Estrazione di vescicole extracellulari: una tecnica per isolare le vescicole extracellulari da campioni di tessuto intero utilizzando la centrifugazione differenziale

Nei tessuti interi, le vescicole extracellulari o vescicole extracellulari vengono rilasciate dalle cellule nel liquido interstiziale. Questi includono corpi apoptotici, microvescicole ed esosomi. Le vescicole extracellulari svolgono un ruolo importante nel mantenimento della comunicazione da cellula a cellula.

Per estrarre le vescicole extracellulari, iniziare prelevando un intero campione di tessuto.

Trattare il tessuto con un tampone di dissociazione appropriato. I componenti del tampone di dissociazione disintegrano la matrice extracellulare presente nel tessuto, allentando infine le cellule.

Trasferire la sospensione in un omogeneizzatore e disgregare meccanicamente ulteriormente il tessuto per dissociarlo e rilasciare le cellule.

Successivamente, centrifugare l'omogenato a bassa velocità per pellettizzare le cellule e i frammenti di tessuto mentre le vescicole extracellulari rimangono nel surnatante.

Assumere il surnatante in un tubo nuovo. Centrifugare ad alta velocità per pellettizzare la maggior parte dei corpi apoptotici di dimensioni maggiori, lasciando le vescicole extracellulari di dimensioni più piccole nel surnatante.

Raccogliere il surnatante contenente EV in una si