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DOI: 10.3791/56024-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This article presents a protocol for immunohistochemical staining of myosin heavy chain isoforms to identify skeletal muscle fiber types. The method includes a novel semi-automated algorithm for rapid assessment of fiber-type and morphology.
La macchiatura di Immunohistochemical delle isoforme della catena pesante della miosina è emerso come il discriminatore di state-of-the-art di fibra del muscolo scheletrico-tipo (cioè, tipo I, tipo IIA, tipo IIX, tipo IIB). Qui, presentiamo un protocollo di colorazione insieme a un algoritmo romanzo semi-automatico che facilita la rapida valutazione della morfologia del tipo di fibra e fibra.
L'obiettivo generale di questo protocollo è quello di utilizzare l'immunoistochimica all'avanguardia per identificare in modo accurato e rapido i tipi di fibre muscolari scheletriche. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della biologia muscolare, come ad esempio se i cambiamenti del tipo di fibra sono precipitati dalla perdita di proteine funzionali. Sebbene questo metodo possa fornire informazioni su molti modelli di malattia muscolare, può anche essere utilizzato in sistemi come i modelli knock in e knock out per rivelare il maggiore impatto di una singola molecola sulla funzione muscolare di base.
Per iniziare, asciugare all'aria sezioni congelate del muscolo del topo su vetrini caricati per circa mezz'ora. Una volta asciugato, disegna un bordo attorno alle sezioni di ogni vetrino utilizzando una penna PAP a barriera idrofobica. Successivamente, per bloccare il legame degli anticorpi aspecifici, caricare circa 250 microlitri di 5%BSA in PBS all'interno dei bordi tracciati e incubare i vetrini a temperatura ambiente per un'ora.
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