Registrazione simultanea di elettroretinografia e Potenziali evocati visivi nei ratti anestetizzati

L'obiettivo generale di questa procedura è misurare simultaneamente l'elettroretinogamo e il potenziale evocato visivo in un ratto. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo delle neuroscienze delle fessure. Ad esempio, se l'effetto dell'invecchiamento o delle malattie influisce su determinati componenti del percorso visivo.

Il vantaggio principale di questa tecnica è che consente una valutazione completa della funzione retinica e del suo effetto a monte sulla funzione corticale evocata visivamente. Per iniziare questa procedura, pre-modellare gli elettrodi inattivi ERG su misura tagliando una lunghezza di 70 millimetri di filo d'argento e formando un anello di otto millimetri di diametro per circondare l'occhio del topo. Preparare un cerchio uniforme e regolare la dimensione dell'anello modellandolo su una punta della testa del tubo di un millimetro.

Questo è importante perché un anello troppo piccolo può inavvertitamente aumentare la pressione inarticolare, mentre un anello sovradimensionato può aumentare la variabilità dei segnali. Successivamente, pre-modellare l'elettrodo inattivo VEP su misura tagliando una lunghezza di 70 millimetri di argento. E formando un'ellisse di otto millimetri di diametro da agganciare agli incisivi del ratto.

Quindi, pre-modellare gli elettrodi attivi ERG su misura tagliando una lunghezza di 30 millimetri di filo d'argento e formare un piccolo anello di circa uno o due millimetri di diametro che viene utilizzato per entrare delicatamente in contatto con la cornea di ratto con abrasioni corneali minime. Successivamente, collegare saldamente gli elettrodi ai cavi degli elettrodi intrecciando l'argento con il filo interno esposto. Isolare il metallo esposto in eccesso con nastro adesivo per ridurre gli artefatti fotovoltaici.

Per gli elettrodi attivi ERG, è possibile applicare più strati di nastro adesivo per ottenere un avvolgimento più spesso e rigido in modo che l'elettrodo sia più facile da tenere con un micromanipolatore. Su ciascun elettrodo inattivo ERG, attaccare un piccolo pezzo di chiusura a strappo al nastro adesivo per consentire un fissaggio stabile alla cinghia del collo del roditore. Quindi, per ogni elettrodo attivo VEP, collegare una clip a coccodrillo al filo interno del cavo dell'elettrodo.

Immediatamente prima delle registrazioni, elettroplaccare le superfici esposte dei fili d'argento con cloruro per migliorare la conduzione del segnale. Per fare ciò, collegare il catodo al terminale negativo della batteria e immergere l'altra estremità nella soluzione salina. Successivamente, immergere la punta d'argento sul filo dell'anodo in soluzione fisiologica normale e collegare l'altra estremità di questo filo dell'elettrodo al terminale positivo di una batteria da nove volt.

Scollegarli dopo 20 secondi e la punta argentata del filo dell'elettrodo deve essere rivestita uniformemente di bianco. Ripetere la procedura di cloruro per tutti gli elettrodi ERG e VEP in argento. In questa procedura, disinfettare tre volte l'area rasata di un animale anestetizzato con iodio povidone al 10%.

Praticare un'incisione sagittale lungo la linea mediana della testa con un bisturi e asportare un cerchio di tessuto dermico di 20 millimetri di diametro per esporre l'osso cranico. Successivamente, rimuovere il periostio sottostante raschiando e asciugando con una garza, per esporre le suture craniche coronali e sagittali. Praticare due fori attraverso il cranio su entrambi gli emisferi.

Avvitare le viti in acciaio inox nei due fori prefabbricati fino a una profondità di un millimetro per consentire un ancoraggio stabile. Quindi, preparare l'area chirurgica per l'amalgama dentale asciugando l'osso cranico con una garza e ritraendo la pelle con due punti di sutura. Successivamente, stendere l'amalgama dentale sul cranio esposto per fissare gli elettrodi delle viti in posizione e assicurarsi che circa 1,5 millimetri delle viti siano esposti per la registrazione.

Successivamente, rimuovere le suture di retrazione. Per le registrazioni scotopiche, tutte le procedure vengono eseguite in una camera oscura. A scopo illustrativo, il posizionamento degli elettrodi viene eseguito in condizioni di normale illuminazione della stanza.

L'animale è stato adattato al buio per 12 ore e anestetizzato con ketamina e xilazina. Dopo la dilatazione della pupilla e l'anestesia topica, agganciare l'elettrodo VEP inattivo attorno agli incisivi inferiori. Quindi, posizionare l'animale sulla piattaforma ERG di fronte alla ciotola Ganzfeld situata nella gabbia di Faraday.

Fissare l'animale alla piattaforma con una striscia di chiusura a strappo posizionata saldamente ma non strettamente intorno alla nuca. Quindi, posizionare gli elettrodi inattivi ERG circondando l'anello sclarale in modo non invasivo attorno all'equatore degli occhi. Circa tre metri dietro il limbus.

Stabilizzare questo aspetto attaccando l'elettrodo alla striscia di fissaggio a strappo attorno alla nuca. Ripetere la procedura per l'occhio controlaterale. Ora, fissare gli elettrodi attivi VEP fissando le clip a coccodrillo alle viti in acciaio inossidabile, pre-impiantate sul cranio.

Prima del posizionamento dell'elettrodo attivo ERG, posizionare una piccola goccia di carbossimetilcellulosa sodica all'1% sull'elettrodo per migliorare la qualità del segnale. Posizionare gli elettrodi attivi ERG in modo che tocchino leggermente la superficie corneale centrale utilizzando un micromanipolatore collegato al braccio stereotassico costruito su misura. Assicurarsi che la carbossimetilcellulosa sodica entri in contatto solo con la cornea e non con la sclara, rimuovendo il liquido in eccesso.

Quindi inserire da due a cinque millimetri dell'elettrodo dell'ago rettificato in acciaio inossidabile, per via sottocutanea nella coda. Far scorrere la piattaforma più vicino alla ciotola Ganzfeld e assicurarsi che gli occhi degli animali siano allineati con l'apertura della ciotola per consentire un'illuminazione uniforme di entrambe le retine. Successivamente, chiudere la gabbia di Faraday per ridurre il rumore estraneo.

Utilizzando il protocollo di cui sopra, è possibile registrare una pila di forme d'onda ERG in risposta a una serie di stimoli con il flash più debole mostrato in basso e il più luminoso in alto. A livelli di luce molto deboli, è possibile registrare le risposte della soglia scotopica. Con l'aumentare della luminosità dello stimolo, le forme d'onda diventano dominate dall'onda B e quindi l'onda negativa A emerge agli stimoli più luminosi.

La funzione del fotorecettore a bastoncello può essere saggiata utilizzando un P3 per modellare l'onda A. Questa figura mostra che l'ampiezza di P2 cresce con l'aumentare dell'energia dello stimolo. La funzione della cellula bipolare dei bastoncelli può essere saggiata modellando le teorie di risposta all'intensità del bastoncello P2 con una funzione naka rushtin.

La funzione delle cellule gangliari retiniche viene analizzata a deboli energie luminose e quantificata dall'ampiezza e dalla tempistica del picco pSTR. La funzione della cellula bipolare del cono viene indotta con una paradime del flash accoppiata e quantificata dall'ampiezza e dalla temporizzazione del picco del cono P2. L'analisi dell'ampiezza del VEP è presa come picco del tropo e del tropo al picco che fornisce la tempistica di queste risposte.

L'ampiezza delle forme d'onda VEP aumenta con l'aumentare dell'energia dello stimolo. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita entro circa 30-45 minuti, escludendo il tempo per preparare l'elettrodo e posizionare l'elettrodo e l'adattamento. Durante il tentativo di questa procedura, è particolarmente importante prestare attenzione alla precisione con cui si posizionano gli elettrodi e lasciare abbastanza tempo per l'adattamento.

A seguito di questa procedura, possono essere eseguite altre procedure come la modifica della malattia o le terapie per rispondere a domande specifiche. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come preparare e posizionare gli elettrodi, nonché di come registrare e analizzare le forme d'onda ERG e VEP.