La quantificazione di espressione della proteina e co-localizzazione Usando multiplex immunoistochimica di colorazione e multispettrale Imaging

L'obiettivo generale di questo metodo è quello di quantificare oggettivamente l'espressione proteica e la co-localizzazione utilizzando l'imaging multispettrale. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della ricerca di base e della patologia diagnostica, come ad esempio il modo in cui le proteine cambiano l'espressione e la localizzazione dopo il trattamento o nella progressione della malattia. Il vantaggio principale di questa tecnica è che elimina la soggettività dell'operatore inerente ai metodi di quantificazione tradizionali.

Per iniziare il processo di quantificazione, aprire il software di imaging multispettrale per creare una libreria spettrale da vetrini di controllo precedentemente preparati e colorati con singoli cromogeni e dal vetrino colorato con ematossilina. Quindi, apri un cubo di immagini acquisito da un vetrino di controllo e seleziona da quattro a cinque aree colorate positivamente per definire otticamente il cromogeno. Ripetere i passaggi con i cubi immagine di altri vetrini di controllo fino a creare una libreria spettrale completa che rappresenta tutti i cromogeni, quindi salvare la libreria spettrale.