Name: Creazione di un modello del roditore del Aneurysm aortico addominale bloccando Adventitial Vasa Vasorum perfusione (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-08T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: Impara a creare un modello di aneurisma aortico addominale nel ratto mediante ipossia tissutale indotta da catetere e legatura. Questa tecnica replica le caratteristiche patologiche umane per studiare i meccanismi di sviluppo e rottura.

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Questo lavoro è stato supportato da localizzativi per scientifico il Research (B) (20291958) per N.U.; Localizzativi per giovani scienziati (A) (25713024) in N.Z.

cura degli animali e gli esperimenti sono stati effettuati conformemente agli orientamenti di Hamamatsu University School di medicina animale cura Comitato presso il centro per la cura degli animali.
 1. procedura chirurgica per la creazione del modello Nota: inserire gli strumenti chirurgici in uno sterilizzatore perlina per 10 s preoperatively. Utilizzare guanti sterili intraoperatively.
<ol><li>Ratti maschii di uso pesano 300-400 g. consentire i ratti accesso al cibo e acqua ad libitum.</li>
	<li>Anestetizzare il topo con inalazione isoflurane (2.0-3.0 mL/L). Confermare il corretto amputate di pizzico di punta.</li>
	<li>La barba capelli sull'addome con un rasoio elettrico e macchia l'addome con alcool e una soluzione povidone-iodio.</li>
	<li>Inserire il topo in posizione supina sul tavolo operatorio. Usare pomata veterinario il ratto &#39; gli occhi per prevenire la secchezza mentre sotto anestesia.</li>
	<li>Eseguire una laparotomia con un'incisione addominale ventrale del midline usando un paio di forbici. Per proteggere un campo chiaro chirurgico, imballare il contenuto addominale all'interno della cavità addominale con garza sterile utilizzando un riavvolgitore ferita.</li>
	<li>Per staccare l'aorta dal tessuto perivascolare, delicatamente pick up e strappare il retroperitoneum con le pinzette per esporre la parete aortica ed esfoliare l'aorta di infrarenal nello spazio retroperitoneal dal livello della vena renale sinistra alla biforcazione dalla tessuto perivascolare ( Figura 1A).</li>
	<li>Legano i vasi diramazione dall'aorta addominale con una stringa di seta 5-0 a sangue blocco di alimentazione in un punto lontano dell'aorta che non restringono il lume aortico.</li>
	<li>Per bloccare il flusso sanguigno aortico, inserire clip vascolari appena sotto l'arteria renale e appena sopra la biforcazione dell'aorta. 
	Nota: La dimensione delle clip deve essere maggiore del diametro aortico di bloccare completamente il flusso di sangue. Un temporaneo legatura seta stringa 5-0 è anche sufficiente per il blocco del flusso sanguigno invece le clip.</li>
	<li>Simile alla creazione di un'emorragia di punti sulla superficie della parete aortica, tagliata la parete aortica anteriore utilizzando un micro-forbici 5 mm distalmente dalla clip aortica, adiacente ai rami dell'arteria renale, per inserire un catetere in poliuretano.</li>
	<li>Inserire un catetere in poliuretano (0.55 mm, diametro interno diametro esterno 0,37 mm) con un calibro 24 insito l'ago che digrada dolcemente attraverso l'incisione per lavare via il sangue nell'aorta con acqua. Amministrare una siringa 1 mL riempita con acqua nel catetere in poliuretano e lavare via il sangue rimanente nell'aorta con acqua. Dopo irrigazione, rimuovere il catetere dall'aorta.</li>
	<li>Prima di inserire un catetere in poliuretano (diametro esterno 1,20 mm, diametro interno mm 0,94) utilizzando un ago di calibro 18 interiore, tagliare il catetere in poliuretano a 10 mm di lunghezza ( Figura 1B).
	<ol><li>Inserire il taglio pezzo del catetere in poliuretano nel lume aortico dall'incisione effettuata nel passaggio 1,9. Completamente posizionare il catetere di 10 mm nel lume aortico e riposizionare il punto centrale del catetere alla posizione dell'incisione (cioè, coprire l'incisione con il catetere).</li>
	</ol></li> <li>Riparare l'incisione con i suturare interrotti utilizzando una stringa di 8-0 monofilamento ( Figura 1).</li>
	<li>Legare l'aorta addominale utilizzando una combinazione di 5-0 laccio in seta e il catetere in poliuretano ( Figura 1). 
	Nota: Il lume aortico può essere mantenuto il catetere. Legare l'aorta saldamente per evitare disallineati la posizione del catetere. Il chirurgo &#39; nodo s è raccomandato, perché aggiunge un tocco in più quando legando il primo tiro del nodo, formando un doppio nodo semplice, e un turno aggiuntivo fornisce più attrito e può ridurre allentamento.</li>
	<li>Dopo la legatura, rimuovere la clip vascolare alla biforcazione aortica e quindi rimuovere la clip vascolare sotto l'arteria renale per ripristinare il flusso di sangue anterogrado. Confermare lordo pulsazione aortica.</li>
	<li>Chiudere l'incisione addominale in due strati, il peritoneo e altri strati, con una sutura in polipropilene 4-0. Strettamente suturare l'incisione per evitare un organo sporta.</li>
	<li>Applicare lidocaina topica l'incisione addominale. Posizionare il ratto su un rilievo di riscaldamento fino al ritorno di coscienza. Non lasciare incustodito un ratto fino a quando ha riacquistato coscienza sufficiente per mantenere decubito sternale. Non restituiscono un ratto che ha subito l'operazione per la compagnia di altri ratti fino a quando non ha pienamente recuperato.</li>
	<li>Monitorare attentamente il ratto dopo l'operazione. Iniettare un bolo di soluzione salina sterile (1.0-2.0 mL) per via sottocutanea, se un ratto Mostra segni di perdita di peso di angoscia o corpo.</li>
	<li>Postoperatorio, osservare lo sviluppo di corso di tempo dell'aorta allargata su un ecogramma di ultrasuono. Misura il diametro massimo dall'interno del bordo al bordo esterno dell'aorta addominale come descritto 5.</li>
</ol> 2. Raccolta, fissaggio ed Elastica-van Gieson (EVG) colorazione <ol><li>ventotto giorni postoperatorio, amministrare sodio pentobarbital &#8805; 100 mg/kg per via intraperitoneale per eutanasia ratti.</li>
	<li>Taglio aperto ratto &#39; cavità addominale s ventralmente. Effettuare l'incisione iniziale usando un bisturi. Raccogliere il aneurysm utilizzando forbici e posizionare le aorte raccolte in formalina 10% neutra tamponata per 24-48 h. 
	Nota: Il chirurgo deve essere attento evitare lesioni dell'aorta ed altri organi quando esponendo l'aneurisma. Un organo addominale elevato dovrebbe essere osservato, che indica la formazione di AAA. la figura 2 Mostra un immagine in vivo ed ex vivo immagine; Questo campione rappresentativo di AAAs non è rotto.</li>
	<li>EVG macchiatura 9 <ol><li>Soluzione preparazione <ol><li>preparare Verhoeff &#39; ematossilina s mescolando i seguenti nell'ordine indicato: ematossilina alcolica 20 mL, 10% di cloruro ferrico 8,0 mL, e Lugol &#39; iodio s 8 mL. Miscelare la soluzione tra ogni aggiunta. Questa soluzione può essere preparata fresco q.b..</li>
			<li>Preparare Van Gieson &#39; s soluzione mescolando Fucsina acida 1% 1 mL e satura di acido picrico 45 mL. Lasciare riposare per una notte e mescolare bene. Questa soluzione è stabile per 2 settimane.</li>
			<li>Preparare soluzione differenziante (2% di cloruro ferrico) mescolando 10% FeCl 3 10ml in 40 mL di acqua distillata. Questa soluzione può essere preparata fresco q.b..</li>
			<li>Preparare 5% IPO sciogliendo 5,0 g tiosolfato di sodio in 100 mL di acqua distillata. Questa soluzione è stabile per 1 anno.</li>
		</ol></li> <li>Procedura di macchiatura Nota: Vedi riferimento 9 per ulteriori dettagli.
		<ol><li>Brevemente, idratare le sezioni di paraffina fisso di aorte raccolte in acqua distillata per 10 min posto aorte in Verhoeff &#39; ematossilina di s per 25 min, lavare con acqua e dip 10 - 30 volte nella differenziazione soluzione (2% FeCl 3). Sciacquare in acqua. Posto a 5% IPO per 1 min. lavare in acqua. Posto in Van Gieson &#39; s soluzione per 5 min.</li>
			<li>Disidratare in alcool nel seguente ordine: alcool di 75%, 90%, 95%, 100% e 100% per 30 s ciascuno. Quindi deselezionare in xilene per 5 min, due volte. Posto su un vetrino coprioggetto con mezzo di montaggio resinoso. 
			Nota: fibre elastiche appaiono blu-nero al nero; nuclei: blu di blaCK; collagene: rosso; e altri elementi del tessuto: giallo.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Wolinsky, H., Glagov, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+abdominal+and+thoracic+aortic+medial+structure+in+mammals.+Deviation+of+man+from+the+usual+pattern%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Comparison of abdominal and thoracic aortic medial structure in mammals. Deviation of man from the usual pattern.</a> Circ Res. 25 (6), 677-686 (1969).</li>
<li>Sano, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphangiogenesis+and+angiogenesis+in+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Lymphangiogenesis and angiogenesis in abdominal aortic aneurysm.</a> PLoS One. 9 (3), e89830(2014).</li>
<li>Vorp, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+intraluminal+thrombus+in+abdominal+aortic+aneurysm+with+local+hypoxia+and+wall+weakening%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Association of intraluminal thrombus in abdominal aortic aneurysm with local hypoxia and wall weakening.</a> J Vasc Surg. 34 (2), 291-299 (2001).</li>
<li>Tanaka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adventitial+vasa+vasorum+arteriosclerosis+in+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Adventitial vasa vasorum arteriosclerosis in abdominal aortic aneurysm.</a> PLoS One. 8 (2), e57398(2013).</li>
<li>Tanaka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoperfusion+of+the+Adventitial+Vasa+Vasorum+Develops+an+Abdominal+Aortic+Aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Hypoperfusion of the Adventitial Vasa Vasorum Develops an Abdominal Aortic Aneurysm.</a> PLoS One. 10 (8), e0134386(2015).</li>
<li>Tanaka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+Mass+Spectrometry+Reveals+a+Unique+Distribution+of+Triglycerides+in+the+Abdominal+Aortic+Aneurysmal+Wall%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Res%22%5BJournal%5D)">Imaging Mass Spectrometry Reveals a Unique Distribution of Triglycerides in the Abdominal Aortic Aneurysmal Wall.</a> J Vasc Res. 52 (2), 127-135 (2015).</li>
<li>Kugo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+preventive+effect+of+fish+oil+on+abdominal+aortic+aneurysm+development%5BTitle%5D)+AND+%22Biosci+Biotechnol+Biochem%22%5BJournal%5D)">The preventive effect of fish oil on abdominal aortic aneurysm development.</a> Biosci Biotechnol Biochem. 80 (6), 1186-1191 (2016).</li>
<li>Kugo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocyte+in+vascular+wall+can+induce+the+rupture+of+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Adipocyte in vascular wall can induce the rupture of abdominal aortic aneurysm.</a> Sci Rep. 6, 31268(2016).</li>
<li>Lichtenberg, A., Cebotari, S., Tudorache, I., Hilfiker, A., Haverich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+scaffolds+for+heart+valve+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Biological scaffolds for heart valve tissue engineering.</a> Methods Mol Med. 140, 309-317 (2007).</li>
<li>Heistad, D. D., Marcus, M. L., Larsen, G. E., Armstrong, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+vasa+vasorum+in+nourishment+of+the+aortic+wall%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Role of vasa vasorum in nourishment of the aortic wall.</a> Am J Physiol. 240 (5), H781-H787 (1981).</li>
<li>Yoshimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regression+of+abdominal+aortic+aneurysm+by+inhibition+of+c-Jun+N-terminal+kinase%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Regression of abdominal aortic aneurysm by inhibition of c-Jun N-terminal kinase.</a> Nat Med. 11 (12), 1330-1338 (2005).</li>
<li>Azuma, J., Asagami, T., Dalman, R., Tsao, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creation+of+murine+experimental+abdominal+aortic+aneurysms+with+elastase%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Creation of murine experimental abdominal aortic aneurysms with elastase.</a> J Vis Exp. (29), (2009).</li>
<li>Lu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcutaneous+Angiotensin+II+Infusion+using+Osmotic+Pumps+Induces+Aortic+Aneurysms+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Subcutaneous Angiotensin II Infusion using Osmotic Pumps Induces Aortic Aneurysms in Mice.</a> J Vis Exp. (103), (2015).</li>
<li>United Kingdom, E. T. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.nejm.org/doi/full/10.1056/NEJMoa0909305#t=article">Endovascular versus open repair of abdominal aortic aneurysm.</a> N Engl J Med. 362 (20), 1863-1871 (2010).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

In condizioni fisiologiche, gli strati interni della parete aortica sono nutriti di diffusione dal flusso sanguigno luminal, mentre gli strati esterni e centrali sono alimentati da VV, che penetrano da adventitia mediale VV1. Flusso sanguigno VV nella parete aortica addominale può provenire dalle seguenti tre direzioni/aree: (1) la direzione prossimale attraverso la parete aortica, senso (2) distale attraverso la parete aortica e (3) perivascolare tessuti10. In precedenza, la nostra analisi istologica dei tessuti umani identificato significativa stenosi o l'occlusione di VV nel muro AAA, suggerendo che il flusso sanguigno VV nella parete aortica addominale può essere ridotto4. È un punto estremamente importante in questo protocollo che un infrarenal AAA è stato causato da una combinazione di inserzione del catetere in poliuretano e la sutura legatura dell'aorta addominale di infrarenal. Per attentamente esfoliare lo strato di tessuto, chirurghi devono inserire senza problemi un catetere in poliuretano in aorta e legare saldamente l'aorta per causare ipossia cronica dovuto il hypoperfusion del adventitial VV e formazione di aneurismi. Usando queste tecniche, di conseguenza il flusso sanguigno nella parete aortica è diminuito, e un ambiente ipossico locale è indotto. La riduzione del flusso di sangue e aneurisma indotta da ipossia formazione indica che il flusso sanguigno VV nella parete aortica addominale svolge un ruolo nella patogenesi della formazione di AAA.
In particolare, un modello di aneurysm aortico dovrà soddisfare le seguenti condizioni: un aumento di 1,5 volte il diametro vascolare rispetto al basale, degenerazione della tunica media e l'infiammazione della parete aortica. I più popolari modelli animali sono stati costruiti inducendo risposte infiammatorie, uso di sostanze, come ad esempio CaCl211, elastasi12e angiotensina II13. Questi modelli possono avere un'elevata riproducibilità e ovviamente il cambiamento patologico, e sono stati comunemente utilizzati in studi di ricerca. Nel nostro modello, abbiamo valutato il diametro aortico usando l'ecografia ogni 7 giorni da prima che la procedura è stata eseguita fino al 28 ° giorno dopo la procedura (Figura 3). Risultati hanno mostrato che il diametro aortico moderatamente aumentato sopra i 28 giorni, indicando che questo cambiamento di diametro è simile a quella nei precedenti modelli del roditore. Lordo osservazione della forma vascolare indicato una forma fusiforme liscia (Figura 2). Il giorno 28, abbiamo sacrificato i ratti ed abbiamo effettuato l'analisi istopatologica del tessuto aortico che è stato recuperato. Lo strappo e la scomparsa delle fibre elastiche e collagene della tunica media e avventizia sono stati osservati (Figura 4). Inoltre, le cellule infiammatorie, quali i macrofagi, erano presenti dal adventitia di tunica per la tunica media.
Attualmente, le opzioni di trattamento disponibili per AAAs sono limitate alla riparazione chirurgica e innesto stent di endovascular, con tassi di mortalità del 30-50% in pazienti con AAA rottura14. Tuttavia, nessun farmaco è stato approvato per uso clinico per il trattamento di AAAs. Non c'è dibattito che vi sono differenze nei risultati patologici tra esseri umani e affermati modelli animali utilizzati nella ricerca di AAA. Somiglianze nella patogenesi tra modelli animali AAA e AAA umano sono essenziali per lo sviluppo di trattamenti farmacologici. Per quanto riguarda l'efficacia dei modelli del roditore, il nostro modello di ratto sono morfologicamente simile agli esseri umani in termini di intraluminal embolo5 e adipogenesis8. Inoltre, circa il 20% dei ratti in questo studio ha avuto rottura AAA ed è morto entro 28 giorni dopo la procedura. Anche se la rottura di aneurysm aortico è l'evento più critico per questa malattia, la rottura è rara con modelli sperimentali consolidati di AAA, e il meccanismo non è stata ancora chiarito. Pertanto, questo modello è utile per la comprensione del meccanismo della dilatazione del diametro aortico e della rottura dell'aneurisma.
La creazione di questo modello è necessaria per alcune procedure chirurgiche. Di conseguenza, i ricercatori devono mettere in pratica la creazione di questo modello, che è una limitazione di questo modello. In futuro, vorremmo creare un modello del roditore in cui possiamo ridurre il flusso sanguigno da ispessimento gradualmente le pareti VV, conseguente spontanea di aneurysm aortico.

L'aorta addominale è composto dei seguenti tre strati: la parete vascolare interna (intima), strato mediale (media) e parete vascolare esterna (adventitia), e di questi, il adventitia ha un unico sangue alimentazione sistema noto come il vasorum (VV). Tessuto aortico è fornito con ossigeno attraverso adventitial VV perfusione e diffusione semplice dell'ossigeno dal flusso sanguigno aortico1. Tuttavia, geograficamente, l'aorta addominale ha la distribuzione almeno di VVs rispetto a quello in altre parti dell'aorta. 2
Uno studio precedente ha riferito su ipossia tissutale in umana di aneurysm aortico addominale pareti (AAA) con spessore intraluminal embolo (ILT)3. Inoltre, è stato dimostrato che un VV adventitial nelle pareti aneurismatiche è occluso con cambiamenti arteriosclerotici ad un tasso significativamente più alto, che è associata con ipossia tissutale in pareti AAA4. Basato su questi risultati, è stato creato un modello di roditore romanzo di AAA inducendo adventitial VV ipoperfusione5. In questo modello, VV ipoperfusione causato ipossia tissutale e lo sviluppo di un infrarenal AAA, che aveva caratteristiche morfologiche e patologiche simili a quelle di un AAA umano6. I principali esempi sono stati la presenza di ILTs e l'accumulo di adipociti hyperplastic6e il potenziale di causare rottura7,8. Questi risultati sono stati raramente osservati nei precedenti modelli del roditore. Di conseguenza, questo modello può contribuire notevolmente ad una più profonda comprensione del meccanismo responsabile della rottura e sviluppo di AAA. Introduciamo e descrivere un protocollo standard utilizzato per indurre AAAs attraverso adventitial VV ipoperfusione, e spieghiamo come indurre ipossia nella parete aortica utilizzando le tecniche chirurgiche.

<table><tbody><tr><td>ratto</td><td>Giappone SLC. Inc</td><td>Slc:SD rat</td><td>Sprague&ndash; Soluzione di</td></tr><tr><td>iodio povidone</td> Dawley ratTM <td>Libatape Pharmaceutical Co., Ltd.</td><td></td><td></td>4987335 111457</tr><tr><td>5-0 corda di seta</td><td>Akiyama Medical MFG. CO., LTD</td><td>JIS No.1</td><td></td></tr><tr><td>clip vascolari</td><td>Natsume Seisakusho Co., Ltd.</td>Catetere in poliuretano <td>C-42-S-2</td><td></td></tr><tr><td>(ago a permanenza calibro 24)</td><td>MEDIKIT</td><td>24G</td><td>Supercath Z4VTM, catetere in poliuretano con ago a permanenza calibro 24</td></tr><tr><td>(ago a permanenza calibro 18)</td><td>MEDIKIT</td><td>18G</td><td>Supercath Z3VTM, ago a permanenza calibro 18</td></tr><tr><td>corda monofilamento 8-0</td><td>Sutura Ethicon</td><td>c-42-S-2</td><td>PROLENE Sutura in polipropilene, Riparare l'incisione con la sutura</td></tr></tbody></table>

creazione di un modello del roditore del aneurysm aortico addominale bloccando adventitial vasa vasorum perfusione

Creation of a Rodent Model of Abdominal Aortic Aneurysm by Blocking Adventitial Vasa Vasorum Perfusion

Il vasorum adventitial (VV) fornisce ossigeno e nutrimento alla parete aortica. Ipossia nella parete aortica può causare aneurismi dell'aorta addominale allargati (AAAs). Questo articolo presenta e descrive un protocollo standard utilizzato per indurre AAAs attraverso adventitial VV ipoperfusione creato con una combinazione di inserimento del catetere in poliuretano nel lumen aortico e legatura del suturare dell'aorta addominale di infrarenal.
Il protocollo prevede l'utilizzo di ratti maschii pesano 300-400 g, che sono forniti di acqua e cibo ad libitum. Dopo la laparotomia con un'incisione addominale ventrale del midline, esfoliazione dell'aorta viene eseguita, che blocca il flusso di sangue dal tessuto perivascolare. Aortotomy che coinvolge una piccola incisione adiacente ai rami dell'arteria renale viene eseguita, e un catetere in poliuretano viene inserito utilizzando un ago di calibro 18 interiore. Dopo aver riparato l'incisione, stretta legatura della aorta sopra il catetere blocca il flusso di sangue VV dalla direzione prossimale attraverso la parete aortica senza disturbare il flusso sanguigno aortico. Questa tecnica può indurre un AAA con progressiva dilatazione aortica.
Il più grande vantaggio di questo modello è che VV ipoperfusione causa ipossia tissutale e lo sviluppo di un infrarenal AAA, che ha caratteristiche morfologiche e patologiche simili a quelle di un umano AAA.

Le tecniche operative descritte creare un nuovo modello animale di un aneurysm aortico cronico di indotta da ipossia utilizzando una combinazione di inserzione del catetere in poliuretano e la sutura legatura dell'aorta addominale di infrarenal in ratti. I ratti descritti nella sezione protocollo sono stati eutanasizzati 28 giorni dopo la procedura. Le aorte sono state raccolte e imaging per visualizzare la formazione di aneurismi. La figura 2 Mostra lo sviluppo del AAA fusiforme. L'estremità superiore e inferiore dell'aorta in ex vivo hanno un diametro normale senza dilatazione. Diametri aortici sono stati misurati usando l'ecografia transaddominale (Figura 3). Il diametro generalmente raggiunge la dimensione massima a circa 14 giorni dopo la procedura; da allora in poi, esso rimane invariato o aumenta leggermente. La figura 4 Mostra l'immagine istopatologica del aneurysm diametro massimo dopo colorazione EVG. L'immagine del tessuto il giorno 28 (aneurisma) ha mostrato prominente degradazione delle fibre elastiche rispetto a quello il giorno 0.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55763/55763fig1.jpg"> 
Figura 1: Procedure chirurgiche per indurre un aneurysm aortico addominale (AAA). (A) l'aorta di infrarenal è espansa dal tessuto circostante. (B) un catetere in poliuretano 10 mm di lunghezza di taglio viene inserito attraverso una piccola incisione nell'aorta. (C) l'incisione è riparata con una sutura monofilamento di 8-0 e flusso sanguigno è ripristinato. (D) l'aorta è legato con una sutura in seta 5-0 sul catetere inserito. Barra della scala = 5 mm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55763/55763fig1large.jpg" target="_blank">per favore clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55763/55763fig2.jpg"> 
Figura 2: Risultati rappresentativi postoperatori. Vista macroscopico sullo sviluppo visualizzando giorno postoperatorio 28 dei aneurysms aortici addominali fusiforme. Il margine elevato del retroperitoneum corrisponde al bordo esterno del aneurysm (linee spezzate; sinistra). L'estremità superiore e inferiore dell'aorta in ex vivo sono normali (a destra). Barra della scala = 3 mm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55763/55763fig2large.jpg" target="_blank">per favore clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55763/55763fig3.jpg"> 
Figura 3: Diametri di aortico massimo misurati usando l'ecografia transaddominale. Il diametro aortico aumentato costantemente in questo modello di ratto. Diametro aortico è presentati come media ± deviazione standard (n = 12). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55763/55763fig3large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55763/55763fig4.jpg"> 
Figura 4: Immagini rappresentative del tessuto aneurismatico con Elastica van Gieson macchiatura. Valutazione istologica con EVG macchiatura mostrando la lamina elastica degenerativa nei media e formazione di un trombo intraluminale 28 giorni dopo la procedura (a destra). Frammentazione di fibra elastica nei media aortici e della fibra collagene tipo sparse nel adventitia aortica sono osservati il giorno 28. Giorno 0 è prima della procedura (a sinistra). Barra della scala = 500 µm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55763/55763fig4large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

Inserimento del catetere in poliuretano nel lumen aortico e legatura del suturare dell'aorta indurre ipossia cronica dovuto il hypoperfusion del vasorum adventitial. Questo articolo descrive un nuovo modello animale di aneurysm aortico addominale (AAA) con caratteristiche simili a quelle di AAA in esseri umani.

Creazione di un modello del roditore del Aneurysm aortico addominale bloccando Adventitial Vasa Vasorum perfusione

The adventitial vasa vasorum (VV) provides oxygen and nourishment to the aortic wall. Hypoxia in the aortic wall can cause enlarged abdominal aortic ...

L'obiettivo generale di questa procedura è indurre un'ipossia del tessuto aortico per innescare un'aneurisma aortica addominale, o AAA, con dilatazione aortica progressiva nel ratto. Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali nel campo della ricerca sugli aneurismi aortici riguardo ai meccanismi responsabili dello sviluppo e della rottura degli aneurismi aortici addominali. Il principale vantaggio di questa tecnica è che le caratteristiche morfologiche e patologiche osservate nel modello del ratto sono simili a quelle riscontrate negli aneurismi aortici addominali umani.L'idea per questo metodo è nata quando stavamo esaminando un'altra possibilità relativa a un'AAA umana. La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale, poiché l'intervento chirurgico di induzione dell'ipossia è difficile da apprendere solo attraverso istruzioni basate esclusivamente sul testo. A dimostrare la procedura saranno Tatsuro Yata, il nostro chirurgo vascolare, e Hirona Kugo, entrambi ex dottorandi del nostro laboratorio.Dopo aver verificato il livello appropriato di sedazione mediante pizzicamento del dito del piede, utilizzare un rasoio elettrico per rimuovere i peli dell'addome di un ratto del peso di 300-400 milligrammi, seguito da una disinfezione sequenziale della cute esposta con soluzione alcolica e soluzione di povidone-iodio. Posizionare il ratto sul tavolo operatorio in posizione supina e applicare un unguento sugli occhi dell'animale. Successivamente, utilizzare un paio di forbici per praticare un'incisione addominale mediana ventrale ed usare garza sterile e un retraettore per ferite per contenere il contenuto addominale all'interno della cavità addominale.Per staccare l'aorta dal tessuto perivascolare, utilizzare una pinzetta per sollevare delicatamente e strappare il retroperitoneo, esponendo la parete aortica. Successivamente, dissezionare l'aorta infrarenale nello spazio retroperitoneale, dalla vena renale sinistra fino alla biforcazione, separandola dal tessuto perivascolare. Utilizzare un filo di sutura di seta 5-0 per legare i vasi che si diramano dall'aorta addominale, al fine di bloccare l'apporto ematico in un punto distante dall'aorta che non restringa il lume aortico.Per bloccare il flusso sanguigno aortico, posizionare clip vascolari appena al di sotto dell'arteria renale e appena al di sopra della biforcazione dell'aorta. In modo simile alla creazione di un'emorragia puntiforme sulla superficie della parete aortica, inserire le forbici microchirurgiche a 5 mm in senso distale rispetto al clip aortico, adiacente ai rami delle arterie renali, per tagliare la parete anteriore dell'aorta e utilizzare un ago indwelling da 24 gauge per inserire leggermente un catetere in poliuretano attraverso l'incisione. Collegare una siringa da 1 mL riempita con acqua al poliuretano e lavare il sangue residuo dall'aorta.Successivamente, tagliare un nuovo catetere in poliuretano lungo 10 mm ed inserirlo completamente nell'incisione del lume aortico. Riposizionare il punto medio del catetere in corrispondenza dell'incisione e utilizzare un punto singolo con sutura monofilamento 8-0 per chiudere l'incisione con punti separati. Legare l'aorta addominale con un nodo chirurgico utilizzando sutura in seta 5-0 e il catetere in poliuretano.Una volta assicurato il catetere, rimuovere le clip vascolari alla biforcazione aortica e al di sotto dell'arteria renale per ripristinare il flusso ematico anterogrado e confermare la presenza di pulsazioni aortiche evidenti. Dopo aver rimosso la garza, utilizzare un punto di sutura in polipropilene 4-0 per chiudere accuratamente l'incisione addominale in due strati, al fine di prevenire la fuoriuscita di organi. Successivamente, applicare lidocaina topica sull'incisione addominale e posizionare il ratto su un tappetino riscaldante con monitoraggio fino al completo recupero.Dopo l'intervento, osservare l'evoluzione temporale dell'aorta dilatata mediante ecografia, misurando il diametro massimo dal margine interno al margine esterno dell'aorta addominale secondo protocolli standard. A 28 giorni dall'intervento chirurgico, utilizzare un bisturi per aprire l'addome con una nuova incisione ventrale e utilizzare forbici per prelevare l'aneurisma. Porre le aorte prelevate in formalina neutra tamponata al 10% per 24-48 ore.Dopo aver incluso le aorte in paraffina e ottenuto sezioni del tessuto aortico, secondo protocolli standard, idratare le sezioni fissate in paraffina in acqua distillata per 10 minuti, seguito da incubazione in ematossilina di Verhoeff. La ruggine e la corrosione possono essere identificate mediante l'ematossilina di Verhoeff e la soluzione di van Gieson nell'attività di laboratorio. Pertanto, la freschezza e i tempi di incubazione di questi coloranti per tessuti sono importanti per l'archiviazione e la colorazione opzionale.Dopo 25 minuti, sciacquare le sezioni con tre lavaggi di 1 minuto in acqua, seguiti da 10-30 immersioni in soluzione differenziante. Risciacquare nuovamente le sezioni tre volte in acqua e immergere i campioni in tiosolfato di sodio al 5% per un minuto. Dopo un ulteriore lavaggio in acqua, immergere i campioni in soluzione di van Gieson per cinque minuti.Successivamente, disidratare i tessuti mediante immersioni ascendenti in etanolo per 30 secondi, seguite da un'operazione di chiarificazione con due incubazioni in xilene di 5 minuti ciascuna. Quindi utilizzare un mezzo di montaggio in risonanza per coprire le sezioni con coprioggetti di dimensioni adeguate. In queste immagini, viene mostrato un esempio rappresentativo di aneurisma dell'aorta addominale, a 28 giorni dall'inserimento del catetere.La misurazione delle estremità superiore e inferiore dell'aorta mediante ecografia transaddominale rivela un diametro normale senza dilatazione immediatamente dopo il posizionamento del catetere, che aumenta fino a raggiungere la dimensione massima a circa 14 giorni dal posizionamento e rimane invariato o aumenta leggermente fino alla fine del periodo sperimentale. L'analisi istopatologica dell'aneurisma al giorno 28 rivela una marcata degradazione delle fibre elastiche rispetto a quanto osservato al giorno zero. Una volta acquisita, questa tecnica può essere completata in circa un'ora se eseguita correttamente.Seguendo questa procedura, è possibile eseguire altri metodi come l'analisi in vitro per rispondere a ulteriori domande riguardo le funzioni seriali individuali. Dopo il suo sviluppo, questa tecnica ha aperto la strada ai ricercatori nel campo dell'aneurisma aortico addominale per esplorare la malattia in specifiche popolazioni di pazienti. Dopo aver visto questo video, si dovrebbe avere una buona comprensione di come indurre l'ipossia del tessuto aortico per l'insorgenza di aneurismi aortici addominali con dilatazione aortica progressiva nel ratto.Non dimenticare che lavorare con strumenti chirurgici può essere estremamente pericoloso e che durante l'esecuzione di questa procedura si devono sempre adottare precauzioni contro lesioni e infezioni.

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