Name: Eterotipica tridimensionale In Vitro di stromale-epiteliali interazioni Durante iniziazione e la progressione del cancro ovarico (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 42 s
Description: Scopri come creare modelli 3D eterotipici di cancro ovarico iniziale utilizzando co-culture di cellule epiteliali e stromali. Questo metodo permette di studiare le interazioni stromali-epiteliali e il ruolo del microambiente tumorale.

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Questa ricerca è stata effettuata presso la Keck School of Medicine, University of California, Stati Uniti d&#39;America, e la University College di Londra, Regno Unito. KL è finanziato dal National Institute of Health sovvenzione 5 U19 CA148112-02. BG è stato finanziato da una borsa di studio del progetto dalla carità oncologia ginecologica Eve Appeal (Regno Unito). Parte di questo lavoro svolto in UCLH / UCL è stato in parte il finanziamento da parte del Dipartimento del regime di Salute di ricerca biomedica NIHR finanziamento Centre.

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Nessun conflitto di interessi dichiarati.

La biologia di stadio precoce del cancro ovarico epiteliale (EOC) è poco conosciuta. Forse uno dei principali ostacoli in questo campo per molti anni è stata la mancanza di comprensione delle origini tessuto specifiche che la malattia, e del significato del ruolo del microambiente nello sviluppo EOC. Nel corso degli ultimi anni, è diventato chiaro che EOC è una malattia eterogenea con più sottotipi distinti histophathological, probabilmente con differenti origini cellulari per diversi sottotipi. Ad esempio, i dati attua...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagente </td><td> Fornitore </td><td> Numero di catalogo </td></tr><tr><td> PolyHEMA, adatto per coltura cellulare </td><td> Sigma Aldrich </td><td> P3932 </td></tr><tr><td> Biologia molecolare etanolo grado </td><td> Sigma Aldrich </td><td> E7023 </td></tr><tr><td> Acqua sterile per colture cellulari </td><td> VWR </td><td> 12001-356 </td></tr><tr><td> MCDB105 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M6395 </td></tr><tr><td> Medium 199 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M2154 </td></tr><tr><td> Hyclone siero fetale bovino </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH30088.03 </td></tr><tr> &lt;td&gt; Gentamicina </td><td> Sigma Aldrich </td><td> G1397 </td></tr><tr><td> Amfotericina B </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A2942 </td></tr><tr><td> pBABE-igro-hTERT </td><td> Addgene </td><td> 1773 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> VWR </td><td> 12001-766 </td></tr><tr><td> 0,25% tripsina-EDTA </td><td> Invitrogen </td><td> 25200-072 </td></tr><tr><td> Cella filtro (40 o 70 micron) </td><td> VWR </td><td> 21008-949 21008-952 </td></tr><tr><td> Anti-fibroblasti proteina anticorpi di superficie, clone 1B10 </td><td> Sigma </td><td> F4771 </td></tr><tr><td> Anti-pan-citocheratina anticorpo (C11) </td><td> Santa Cruz </td><td> sc-8018 </td></tr><tr><td> Polibrene (hexadimethrine bromuro) </td><td> Sigma </td><td> 107689 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG telomerasi PCR ELISA PLUS </td><td> Roche </td><td> 12013789001 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG Assay Lunghezza dei telomeri </td><td> Roche </td><td> 12209136001 </td></tr></tbody></table> Reagenti Tabella 1. E apparecchiature di cui al presente studio.

eterotipica tridimensionale<em&gt; in vitro</emmodellazione&gt; di stromale-epiteliali interazioni durante iniziazione e la progressione del cancro ovarico

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Tumori ovarici epiteliali (EOCS) sono la principale causa di morte per neoplasia ginecologica nelle società occidentali. Nonostante i progressi nei trattamenti chirurgici e il miglioramento delle chemioterapie a base di platino, si è registrato pochi miglioramenti nei tassi di sopravvivenza EOC per più di quattro decenni 1,2. Mentre stadio I tumori sono a 5 anni tasso di sopravvivenza&gt; 85%, i tassi di sopravvivenza per la fase III / IV della malattia sono &lt;40%. Pertanto, gli alti tassi di mortalità per tumore ovarico epiteliale potrebbe essere significativamente ridotta se i tumori sono stati rilevati in precedenza, più trattabili, fasi 3-5. Allo stato attuale, la base molecolare genetica e biologica della malattia in stadio precoce sviluppo è poco conosciuta. Più in particolare, si sa poco circa il ruolo del microambiente tumorale durante l&#39;inizio, ma i fattori di rischio noti per EOCS (ad esempio età e parità) suggeriscono che il microambiente svolge un ruolo chiave nella genesi precoce di EOCS. Abbiamo quindi sviluppato modelli eterotipiche tridimensionalisia dell&#39;ovaio normale e di tumori ovarici primi stadi. Per l&#39;ovaio normale, abbiamo co-coltura superficie epiteliale ovarico normale (Iose) e normale fibroblasti stromale (INOF) cellule, immortalata da trasduzione retrovrial della subunità catalitica della telomerasi holoenzyme umana (hTERT) per estendere la durata di vita di queste cellule in coltura. Per modellare le prime fasi di trasformazione cellulare ovarico epiteliale, sovraespressione del CMYC oncogene nelle cellule Iose, di nuovo co-coltura con cellule INOF. Questi modelli eterotipiche sono stati utilizzati per studiare gli effetti di invecchiamento e senescenza sulla trasformazione e l&#39;invasione delle cellule epiteliali. Qui descriviamo le fasi metodologiche in sviluppo di questi modello tridimensionale; queste metodologie non sono specifici per lo sviluppo di ovaio normale e tessuti di cancro ovarico, e potrebbe essere usato per studiare tipi di tessuto in cui le interazioni cellule stromali ed epiteliali sono un fondamentale aspetto del tessuto e di manutenzioneSease sviluppo.

Descriviamo metodologie per la creazione di<em&gt; In vitro</em&gt; Eterotipiche modelli tridimensionali comprendenti fibroblasti ovariche e di superficie ovarica normale o cellule di cancro ovarico epiteliale. Discutiamo l&#39;uso di questi modelli per studiare stroma-epiteliali interazioni che si verificano durante lo sviluppo del cancro ovarico.

Eterotipica tridimensionale<em&gt; In Vitro</emModellazione&gt; di stromale-epiteliali interazioni Durante iniziazione e la progressione del cancro ovarico

I tumori epiteliali dell'ovaio (EOC) sono la principale causa di morte per neoplasie ginecologiche nelle società occidentali. Nonostante i progressi nella chirurgia...

L'obiettivo generale del seguente esperimento è generare modelli tridimensionali tipici dello sviluppo del cancro ovarico in fase iniziale. In primo luogo, generare linee cellulari immortalizzate H turt derivate da tessuti primari normali di epitelio ovarico e fibroblasti. Successivamente, per ricreare l'architettura in vivo e le complesse interazioni cellula-cellula presenti nell'ovaio, coltivare in co-coltura linee cellulari epiteliali e stromali in modelli sferoidi tridimensionali, quindi procedere alla fissazione e alla colorazione delle colture organoidi e analizzare l'espressione di marcatori specifici al fine di studiare le caratteristiche molecolari delle interazioni stroma-epiteliali.I risultati ottenuti mostrano come le alterazioni nel compartimento delle cellule stromali di modelli tridimensionali typic possano influenzare il fenotipo delle cellule epiteliali coltivate in co-coltura. I modelli tridimensionali typic possono contribuire a rispondere a domande fondamentali nel campo della ricerca sul cancro ovarico, come esplorare le origini di questa malattia e chiarire il ruolo del microambiente stromale nell'insorgenza e nello sviluppo tumorale. Le applicazioni di queste

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Il saggio di liquidazione mesoteliali qui descritto si avvale di cellule fluorescente e microscopia time-lapse video visualizzare e misurare quantitativamente le interazioni di sferoidi multicellulari di cancro ovarico e monostrati di cellule mesoteliali. Questo saggio modella i primi passi di metastasi del cancro ovarico.

In vitro test Clearance mesoteliali che modella i primi passi di metastasi del cancro ovarico

In questo video, dimostriamo lo sviluppo di un modello tridimensionale in vitro del rivestimento della cavità peritoneale. Questa coltura organotipica può aiutare a studiare l'adesione, l'invasione e la proliferazione delle cellule tumorali ovariche.

Modellazione delle metastasi del cancro ovarico nel rivestimento della cavità peritoneale: un metodo per stabilire un modello 3D in vitro del rivestimento peritoneale

Qui presentiamo un protocollo per la co-coltura in tre dimensioni, che è utile per studiare le interazioni multicellulari e la modulazione dipendente dalla matrice extracellulare del comportamento delle cellule tumorali. In questo modello sperimentale, le cellule tumorali vengono coltivate su gel di collagene incorporati con fibroblasti umani associati al cancro.

Tridimensionale Co-cultura Modello di tumore stromale-Interaction

Qui, presentiamo un protocollo per costruire un modello tridimensionale in vitro del rivestimento della cavità peritoneale, composto da cellule mesoteliali umane primarie e fibroblasti stratificati con matrice extracellulare, come strumento per studiare l'adesione, l'invasione e la proliferazione delle cellule tumorali ovariche.

Modellazione Piazza precoci di cancro ovarico Diffusione in una cultura Organotipica della Cavità peritoneale umano

Dimostriamo un metodo per generare surrogati 3D del cancro al seno, che possono essere coltivati utilizzando un sistema di bioreattori di perfusione per fornire ossigeno e sostanze nutritive. Dopo la crescita, i surrogati vengono fissati e trasformati in paraffina per la valutazione dei parametri di interesse. Viene spiegata la valutazione di uno di questi parametri, la densità cellulare.

Preparazione e analisi di<em&gt; In Vitro</em&gt; Tridimensionale carcinoma mammario mondo dei replicanti

Per studiare la progressione del tumore ovarico in un modello fisiologicamente rilevanti, sferoidi multicellulari sono state coltivate in un Microdevice sotto flusso del fluido simulato. Questo modello 3D dinamica emula l'ambiente intraperitoneale con i componenti cellulari e meccanici in cui si verifica metastasi del cancro ovarico.

Modellazione Comportamento Ovarian Cancer multicellulare Spheroid in un Microdevice dinamica 3D peritoneale

Le cellule staminali del cancro ovarico (OCSC) sono responsabili dell'inizio del cancro, della recidiva, della resistenza terapeutica e delle metastasi. Si ritiene che la nicchia vascolare OCSC promuova l'autorinnovamento degli OCSC, portando alla chemioresistenza. Questo protocollo fornisce la base per stabilire un modello di nicchia vascolare OCSC riproducibile in vitro.

Valutazione delle proprietà angiogenetiche delle cellule staminali del cancro ovarico utilizzando il sistema di co-coltura tridimensionale, NICO-1

Questo protocollo descrive la creazione di un modello tridimensionale (3D) ex vivo dell'interazione cellula tumorale-omento. Il modello fornisce una piattaforma per chiarire i meccanismi pro-tumorali all'interno della nicchia adiposa e per testare nuove terapie.

Un modello ex vivo di metastasi peritoneali del carcinoma ovarico con omento umano

C'è un bisogno critico di modelli di cancro 3D che catturino il crosstalk eterocellulare per studiare le metastasi del cancro. Il nostro studio presenta la generazione di epiteliali stromali eteromulticellulari in un ambiente privo di scaffold e scaffold che può essere utilizzato per studiare l'invasione e le distribuzioni spaziali cellulari.

Cellule stromali eteromulticellulari in colture 3D prive di scaffold di cellule tumorali epiteliali per guidare l'invasione

Questo protocollo descrive in dettaglio lo sviluppo di modelli murini di carcinoma ovarico sieroso di alto grado (HGSOC) in vitro e in vivo. Dalla derivazione di organoidi murini delle tube di Falloppio, alla loro modificazione genetica per ricapitolare la genetica umana HGSOC e alla loro introduzione nella borsa ovarica di topi singenici per lo sviluppo in vivo di tumori.

Sviluppo di linee organoidi derivate da topi da cellule epiteliali delle tube di Falloppio per la modellazione del carcinoma ovarico sieroso di alto grado

Scopri come creare modelli 3D eterotipici di cancro ovarico iniziale utilizzando co-culture di cellule epiteliali e stromali. Questo metodo permette di studiare le interazioni stromali-epiteliali e il ruolo del microambiente tumorale.

Eterotipica tridimensionale In Vitro di stromale-epiteliali interazioni Durante iniziazione e la progressione del cancro ovarico (Video) | JoVE Journal

Eterotipica tridimensionale

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