione</td><td>Gamma High Voltage</td><td>ES40P-5W</td><td></td></tr><tr><td>Pompa per siringa</td><td>KD Scientific</td><td>KDS100</td><td></td></tr><tr><td>Foglio di alluminio</td><td>Reynolds Wrap</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Punte metalliche smussate, 23ga</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-850-102</td><td></td></tr><tr><td>Siringa in polipropilene</td><td>BD Biosciences</td><td>309585</td><td></td></tr><tr><td>Collettore rotante o fisso</td><td>Prodotto su misura</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pinze a coccodrillo e fili vari</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dimetilformammide</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC11622-0010</td><td></td></tr><tr><td>Cloroformio</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC42355-0040</td><td></td></tr><tr><td>PLLA</td><td>Boehringer Ingeheim</td><td>Resomer L210</td><td></td></tr><tr><td>PLGA 85:15</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>43471</td><td></td></tr><tr><td>Nastro di carbonio</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>13073-1</td><td></td></tr></tbody></table>

fondamenti electrospinning: soluzione ottimizzazione e parametri apparatus

Electrospinning Fundamentals: Optimizing Solution and Apparatus Parameters

Elettrofilate ponteggi nanofibre hanno dimostrato di accelerare la maturazione, migliorare la crescita, e diretto la migrazione delle cellule in vitro. Electrospinning è un processo in cui è raccolto un jet carico polimero in un collettore a terra, una rapida rotazione risultati collettore in nanofibre allineate, mentre i collezionisti risultato stazionario in stuoie di fibre orientate in modo casuale. Il getto polimero si forma quando una carica elettrostatica applicata supera la tensione superficiale della soluzione. Vi è una concentrazione minima di un polimero dato, definito la concentrazione entanglement critica, sotto il quale un getto stabile non può essere ristabilita o se non nanofibre si forma - anche se le nanoparticelle possono essere raggiunti (electrospray). Un getto stabile ha due domini, un segmento di streaming e un segmento di frustate. Mentre il getto fustigazione è solitamente invisibile ad occhio nudo, il segmento streaming è spesso visibile in condizioni di luce adeguata. Osservando la lunghezza, lo spessore, la consistenza e il movimento del flusso è utile per prevedere l&#39;allineamento e la morfologia delle nanofibre in formazione. Un flusso breve, non uniforme, incoerente, e / o oscillante è indicativo di una serie di problemi, tra cui l&#39;allineamento delle fibre poveri, perline, schizzi, modelli e svolazzo o ondulato. Il flusso può essere ottimizzato regolando la composizione della soluzione e la configurazione degli apparati electrospinning, ottimizzando l&#39;allineamento e la morfologia delle fibre prodotte. In questo protocollo, vi presentiamo una procedura per la creazione di un apparato di base electrospinning, empiricamente approssimare la concentrazione critica groviglio di una soluzione polimerica e ottimizzando il processo di electrospinning. In aggiunta, discutiamo alcuni problemi comuni e le tecniche di risoluzione dei problemi.

Electrospinning tecniche possono creare una varietà di impalcature nanofibrous per l&#39;ingegneria tissutale o altre applicazioni. Descriviamo qui una procedura per ottimizzare i parametri della soluzione elettrofilatura e gli apparecchi di ottenere fibre con la morfologia e l&#39;allineamento desiderato. Problemi comuni e le tecniche di risoluzione dei problemi sono anche presentato.

Fondamenti electrospinning: Soluzione Ottimizzazione e parametri Apparatus

È stato dimostrato che gli scaffold di nanofibre ottenute tramite electrospinning accelerano la maturazione, migliorano la crescita e orientano la migrazione delle cellule in vitro. ...

Questo esperimento dimostra l'elettrofilatura di impalcature di nanofibre per strutture extracellulari di supporto cellulare in vitro e in vivo. Iniziare scegliendo un solvente polimerico e una geometria del collettore adatti al tipo desiderato di nanofibre. Il passaggio più importante di questo processo consiste nel determinare la concentrazione critica di intreccio al di sopra della quale è possibile formare fibre.Successivamente, occorre regolare il sistema per produrre densità, diametro e allineamento delle fibre. La microscopia elettronica desiderata indica i diversi tipi di fibre che possono essere prodotte. È stato dimostrato che questi scaffold di nanofibre elettrofilate accelerano la maturazione, migliorano la crescita e guidano la migrazione delle cellule in vitro.Generalmente, le persone nuove rispetto a questo metodo incontreranno difficoltà perché l'elettrofilatura può essere un processo delicato. Le dimostrazioni visive di questo metodo sono fondamentali, poiché i passaggi di ottimizzazione dell'apparato risultano difficili da comprendere senza un'esperienza pregressa nell'elettrofilatura. Quando si sceglie un polimero e un solvente per l'elettrofilatura, considerare caratteristiche come biodegradabilità, termoplasticità e capacità di reticolazione, tenendo presente l'applicazione finale.Quindi determinare l'equipaggiamento di protezione individuale adeguato in base alle opzioni selezionate. Successivamente, selezionare un substrato su cui raccogliere le nanostrutture, come vetro, plastica, metallo o wafer di silicio. Scegliere ora la geometria del collettore.Le fibre disposte in modo casuale vengono raccolte su piastre ferme. Mentre le fibre allineate possono essere raccolte su ruote in rapida rotazione, tamburi, aste o piastre parallele, è necessario garantire che il collettore sia conduttivo e rimanga isolato in modo da poter essere messo a terra senza mettere a terra contemporaneamente oggetti adiacenti. Nel caso di collettori rotanti, la ruota deve essere isolata rispetto al suo perno.Per approssimare empiricamente la concentrazione critica di intreccio, preparare diverse concentrazioni polimeriche candidate; tra queste, scegliere una concentrazione che scorra. La soluzione dovrebbe essere un liquido viscoso, ma non un gel. A questo punto, impostare l'apparato di elettrofilatura.La siringa deve essere posizionata a una distanza di 20 centimetri dal collettore per iniziare a caricare la pompa per siringa con la soluzione scelta e impostare la velocità della pompa in modo che ogni goccia di soluzione rimossa dalla punta venga immediatamente sostituita. Collegare a terra il collettore e fissare il cavo ad alta tensione alla piastra conduttrice. Assicurarsi che l'alimentatore sia impostato a zero prima di avviare la rotazione della ruota e, aumentando lentamente la tensione, osservare il battito della soluzione alla punta dell'ago e monitorare il flusso.Continuare a regolare la tensione per ottenere un getto lungo e stabile. Se non è possibile ottenere un getto stabile, regolare prima la concentrazione della soluzione polimerica. Se il getto è difficile da vedere, utilizzare uno sfondo opaco scuro e posizionare una sorgente luminosa unidirezionale tra l'osservatore e il getto.A volte, la soluzione polimerica gocciola direttamente dalla punta della siringa senza essere attratta dalla ruota. In questo caso, verificare che la piastra conduttrice sia a contatto con la punta dell'ago e che il collettore sia collegato a massa. Se la goccia di soluzione polimerica sulla punta della siringa è inclinata verso la ruota ma non forma un getto, aumentare la tensione.Effettuare le regolazioni variando la distanza e la tensione finché non si ottiene un flusso costante. Quando si formano grossi grumi di polimero alla punta della siringa, rimuoverli con un tovagliolo di carta fissato a un bastoncino non conduttivo. Per correggere flussi oscillanti o ondulanti, ridurre la tensione o aumentare la distanza tra la punta della siringa e la ruota.Se il getto continua a oscillare, utilizzare una concentrazione più elevata di polimero oppure aggiungere un po' di solvente con un'evaporazione più lenta alla soluzione. Visibile. Getti stabili che entrano in contatto osservabile con la ruota impostata a un'elevata velocità di rotazione garantiscono la massima uniformità e allineamento, migliorando la lunghezza e la stabilità di un getto breve e discontinuo. Aumentare la soluzione polimerica.Aggiungere ulteriore solvente a lenta evaporazione oppure regolare la tensione. A volte, quando si raccolgono fibre casuali su una piastra stazionaria, le fibre possono iniziare a formare fogli o filati a mezz'aria. Questo indica che la tensione è impostata troppo alta.Quando si osservano perle nelle fibre, aumentare la soluzione polimerica e assicurarsi che la piastra conduttrice sia in contatto continuo con l'ago e che il pennello metallico collegato a terra sia in contatto continuo con la ruota. Inoltre, si dovrebbe cercare di ottenere un flusso costante. Flussi irregolari spesso indicano la formazione di fibre perlinate.Se le fibre si formano come nastri o si espandono, utilizzare una concentrazione più elevata di polimero o un solvente con una velocità di evaporazione più alta per correggere le fibre che formano onde o arricciamenti. Aumentare la velocità della ruota o spostare la punta della siringa più lontano dal collettore. Inoltre, verificare che la piastra conduttrice e il collettore non vibrino.A volte si desidera creare pori, in tal caso utilizzare semplicemente un solvente ad elevata evaporazione. Tuttavia, se i pori non sono desiderati, provare ad aggiungere una piccola quantità di solvente coadiuvante meno volatile del solvente principale. Quando il collettore ruota a bassi giri al minuto o è fermo, la qualità dell'allineamento è scarsa.Aumentare l'allineamento aumentando la velocità della ruota. Le nanostrutture elettrofilate sono efficaci nella coltura e nello studio di vari tipi cellulari. Ad esempio, i neuroni primari di ratto possono essere colorati per la beta tubulina e la controcolorazione nucleare dpi.È importante notare che le fibre possono essere visualizzate anche quando un colorante come il solforamina viene aggiunto alla soluzione di filatura dopo il suo sviluppo. Questa tecnica ha permesso ai ricercatori nel campo dei biomateriali e della biologia cellulare di esplorare le interazioni tra le cellule e una varietà di caratteristiche e geometrie nano-topografiche. Non bisogna dimenticare che lavorare con alte tensioni può essere estremamente pericoloso, e si devono sempre adottare precauzioni per isolare l'operatore dall'apparecchiatura durante l'esecuzione di questa procedura.

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