Valutazione della procedura per eseguire la cystometria sveglia in un modello di mouse

L'obiettivo generale di questa procedura microchirurgica è quello di impiantare un tubo intravescicale nella vescica urinaria e di registrare la funzione del tratto urinario inferiore in un topo sveglio. Questo metodo può aiutare nell'acquisizione di dati sperimentali riproducibili dalla cistometria da sveglio e nel test della funzione vescicale in modelli murini sani e malati. L'obiettivo principale di questa tecnica è quello di fornire un metodo standardizzato basato su dati sperimentali per l'esecuzione della cistometria di riempimento in un modello murino.

Per preparare il tubo per l'impianto, tagliare prima un pezzo di sette centimetri di tubo pe10 e far avanzare lentamente un'estremità verso una fiamma libera per creare una svasatura, ritirando rapidamente il tubo non appena si sviluppa la svasatura. Quindi utilizzare l'impostazione a fuoco basso su una pistola per colla per applicare tre gocce di colla a caldo per tutti gli usi a 4,5, 5 e 5,5 centimetri dall'estremità svasata del tubo. Usa le forbici per tagliare le irregolarità dalle bolle di colla.

Applicare la colla a caldo su un'estremità di un ago calibro 30, che verrà utilizzato per tappare il tubo pe10 dopo che è stato impiantato. Successivamente, confermare la mancanza di risposta al pizzicamento delle dita dei piedi e applicare l'unguento sugli occhi dell'animale. Dopo aver sterilizzato la parte superiore della schiena e il basso addome con alcol e betadina, praticare un'incisione di 1,5 centimetri tra la bisturi e posizionare l'animale in posizione supina sopra un termoforo a 37 gradi Celsius coperto da teli sterili al microscopio da dissezione.

Ora fai un'incisione della pelle addominale della linea mediana inferiore di 1,5 centimetri. Seguito da un'incisione corrispondente attraverso la fascia lungo la linea alba e il muscolo per esporre la cupola e la metà superiore della vescica urinaria. Mantenendo umidi i visceri addominali con soluzione fisiologica calda, ruotare l'animale su un fianco per accedere all'incisione sulla nuca.

Spingere un emostatico stretto per via sottocutanea attraverso l'incisione per iniziare un canale sottocutaneo sul dorso e continuare lungo il lato dell'animale. Una volta che la punta dello strumento raggiunge la parte inferiore della gabbia toracica, ruotare la punta verso la linea mediana all'interno dell'addome e continuare a far avanzare l'emostatico fino a quando la punta non è esposta all'incisione addominale sotto lo strato muscolare. Una volta che la punta dell'emostatico è all'interno dell'incisione, pizzica la pelle sopra la spalla e applica la trazione per stabilizzare l'animale fino a quando la punta dello strumento non è visibile nell'incisione addominale.

Ora usa l'emostatico per afferrare l'estremità non svasata del tubo e ritrarre lentamente l'emostato, estraendo l'estremità del tubo dall'incisione nella parte posteriore del collo e regolando l'estremità svasata del tubo in modo che si trovi direttamente sopra la cupola della vescica. Stabilizzare la vescica con un piccolo rotolo di tessuto privo di lanugine. Posizionare una sutura monofilamento 6-O non riassorbibile e non aderente sopra la cupola della vescica.

Usando la mano non dominante e la micro pinza curva numero sette di Dumont, afferrare la cupola della vescica e utilizzare un ago calibro 21 nella mano dominante per eseguire una cistotomia nell'apice della cupola. Sondare delicatamente la cistotomia con un paio chiuso di micro pinze curve numero cinque per assicurarsi che il catetere possa passare facilmente attraverso il foro e posizionare l'estremità svasata del catetere pe10 nella vescica, spingendo la svasatura verso il basso fino al collo della vescica in modo che non scivoli fuori durante il fissaggio. Con la fascetta monofilamento posizionata anteriormente al tubo, stringere la sutura 6-O attorno alla cupola della vescica e al tubo il più in alto possibile sulla vescica per evitare di ridurre artificialmente la capacità della vescica.

In alternativa, posizionare una sutura allentata sulla cupola della vescica, eseguire una cistotomia come appena dimostrato e inserire l'estremità svasata del catetere nella puntura. Quindi legare la sutura attorno alla cupola e al tubo come dimostrato per la sutura piatta. In entrambi i casi, fare attenzione a fissare il tubo senza causare lesioni estese alla parete della vescica.

Se viene prelevato troppo tessuto, la capacità della vescica sarà ridotta. Se viene preso troppo poco, la connessione perderà. Per testare la tenuta e la posizione del tubo nella vescica, collegare una siringa da insulina da 0,5 millilitri dotata di un ago da 30 gauge all'estremità distale del tubo e riempire lentamente la vescica con 0,1-0,2 millilitri di cloruro di sodio allo 0,9% fino a quando non appare una goccia sull'orifizio uretrale.

Se il sigillo è incompleto, avvolgere le code di sutura attorno alla vescica e rifilare. Quindi svuotare la vescica per aspirazione. Se non si verificano perdite dalla cupola, rinforzare la vescica con un paio di micro pinze curve e tirare delicatamente il tubo fino a quando la svasatura non si appoggia contro l'interno della cupola della vescica.

Ritestare la guarnizione utilizzando il metodo descritto in precedenza. Tagliare le code della sutura, rimuovere il rotolo di tessuto e riportare la vescica nella sua posizione normale. Quindi utilizzare una sutura 6-O in esecuzione per chiudere la parete addominale in due strati.

E ruota delicatamente l'animale sul suo addome. Inserire la parte sottocutanea dell'ancoraggio metallico nell'incisione intrascopulare e utilizzare un monofilamento 6-O per fissare il tubo e ancorare con una sutura verticale a materasso. Verificare che rimanga una bolla di colla sopra e sotto la pelle per evitare che il tubo si stacchi e tagliare il tubo a circa due centimetri sopra la pelle.

Quindi inserire delicatamente un tappo calibro 30 all'estremità del tubo per evitare che l'urina fuoriesca. Prima di eseguire la lettura, utilizzare un tubo pe50 per collegare la pompa di infusione, il trasduttore di pressione e la parte girevole del manometro 22. Quindi posizionare l'animale da esperimento anestetizzato in posizione prona e rimuovere il tappo calibro 30.

Collegare il cavo all'ancoraggio, far scorrere il catetere vescicale all'estremità del pe50 e utilizzare la colla a caldo per formare una tenuta stagna. Posiziona il mouse sul pavimento del filo. E inizia la registrazione.

Quindi, quando l'animale si riprende dall'anestesia e la pressione della vescica si stabilizza, inizia a infondere cloruro di sodio allo 0,9% a una velocità di 0,6 millilitri all'ora. In genere, il secondo giorno dopo l'inserimento del catetere, si sviluppa un grave gonfiore sottomucoso che occupa metà della sezione trasversale della vescica portando all'ostruzione del lume. Il quinto giorno l'edema si risolve completamente lasciando le aree sottomucose infiltrate da cellule infiammatorie che hanno parzialmente invaso il muscolo.

La massima estensione del gonfiore tissutale osservata nel secondo e nel terzo giorno è correlata con il corrispondente svuotamento comportamentale con gli animali che dimostrano una funzione vescicale significativamente compromessa in questi punti temporali. Come previsto dai dati istologici, la frequenza di svuotamento si normalizza entro il quinto giorno postoperatorio. La pressione intravescicale in un animale sveglio che si muove liberamente con artefatti di movimento minimi è caratterizzata da una pressione di base da 10 a 15 centimetri di acqua, che può rimanere invariata o può aumentare gradualmente di non più di 10 centimetri di acqua durante il ciclo di riempimento.

Seguito da un improvviso aumento e diminuzione della pressione a impulsi durante lo svuotamento. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere completata in 30 minuti se eseguita correttamente. Durante il tentativo di questa procedura è importante ricordare di ridurre al minimo il danno alla vescica per preservare la fisiologia del tessuto.

Dopo questa procedura, è possibile eseguire altri metodi, come la cistometria di riempimento a ciclo singolo, per rispondere a ulteriori domande sulla capacità funzionale della vescica. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come impiantare microchirurgicamente un tubo nella vescica urinaria e utilizzare il cistometro di riempimento sveglio per valutare la funzione del tratto urinario inferiore nei topi.