Metodo per ottenere primarie cellule tumorali ovariche da campioni solidi

L'obiettivo generale di questa procedura è isolare e caratterizzare le cellule di carcinoma ovarico primario da campioni clinici solidi. Ciò si ottiene raccogliendo prima il campione di tumore ovarico e mettendolo in una capsula di Petri. Il secondo passo consiste nel tagliare il campione in pezzi e trasferire i pezzi in una provetta conica con reagenti per la digestione per l'incubazione.

Successivamente, l'impasto cellulare viene fatto passare attraverso un filtro in cui vengono raccolte solo le cellule Per la centrifugazione, il passaggio finale consiste nello scartare il surnatante e risospendere le cellule in terreno per l'incubazione durante la notte. In definitiva, le cellule epiteliali del cancro ovarico cresceranno in coltura per settimane, il che consente applicazioni a valle. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo del cancro ovarico, ad esempio quale sia la migliore opzione di trattamento per ogni singola paziente.

Le implicazioni di questa tecnica si estendono al trattamento del cancro ovarico perché ci consente di utilizzare colture cellulari più realistiche, che sono altamente suscettibili alla manipolazione genetica e sono più utili per i test di screening farmacologico. Per iniziare, integrare 500 millilitri di delcos, aquile modificate, medium o DMEM con il 10% di siero fetale bovino o FBS e l'1% di penicillina, streptomicina o ps. Conservare il terreno a quattro gradi Celsius.

Raccogliere il campione dalla sala operatoria e trasportarlo con ghiaccio al laboratorio ancora all'interno del contenitore trasportato. Collocare il campione in una cappa di sicurezza biologica. Trasferire il campione da una provetta conica da 50 millilitri su una piastra di Petri da 60 millimetri per 60 millimetri contenente 10 millilitri di PBS fresco ghiacciato.

Quindi, utilizzando ulteriormente una lama di rasoio sterile, tagliare il campione in pezzi di due millimetri o più piccoli. Quindi trattare il DMEM con un tubo di pasta discontinua in un tubo conico da 15 litri. Trasferire i tessuti tritati nella provetta di miscela DMEM dispa two.

Quindi incubare il campione al 5% di anidride carbonica e 37 gradi Celsius per 30 minuti. Agitare manualmente il liquame cellulare ogni cinque minuti per garantire una digestione ottimale. Dopo l'incubazione, trasferire l'impasto cellulare attraverso un filtro cellulare a maglie di 70 micrometri posizionato sopra un tubo conico da 50 millilitri.

Applicare delicatamente una pressione contro la rete utilizzando uno stantuffo della siringa, scartare il tessuto non associato rimasto sulla parte superiore della rete e raccogliere la sospensione cellulare ottenuta nella provetta conica sterile da 50 millilitri. Quindi, centrifugare. Il tubo conico a 320 volte G per sette minuti a quattro gradi Celsius.

Scartare il surnatante e risospendere il pellet cellulare in 10 millilitri di DMEM contenente il 10% di FBS e l'1% di ps. Quindi trasferire la sospensione cellulare in una capsula di Petri e incubare la sospensione al 5% di anidride carbonica e 37 gradi Celsius. Cambiare il terreno 24 ore dopo la placcatura iniziale per rimuovere i detriti cellulari e la maggior parte degli eritrociti presenti nella coltura.

Infine, cambiare il terreno ogni tre giorni per le due settimane successive, dopodiché le colture di cellule EOC primarie sono pronte per le applicazioni a valle. Immediatamente dopo la placcatura. Le cellule epiteliali del cancro ovarico o cellule EOC appaiono come sospensioni di singole cellule e in grumi con eritrociti e detriti cellulari abbondano.

La coltura cellulare EOC tre giorni dopo la piastratura mostra cluster di cellule EOC semiaderenti e una minore contaminazione eritrocitaria. Una settimana dopo la placcatura iniziale, la coltura cellulare EOC diventa un ammasso di cellule a spirale che si diffonde sulla plastica della coltura tissutale. La tipica morfologia epiteliale del ciottolo può essere osservata in un monostrato confluente di cellule EOC dopo 14 giorni di coltura.

Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come isolare e caratterizzare le cellule di cancro ovarico primario da campioni clinici solidi.