Ottenere cellule di cancro ovarico primario da campioni solidi: un metodo per coltivare cellule di cancro ovarico epiteliale da campioni di tumore ovarico

Le cellule epiteliali presenti sulla superficie esterna dell'ovaio possono subire una trasformazione maligna in cellule cancerose che possono crescere in tumori ovarici.

Per isolare queste cellule epiteliali di cancro ovarico o EOC, inizia prendendo un campione di tumore ovarico e tritalo in piccoli pezzi. Trasferire i pezzi tritati in una provetta contenente un tampone di digestione integrato con l'enzima proteasi desiderato.

Queste proteasi degradano le proteine della matrice extracellulare all'interno del tessuto, rilasciando in sospensione cellule EOC, eritrociti e alcuni fibroblasti dissociati.

Filtrare l'impasto cellulare attraverso un colino per separare le singole cellule sospese dai pezzi di tessuto non dissociati. Centrifugare la sospensione per pellettizzare le cellule EOC, gli eritrociti e i fibroblasti. Eliminare il surnatante contenente enzima.

Risospendere il pellet cellulare in un terreno di crescita epiteliale e trasferirlo in un piatto di coltura. Incubare la coltura per consentire alle cellule EOC e ai fibroblasti di attaccarsi alla base della piastra mentre gli eritrociti galleggiano nel terreno.

Rimuovere gli eritrociti sospesi rinfrescando il terreno. Nel tempo, il terreno facilita la crescita selettiva delle cellule EOC sui fibroblasti per formare un monostrato di cellule di cancro ovarico primario.

Raccogliere il campione dalla sala operatoria e trasportarlo in laboratorio su ghiaccio. Sempre all'interno del contenitore trasportato, collocare il campione in una cappa di sicurezza biologica. Trasferire il campione da una provetta conica da 50 millilitri su una piastra di Petri da 60 millimetri per 60 millimetri contenente 10 millilitri di PBS fresco ghiacciato.

Successivamente, utilizzando una lama di rasoio sterile, tagliare ulteriormente il campione in pezzi di 2 millimetri o più piccoli. Quindi, trattare il DMEM con la dispasi II in un tubo conico da 15 millilitri. Trasferire i tessuti tritati nella provetta di miscela DMEM dispase II. Quindi, incubare il campione al 5% di anidride carbonica e 37 gradi Celsius per 30 minuti. Agitare manualmente il liquame cellulare ogni cinque minuti per garantire una digestione ottimale.

Dopo l'incubazione, trasferire l'impasto cellulare attraverso un filtro cellulare a maglie da 70 micrometri posizionato sopra un tubo conico da 50 millilitri. Applicare delicatamente una pressione contro la rete utilizzando uno stantuffo della siringa. Scartare il tessuto non dissociato rimasto sulla parte superiore della rete e raccogliere la sospensione cellulare ottenuta nella provetta conica sterile da 50 millilitri.

Quindi, centrifugare la provetta conica a 320 x g per sette minuti a 4 gradi Celsius. Scartare il surnatante e risospendere il pellet cellulare in 10 millilitri di DMEM contenente il 10% di FBS e l'1% di PS. Quindi, trasferire la sospensione cellulare in una capsula di Petri e incubare la sospensione al 5% di anidride carbonica e 37 gradi Celsius. Cambiare il terreno 24 ore dopo la placcatura iniziale per rimuovere i detriti cellulari e la maggior parte degli eritrociti presenti nella coltura.

Infine, cambiare il terreno ogni tre giorni per le due settimane successive, dopodiché le colture di cellule EOC primarie sono pronte per le applicazioni a valle.

• Ovarian Tumor Sample - The tissue of origin from an ovarian tumor, used for lab analysis.
• Epithelial Ovarian Tumor Sample - A subtype of ovarian tumor sourced from epithelial cells.
• Ovarian Cancer Sample - Biopsy or excision sample of an ovarian malignant growth.
• DMEM - Standard cell culture medium used for growing mammalian cells.
• FBS - Fetal Bovine Serum, a supplement used in cell cultures to promote growth and survival.

• Introduce Ovarian Tumor Sample – The sample retrieved from patients, used for cellular analyses (e.g., epithelial ovarian tumor sample).
• Key Concepts – Overview of sample processing techniques (e.g., mincing, digestion).
• Underlying Mechanisms – Dissecting the biochemical processes during sample handling, e.g., enzymatic digestion and cell plating.
• Connect to Experiment – The cultivation of epithelial ovarian cancer cells paves the way for further cancer research.

• What is an ovarian tumor sample and how to process it?
• How does the sample processing facilitate downstream applications?
• Why does cell slurry need to be strained and centrifuged?

• Practical Applications – Ovarian cancer research and possible therapeutic development (e.g., drug screening).
• Industry Impact – Used in biomedical research and pharmaceutical industry (e.g., cancer drug development).
• Societal Importance – Advances in ovarian cancer treatment can increase survival rates (e.g., patient prognosis).
• Link to scientific Advancements – Adoption of this methodology contributes to cancer research advancements.