Creazione di un modello del roditore del Aneurysm aortico addominale bloccando Adventitial Vasa Vasorum perfusione

L'obiettivo generale di questa procedura è indurre l'ipossia del tessuto aortico per l'inizio di un aneurisma dell'aorta addominale o AAA con dilatazione aortica progressiva nel ratto. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel periodo di ricerca sugli aneurismi aortici sui meccanismi responsabili dello sviluppo e della rottura degli aneurismi dell'aorta addominale. Il vantaggio principale di questa tecnica è che le caratteristiche morfologiche e patologiche di quella tra il modello di ratto sono simili a quelle osservate negli aneurismi dell'aorta addominale umana.

Abbiamo avuto l'idea di questo metodo per la prima volta quando stavamo studiando un'altra possibilità di un AAA umano. La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale in quanto la chirurgia di induzione dell'ipossia è difficile da apprendere solo attraverso l'istruzione di testo. A dimostrare la procedura saranno Tatsuro Yata, il nostro chirurgo vascolare, e Hirona Kugo, entrambi dottori del nostro laboratorio.

Dopo aver confermato il livello appropriato di sedazione con il pizzicamento delle dita dei piedi, utilizzare un rasoio elettrico per radere i peli addominali di un ratto da 300 a 400 milligrammi, seguito da una disinfezione sequenziale con alcol e soluzione di iodio povidone della pelle esposta. Posiziona il ratto sul tavolo operatorio in posizione supina e applica un unguento sugli occhi dell'animale. Quindi, usa una forbice per praticare un'incisione addominale ventrale sulla linea mediana e usa una garza sterile e un divaricatore per ferite per impacchettare il contenuto addominale all'interno della cavità addominale.

Per staccare l'aorta dal tessuto perivascolare, utilizzare una pinzetta per raccogliere e strappare delicatamente il retroperitoneo, esponendo la parete aortica. Quindi, esfoliare l'aorta infrarenale all'interno dello spazio retroperitoneale dalla vena renale sinistra alla biforcazione dal tessuto perivascolare. Utilizzare una sutura di seta 5-0 per legare i vasi che si diramano dall'aorta addominale per bloccare l'afflusso di sangue in un punto lontano dall'aorta che non restringe il lume aortico.

Per bloccare il flusso sanguigno aortico, posizionare clip vascolari appena sotto l'arteria renale e appena sopra la biforcazione dell'aorta. Simile alla creazione di un'emorragia a punti sulla superficie della parete aortica, inserire la microforbice a 5 mm distalmente dalla clip aortica adiacente ai rami dell'arteria renale per tagliare la parete aortica anteriore e utilizzare un ago a permanenza calibro 24 per inserire superficialmente un catetere in poliuretano attraverso l'incisione. Collegare una siringa da 1 ml piena d'acqua al poliuretano e sciacquare il sangue rimanente dall'aorta.

Quindi, tagliare un nuovo catetere in poliuretano lungo 10 mm e inserire completamente questo catetere nell'incisione del lume aortico. Riposizionare il punto medio del catetere in modo che corrisponda alla posizione dell'incisione e utilizzare un 8-0 sutura monofilamento per chiudere l'incisione con una sutura interrotta. Legare l'aorta addominale con un nodo da chirurgo utilizzando la sutura di seta 5-0 e il catetere in poliuretano.

Quando il catetere è sicuro, rimuovere le clip vascolari in corrispondenza della biforcazione aortica e sotto l'arteria renale per ripristinare il flusso sanguigno anterogrado e confermare la presenza di pulsazioni aortiche macroscopiche. Dopo aver rimosso la garza, utilizzare una sutura in polipropilene 4-0 per chiudere ermeticamente l'incisione addominale in due strati per evitare la sporgenza dell'organo. Quindi, applicare la lidocaina topica sull'incisione addominale e posizionare il ratto su un termoforo con monitoraggio fino alla completa ricompensa.

Dopo l'intervento, osservare l'andamento temporale dello sviluppo dell'aorta ingrossata su un ecogramma ecografico, misurando il diametro massimo dal bordo interno al bordo esterno dell'aorta addominale secondo i protocolli standard. 28 giorni dopo l'intervento, utilizzare un bisturi per aprire l'addome con una nuova incisione ventrale e utilizzare le forbici per prelevare l'aneurisma. Porre le aorte prelevate in formalina tamponata neutra al 10% per 24-48 ore.

Dopo aver incorporato le aorte in paraffina e ottenuto sezioni di tessuto aortico, secondo i protocolli standard, idratare le sezioni fisse di paraffina in acqua distillata per 10 minuti, seguite dall'incubazione nell'ematossilina di Verhoeff. La ruggine e la corrosione possono essere identificate con l'ematossilina di Verhoeff e l'attività del laboratorio di soluzioni di van Gieson. Pertanto, la freschezza e i tempi di incubazione di questi coloranti per tessuti sono importanti per l'archiviazione e la colorazione facoltativa.

Dopo 25 minuti, sciacquare le sezioni con tre lavaggi da 1 minuto in acqua, seguiti da 10-30 immersioni in soluzione differenziante. Sciacquare nuovamente le sezioni tre volte in acqua e immergere i campioni in tiosolfato di sodio al 5% per un minuto. Dopo un altro lavaggio con acqua, immergere i campioni nella soluzione di van Gieson per cinque minuti.

Successivamente, disidratare i tessuti in immersioni di etanolo ascendente di 30 secondi, seguite dalla clearance con due incubazioni di xilene di 5 minuti. Quindi utilizzare un mezzo di montaggio a risonanza per coprire le sezioni con vetrini coprioggetti di dimensioni adeguate. In queste immagini viene mostrato un aneurisma dell'aorta addominale rappresentativo, 28 giorni dopo l'inserimento del catetere.

La misurazione delle estremità superiore e inferiore dell'aorta mediante ecografia transaddominale rivela un diametro normale senza dilatazione subito dopo il posizionamento del catetere, che aumenta fino a una dimensione massima a circa 14 giorni dal posizionamento e rimane invariato o aumenta leggermente fino alla fine del periodo sperimentale. L'analisi istopatologica dell'aneurisma al giorno 28 rivela una degradazione prominente delle fibre elastiche rispetto a quella osservata il giorno zero. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere completata in circa un'ora se eseguita correttamente.

Seguendo questa procedura, è possibile eseguire altri metodi, come l'analisi in vitro, per rispondere a ulteriori domande sulle singole funzioni seriali. Dopo il suo sviluppo, questa tecnica ha aperto la strada ai ricercatori nel campo dell'aneurisma dell'aorta addominale per esplorare la malattia in specifici dati demografici di pazienti. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come indurre l'ipossia del tessuto aortico per l'inizio degli aneurismi dell'aorta addominale con dilatazione aortica progressiva nel ratto.

Non dimenticare che lavorare con strumenti chirurgici può essere estremamente pericoloso e che è necessario prendere sempre precauzioni contro lesioni e infezioni durante l'esecuzione di questa procedura.