Metodo per ottenere primarie cellule tumorali ovariche da campioni solidi
4 febbraio 2014
Questo studio descrive un metodo dettagliato per l'isolamento e la caratterizzazione di cellule tumorali ovariche primarie da campioni clinici solidi. Cancro ovarico campioni clinici sono sottoposti a digestione enzimatica per ottenere praticabile, privo di fibroblasti cancro ovarico epiteliale (EOC), le cellule particolarmente adatto per applicazioni a valle.
L'obiettivo generale di questa procedura è isolare e caratterizzare le cellule di carcinoma ovarico primario da campioni clinici solidi. Ciò si ottiene raccogliendo prima il campione di tumore ovarico e mettendolo in una capsula di Petri. Il secondo passo consiste nel tagliare il campione in pezzi e trasferire i pezzi in una provetta conica con reagenti per la digestione per l'incubazione.
Successivamente, l'impasto cellulare viene fatto passare attraverso un filtro in cui vengono raccolte solo le cellule Per la centrifugazione, il passaggio finale consiste nello scartare il surnatante e risospendere le cellule in terreno per l'incubazione durante la notte. In definitiva, le cellule epiteliali del cancro ovarico cresceranno in coltura per settimane, il che consente applicazioni a valle. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo del cancro ovarico, ad esempio quale sia la migliore opzione di trattamento per ogni singola paziente.
Le implicazioni di questa tecnica si estendono al trattamento del cancro ovarico perché ci consente di utilizzare colture cellulari più realistiche, che sono altamente suscettibili alla manipolazione genetica e sono più utili per i test di screening farmacologico. Per iniziare, integrare 500 millilitri di delcos, aquile modificate, medium o DMEM con il 10% di siero fetale bovino o FBS e l'1% di penicillina, streptomicina o ps. Conservare il terreno a quattro gradi Celsius.
Raccogliere il campione dalla sala operatoria e trasportarlo con ghiaccio al laboratorio ancora all'interno del contenitore trasportato. Collocare il campione in una cappa di sicurezza biologica. Trasferire il campione da una provetta conica da 50 millilitri su una piastra di Petri da 60 millimetri per 60 millimetri contenente 10 millilitri di PBS fresco ghiacciato.
Quindi, utilizzando ulteriormente una lama di rasoio sterile, tagliare il campione in pezzi di due millimetri o più piccoli. Quindi trattare il DMEM con un tubo di pasta discontinua in un tubo conico da 15 litri. Trasferire i tessuti tritati nella provetta di miscela DMEM dispa two.
Quindi incubare il campione al 5% di anidride carbonica e 37 gradi Celsius per 30 minuti. Agitare manualmente il liquame cellulare ogni cinque minuti per garantire una digestione ottimale. Dopo l'incubazione, trasferire l'impasto cellulare attraverso un filtro cellulare a maglie di 70 micrometri posizionato sopra un tubo conico da 50 millilitri.
Applicare delicatamente una pressione contro la rete utilizzando uno stantuffo della siringa, scartare il tessuto non associato rimasto sulla parte superiore della rete e raccogliere la sospensione cellulare ottenuta nella provetta conica sterile da 50 millilitri. Quindi, centrifugare. Il tubo conico a 320 volte G per sette minuti a quattro gradi Celsius.
Scartare il surnatante e risospendere il pellet cellulare in 10 millilitri di DMEM contenente il 10% di FBS e l'1% di ps. Quindi trasferire la sospensione cellulare in una capsula di Petri e incubare la sospensione al 5% di anidride carbonica e 37 gradi Celsius. Cambiare il terreno 24 ore dopo la placcatura iniziale per rimuovere i detriti cellulari e la maggior parte degli eritrociti presenti nella coltura.
Infine, cambiare il terreno ogni tre giorni per le due settimane successive, dopodiché le colture di cellule EOC primarie sono pronte per le applicazioni a valle. Immediatamente dopo la placcatura. Le cellule epiteliali del cancro ovarico o cellule EOC appaiono come sospensioni di singole cellule e in grumi con eritrociti e detriti cellulari abbondano.
La coltura cellulare EOC tre giorni dopo la piastratura mostra cluster di cellule EOC semiaderenti e una minore contaminazione eritrocitaria. Una settimana dopo la placcatura iniziale, la coltura cellulare EOC diventa un ammasso di cellule a spirale che si diffonde sulla plastica della coltura tissutale. La tipica morfologia epiteliale del ciottolo può essere osservata in un monostrato confluente di cellule EOC dopo 14 giorni di coltura.
Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come isolare e caratterizzare le cellule di cancro ovarico primario da campioni clinici solidi.
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Panoramica
Questo studio descrive un metodo dettagliato per l'isolamento e la caratterizzazione di cellule tumorali ovariche primarie da campioni clinici solidi. La procedura consente la crescita di cellule di carcinoma ovarico epiteliale in coltura, facilitando applicazioni successive.
Componenti Chiave dello Studio
Ambito Scientifico
- Oncologia
- Biologia cellulare
- Ricerca clinica
Sfondo
- Il cancro ovarico è un problema sanitario rilevante con opzioni di trattamento complesse.
- L'isolamento di cellule tumorali vitali è fondamentale per la medicina personalizzata.
- I metodi attuali potrebbero non produrre cellule pure di carcinoma ovarico epiteliale.
- Questo studio mira a migliorare il processo di isolamento per ottenere risultati di ricerca migliori.
Scopo dello studio
- Isolare cellule primarie di cancro ovarico da campioni clinici.
- Caratterizzare le cellule isolate per ulteriori applicazioni.
- Migliorare la comprensione delle opzioni terapeutiche per i pazienti con cancro ovarico.
Metodi Utilizzati
- Prelevamento di campioni di tumore ovarico.
- Digestione enzimatica dei campioni di tessuto.
- Filtrazione per isolare cellule vitali.
- Centrifugazione e risospensione in terreno di coltura.
Risultati principali
- Isolamento riuscito di cellule tumorali ovariche epiteliali libere da fibroblasti.
- Le cellule possono essere coltivate per settimane, consentendo studi approfonditi.
- Il metodo fornisce una fonte affidabile di cellule tumorali per la ricerca.
- Potenziale applicazione nella definizione di strategie terapeutiche personalizzate.
Conclusioni
- Il metodo descritto è efficace per l'isolamento delle cellule del carcinoma ovarico.
- Supporta ulteriori ricerche sui trattamenti per il carcinoma ovarico.
- Studi futuri potranno basarsi su questo metodo per migliorare i risultati nei pazienti.
Domande frequenti
Rilevanza Industriale del Progetto
L'isolamento di cellule tumorali ovariche primarie da campioni clinici solidi consente di ottenere modelli pertinenti al paziente, riducendo la dipendenza da linee cellulari amplificate in coltura e caratterizzate da alterazioni genetiche accumulate. Questo approccio favorisce la riduzione dei rischi meccanicistici nella validazione del bersaglio, preservando l'eterogeneità tumorale e la biologia specifica del sito di lesioni primarie o metastatiche. Le colture ottenute forniscono una fonte rinnovabile per analisi successive, migliorando l'affidabilità predittiva nelle decisioni precliniche.
Applicazioni Strategiche nella Ricerca e Sviluppo in Biopharma
Scoperta Precoce e Validazione del Target
- Valore scientifico: Consente l'analisi di ipotesi terapeutiche utilizzando cellule che riflettono il profilo genetico e fenotipico del campione clinico originale.
- Valore operativo: Riduce l'ambiguità meccanicistica evitando gli artefatti associati alle linee cellulari sottoposte a passaggi prolungati.
- Valore predittivo: Supporta la selezione del portafoglio attraverso la validazione del target con riduzione del rischio biologico in un sistema rilevante per la malattia.
Sviluppo di screening e saggi
- Valore scientifico: Produce cellule di carcinoma ovarico epiteliale adatte per lo screening farmacologico, mantenendo le proprietà tumorigeniche.
- Valore operativo: Fornisce sospensioni cellulari standardizzate e riproducibili dopo digestione enzimatica e filtrazione.
- Scalabilità: Consente la preparazione di molteplici colture primarie da diversi campioni per test paralleli di saggio.
Ricerca Translazionale e Preclinica
- Continuità traslazionale: Collega la scoperta al lavoro preclinico utilizzando cellule derivate direttamente da campioni paziente.
- Allineamento dei biomarcatori: Permette la valutazione di bersagli e biomarcatori in un contesto rappresentativo del tumore del paziente.
- Avanzamento basato sul rischio: Guida le decisioni di prosecuzione o interruzione dello sviluppo sulla base delle risposte osservate in cellule primarie, che predicono in modo più accurato gli esiti clinici.
Integrazione di Pipeline e Flusso di Lavoro
Il metodo si inserisce nel percorso di scoperta che va dalla biologia iniziale all'identificazione di un composto promettente, fornendo cellule primarie che aumentano la rilevanza delle attività successive di screening e validazione.
- Biologia della scoperta: Supporta la verifica delle ipotesi e la chiarificazione dei percorsi utilizzando cellule con caratteristiche specifiche del tumore integre.
- Screening: Fornisce cellule primarie di carcinoma ovarico di tipo epiteliale pronte per saggi, con crescita e morfologia quantificabili, per la valutazione di composti.
- Analisi: Permette la misurazione della risposta ai farmaci, della proliferazione e dei cambiamenti fenotipici in un sistema geneticamente stabile e a basso passaggio.
- Ricerca traslazionale: Mantiene la rilevanza clinica grazie all'origine diretta dai campioni, supportando la validazione di biomarcatori e bersagli.
- Riutilizzo aziendale: Stabilisce una piattaforma riutilizzabile per generare colture primarie da diversi campioni, riducendo la dipendenza da linee cellulari limitate.
Impatto Operativo ed Aziendale
- Valore scientifico: Aumenta la fiducia predittiva utilizzando cellule che rispecchiano l'eterogeneità e la biologia del tumore originale.
- Valore operativo: Garantisce la riproducibilità attraverso passaggi standardizzati di digestione enzimatica, filtrazione e avvio della coltura.
- Valore strategico: Migliora l'efficienza del capitale riducendo il rischio di fallimento nelle fasi avanzate grazie a una migliore validazione preclinica degli obiettivi.
- Impatto sul portafoglio: Permette una priorizzazione adeguata ai rischi dei candidati in base all'attività nelle cellule primarie derivate dai pazienti.
Considerazioni sull'implementazione
- Richiede competenze nella manipolazione sterile dei tessuti, nella digestione enzimatica e nelle tecniche di coltura cellulare primaria.
- Dipende dall'accesso a campioni di tumore ovarico freschi o adeguatamente conservati, raccolti in condizioni sterili.
- Necessita di attrezzature per centrifugazione, filtrazione e coltura, inclusi cappe a sicurezza biologica e incubatori a CO2.
- Comporta l'ottimizzazione del tempo di digestione e della dissociazione meccanica per massimizzare il rendimento di cellule epiteliali riducendo al minimo la contaminazione da fibroblasti.
- È limitato dalla disponibilità e vitalità del campione, che può variare in base al momento dell'intervento chirurgico e alle condizioni di trasporto.
