Name: Isolierung und Kultivierung von neuronalen Vorläuferzellen gefolgt von Chromatin Immunopräzipitation Histon 3 Lysin 79 Dimethylation Marke (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 9 s
Description: Erfahren Sie die Isolierung und Kultivierung neuronaler Vorläuferzellen aus embryonalem und postnatalem Hirngewebe zur Analyse epigenetischer Modifikationen, insbesondere der Histonmarke H3K79me2, mittels Chromatin-Immunpräzipitation.

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Wir danken für die Unterstützung der CGN-Anbau-Protokoll im Labor herstellen Henriette Bertemes. Dieser Methode Papier wurde von der DFG-geförderten CRC992 medizinische Epigenetik unterstützt, durch die Finanzierung zu TV. Die Autoren erkennen die Unterstützung von Freiburg Galaxy Team: Pavankumar Videm, Björn Grüning und Prof. Rolf Backofen, Bioinformatik, Universität Freiburg, Deutschland finanziert Collaborative Research Center 992 medizinische Epigenetik (DFG Stipendium SFB 992/1 2012) Bundesministerium für Bildung und Forschung (BMBF Grant 031 A538A RBC (de.) NBI)).

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Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessenkonflikte

Es gibt zwei große Möglichkeiten, um führen Sie Chromatin Immunopräzipitation um die genomische Belegung der Histon-Modifikationen, Transkriptionsfaktoren, Histon-Code-Leser, Autoren oder Radiergummis zu erkennen. Eine ist die native ChIP-Methode mit Nuklease verdaut, native Chromatin für Immunopräzipitation, und die andere ist die vorgestellte Methode mit PFA-repariert, abscherend Chromatin, in dem die Nukleosomen und andere DNA-attached Proteine kovalent an die DNA gebunden sind 39. native ChIP ...

Die sensorischen, motorischen und kognitiven Funktionen des Gehirns sind hoch komplex und anfällig für körperliche und ökologischen Veränderungen. Das Gehirn besteht aus drei allgemeine Teile der Hind-, Mittel-, und Vorderhirn, die zutiefst verbunden sind. Im Vorderhirn kann das Telencephalon in einer dorsalen Telenzephalon (DT) und einer ventralen Telencephalon (VT) unterteilt werden. Die DT von Mäusen besteht aus sechs kortikalen Schichten, die zwischen E11.5 und E18.5 in einer Art und Weise der "Inside-Out"1gebildet werden. Der VT umfasst die ganglionic Eminenzen in Entwicklung, die später die Basalganglien2,3bilden. Verschiedene Zelltypen lassen sich einteilen in den Säugetier-Zentralnervensystem wie Neuronen, Astrozyten oder Oligodendrozyten4, die in einem Temporo-räumliche Weise5zu entwickeln. Zunächst entstehen die neurale Vorläuferzellen (NPCs) verschiedene Arten von Neuronen, Interneuronen in der VT und Projektion Neuronen in der DT und später nach Gliazellen (z.B. Astrozyten6). Während der kortikalen Entwicklung, die oberflächlichste Schicht (Schicht I), Cajal-Retzius-Zellen enthält zuerst gebildet ist. Anschließend generieren NPCs zwischen E12.5 und E14.5, neuronale Tiefenschichten (VI, V) beim zwischen 14,5 und 16,5, Stammväter Anlass zu Oberschicht (IV-II) Neuronen7,8. Neuronale Identität wird von verschiedenen Morphogen-induzierte Temporo-räumliche transkriptionelle Programmen und zusätzlich durch epigenetische Programme2angegeben.
Das Kleinhirn, die motorische Koordination beteiligt ist, befindet sich in dem Hinterhirn und zwischen E10 und grob P20 in Mäusen9entwickelt. Es enthält die zerebelläre Kortex und zerebelläre Kerne10. Die Erwachsenen zerebelläre Kortex besteht aus drei Schichten, die äußerste molekulare Schicht, die Purkinje-Zellschicht und der innersten Körnerschicht enthält körnige Neuronen10. Die zerebelläre Granulat-Zellen sind die kleinsten Neuronen und repräsentieren rund 80 % aller Neuronen in der vertebrate Gehirn-11. Sie entwickeln aus Vorstufen in der externen germinal Zone gelegen und durchwandern der Purkinje Zelle Schicht auf ihre Ziel-12. Wie die Entwicklung des Kleinhirns im Telencephalon, durch mehrere wichtige Morphogens reguliert wird, definiert die bestimmte Zeit und Raum-abhängige Funktionen und initiieren transkriptionelle Programme10.
Die Entwicklung der kortikalen und zerebelläre Schichten wird durch transkriptionelle Ausdruck der spezifischen Morphogens und damit der Chromatin-Staat der DNA gesteuert. In einer vereinfachten Ansicht können Euchromatin als transcriptionally aktiv und Heterochromatin als transcriptionally leisen Regionen Chromatin Staaten aufgeteilt werden. Das Nukleosom als die grundlegende Maßeinheit des Chromatins enthält zwei Kopien von jedem Core-Histone H2A, H2B, H3 und H4, umgeben von 147 Basenpaare der DNA-13. Histone werden durch Methylierung, Acetylierung Phosphorylierung, Ubiquitination, Sumoylierung, ADP-Ribosylation, Deamination und Prolin Isomerisierung14,15hoch posttranslational modifiziert. Histon-Lysin-Methylierung gilt als die stabilste Histon-Modifikation, die Transkription, Replikation, Rekombination16, DNA-Schäden Antwort17und genomische Prägung18steuert. Lysines können Mono-, di- oder Tri-methylierte19 und erscheinen nicht nur auf den zugänglichen Histon-Schwänzen, sondern auch innerhalb der globulären Domäne der Histone20. Spezifische Methylations H3K4 und H3K36 vor allem mit Euchromatin verbunden sind, spezifische Methylations bei H3K9, H3K27 oder H4K20 sind vor allem in heterochromatischen Regionen gefunden, obwohl alle Rückstände der Histon Schweif14, liegen 19,21. H3K79-Methylierung befindet sich innerhalb der Histon globulären Domäne und transkriptionelle Aktivität, sondern auch mit transcriptionally inert genomische Regionen22zugeordnet wurde. Die Änderung ist evolutionär konserviert, da es in Hefe, Thymus Kalb, Huhn und menschlichen23beobachtet hat. H3K79 Mono, di und Trimethylation (H3K79me1, me2, me3) sind durch die Histon-Methyltransferasen DOT1L24,25 und die nukleare SET Domain-haltige Protein 2 (Nsd2)26katalysiert. DOT1L ist in Proliferation, DNA-Reparatur und Mobilfunk umprogrammieren27verwickelt. Verlust von Dot1l bei Mäusen führt zu einer pränatalen Tod um die Entwicklungsphase E10.528,29. Während der Entwicklung von Herz und Myocardiocyte Differenzierung unbedingt DOT1L gen Ausdruck Verordnung30. In das zentrale Nervensystem, DOT1L Funktion im Neuralrohr Entwicklung31einbezogen werden könnte, sie engagiert sich bei der Unterdrückung der Tbr1-Ausdruck im Vorderhirn Entwicklung32, und funktionieren in der Verordnung von ER-Stress Antwort Gene33. Die Kontext-abhängige Aktivierung oder unterdrücken Einwirkung von H3K79me, vor allem mit in Vivo Situationen wie die Entwicklung des zentralen Nervensystems, ist bis heute nur teilweise verstanden32. Da H3K79-Methylierung in der globulären Domäne von Histon 3 befindet, ist es im Vergleich zu Änderungen auf die flexible Histone Tails23sterisch weniger zugänglich. Um die Funktion der H3K79-Methylierung zu verstehen, brauchen wir zuverlässige und reproduzierbare Analyse-Methoden, seine Lage und genomische Umwelt bestimmen. In diesem Methoden-Papier präsentieren wir Ihnen Isolationsmethoden von verschiedenen neuronalen Vorläuferzellen (CPC-Gebote für den Kortex) und CGNPs für das Kleinhirn, wirksame DOT1L Inhibitor Behandlung und eine ChIP-Methode H3K79 Methylierung mittels qPCR oder Sequenzierung zu verschiedener Zeit analysieren Punkte während der kortikalen und zerebelläre Entwicklung. Für einen Überblick über das Protokoll und seine Möglichkeiten siehe Abbildung 1.

<table><tbody><tr><td>Anti-GAPDH</td><td>Abcam</td><td>ab8245</td><td>Category: Antibody Abkürzung/Comment: Immunoblot Verdünnung 1:5000</td></tr><tr><td>Anti-H3</td><td>Abcam</td><td>ab1791</td><td>Category: Antikörper Abkürzung/Kommentar: Immunoblot Verdünnung 1:3000</td></tr><tr><td>Anti-H3K79me2</td><td>Diagenode</td><td>pAb-051-050<</td><td>strong>Category: Antibody Abkürzung/Comment: ChIP Antikörper</td></tr><tr><td>Anti-H3K79me2</td><td>Abcam</td><td>ab-051-050</td><td><Category:> Antibody Abkürzung/Comment: Immunoblot Verdünnung 1:1000</td></tr><tr><td>Anti-Kaninchen-IgG</td><td>Diagenode</td><td>C15410206</td><td>Category: Antibody Abkürzung/Comment: ChIP Ctrl Antikörper</td></tr><tr><td>Anti-Tubulin alpha</td><td>Abcam</td><td>ab108629</td><td>Category: Antibody Abkürzung/Comment: Immunoblot Verdünnung 1:3000</td></tr><tr><td>Apo-Transferrin (1 mg/ml)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1147</td><td>Category: Cell culture Abkürzung/Kommentar: Für CCM</td></tr><tr><td>B27 Supplement (50x)</td><td>Life Technologies</td><td>17504044</td><td>Category: Cell culture Abkürzung/Kommentar: Für CCM</td></tr><tr><td>Bioanalyzer</td><td>Agilent Technologies</td><td>G2940CA</td><td>Category: ChIP Abkürzung/Comment: Für die Analyse von geschertem Chromatin</td></tr><tr><td>Bioruptor NextGen</td><td>Diagenode</td><td>B01020001</td><td>Category: ChIP Abkürzung/Comment: Ultraschallgerät</td></tr><tr><td>Borsäure pH 8,4</td><td>Sigma Aldrich</td><td>B6768</td><td>Category: Cell culture Abkürzung/Comment: Für die CPC-Kultivierung</td></tr><tr><td>CFX Connect RT PCR Detection System</td><td>Bio-Rad</td><td>1855201</td><td>Category: ChIP Analysis Abkürzung/Kommentar: Nachweissystem für qPCR</td></tr><tr><td>DMEM-F12</td><td>Life Technologies</td><td>11320-033</td><td>Category: Cell culture Abkürzung/Kommentar: Für CGM</td></tr><tr><td>Dynabeads Protein A</td><td>Invitrogen</td><td>10001D</td><td>Category: ChIP Abkürzung/Comment: Magnetische Kügelchen, für ChIP</td></tr><tr><td>EPZ-5676</td><td>Selleckchem</td><td>S7062</td><td>Category: DOT1L Inhibition Abkürzung/Comment: Für die DOT1L-Hemmung in Zellkulturen</td></tr><tr><td>Ethylendiamin Tetraessigsäure</td><td>SERVA</td><td>39760.01</td><td>Category: ChIP Abkürzung/Kommentar: EDTA</td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum 10% (v/v)</td><td>Gibco</td><td>10082147</td><td>Category: Cell culture Abkürzung/Comment: Für CPC-Isolierung und CGM</td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5767<</td><td>strong>Category: Cell culture Abkürzung/Kommentar: Für CGNP-Isolierung</td></tr><tr><td>Glutathion (1,25 mg/ml)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G4251</td><td>Category: Cell culture Abkürzung/Comment: Für CCM</td></tr><tr><td>Glycine</td><td>Carl Roth</td><td>3187</td><td>Category: ChIP Abkürzung/Comment: Für die Zellfixierung</td></tr><tr><td>GoTaq Mastermix</td><td>Promega</td><td>A6002</td><td>Category: ChIP Analysis Abkürzung/Kommentar: DNA-Polymerase-Mastermix für qPCR</td></tr><tr><td>Hank' s Balanced Salt Solution Life</td><td>Technologies</td><td>14025-100<</td><td>strong>Category: Cell culture Abkürzung/Comment: HBSS</td></tr><tr><td>L-Glutamin (200 mM)</td><td>Life Technologies</td><td>25030081</td><td>Category: Cell culture Abkürzung/Kommentar: Für CCM</td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L2020</td><td>Category: Cell culture Abkürzung/Comment: Für die CPC-Kultivierung</td></tr><tr>von<td>Lithiumchlorid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L4408</td><td>Category: ChIP Abkürzung/Comment: LiCl</td></tr><tr><td>N2 Ergänzung</td><td>Life Technologies</td><td>17502048</td><td>Category: Cell culture Abkürzung/Comment: Für CGM</td></tr><tr><td>NanoDrop 3300</td><td>Thermo Fisher</td><td>3300</td><td>Category: ChIP Abkürzung/Kommentar: Fluorostrometer für die DNA-Quantifizierung</td></tr><tr><td>NEB Next Ultra DNA Library Prep Kit für Illumina</td><td>NEB</td><td>E7645S</td><td>Category: ChIP Analysis Abkürzung/Comment: Kit für die Bibliotheksvorbereitung</td></tr><tr><td>NEBNext Multiplex-Oligos für Illumina</td><td>NEB</td><td>E7335</td><td>Category: ChIP Analysis Abkürzung/Comment: Oligos für die Bibliotheksvorbereitung</td></tr><tr><td>Neurobasales Medium</td><td>Gibco</td><td>21103049</td><td>Category: Cell culture Abkürzung/Comment: Für CCM</td></tr><tr><td>NP-40 Alternative</td><td>Calbiochem</td><td>492016</td><td>Category: ChIP Abkürzung/Kommentar: Für ChIP-Puffer</td></tr><tr><td>Paraformaldehyd</td><td>Carl Roth</td><td>335</td><td>Category: ChIP Abkürzung/Comment: PFA, für die Zellfixierung</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin-Neomycin 1% (v/v)</td><td>Life Technologies</td><td>15640055</td><td>Category: Cell culture Abkürzung/Comment: PSN, für CCM und CGM</td></tr><tr><td>Phosphat gepufferte Kochsalzlösung</td><td>Life Technologies</td><td>10010023</td><td>Category: Cell culture Abkürzung/Comment: PBS, für die CPC-Isolierung</td></tr><tr><td>PicoGreen Kit</td><td>Thermo Fisher</td><td>P11496</td><td>Category: ChIP Analysis Abkürzung/Comment: Visualisierung von Farbstoff für die DNA-Quantifizierung</td></tr><tr><td>Poly-D-Lysin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6407</td><td>Category: Cell culture Abkürzung/Comment: Für die CGNP-Isolierung</td></tr><tr><td>Poly-L-Ornithin-Hydrobromid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P3655<</td><td>strong>Category: Cell culture Abkürzung/Comment: Für die CPC-Kultivierung</td></tr><tr><td>Kaliumchlorid</td><td>Thermo Fisher</td><td>AM9640G</td><td>Category: Cell culture Abkürzung/Comment: KCl, für CGM</td></tr><tr><td>Proteasehemmer</td><td>Roche</td><td>4693159001</td><td>Category: ChIP Abkürzung/Comment: Für ChIP</td></tr><tr><td>Proteinase K</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>3115879001</td><td>Category: ChIP Abkürzung/Comment: Für ChIP</td></tr><tr><td>Qiagen MinElute</td><td>Qiagen</td><td>28004</td><td>Category: ChIP Abkürzung/Comment:Kit für die DNA-Aufreinigung</td></tr><tr><td>RNAse</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R6513</td><td>Category: ChIP Abkürzung/Kommentar: Für ChIP</td></tr><tr><td>SGC0946</td><td>Selleckchem</td><td>S7079</td><td>Category: DOT1L inhibition Abbreviation/Comment: Für DOT1L-Hemmung in Zellkulturen</td></tr><tr><td>Natriumbicarbonat</td><td>Carl Roth</td><td>8551.1</td><td>Category: ChIP Abkürzung/Kommentar: für Elutionspuffer</td></tr><tr><td>Natriumchlorid</td><td>Carl Roth</td><td>9265</td><td>Category: ChIP Abkürzung/Comment: NaCl, für ChIP-Puffer</td></tr><tr><td>Natriumdesoxycholat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>30970</td><td>Category: ChIP Abkürzung/Comment: Für ChIP</td></tr><tr><td>Natrium Dodecylsulfat</td><td>Carl Roth</td><td>183</td><td>Category: ChIP Abkürzung/Comment: SDS, für ChIP</td></tr><tr><td>Sonic hedgehock (SHH)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SRP6004</td><td>Category: Cell culture Abkürzung/Kommentar: Für die CGNP-Isolierung</td></tr><tr><td>Superoxiddismutase (1mg/ml)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7571</td><td>Category: Cell culture Abkürzung/Comment: Für CCM</td></tr><tr><td>Tris(hydroxymethyl)aminomethan</td><td>Carl Roth</td><td>9090</td><td>Category: ChIP Abkürzung/Comment: TRIS, für ChIP-Puffer</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Carl Roth</td><td>X100</td><td>Category: ChIP Abkürzung/Comment: Für ChIP-Puffer</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA 0,05% (w/v)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>59417C</td><td>Category: Cell culture Abkürzung/Comment: Für CPC-Isolierung</td></tr><tr><td>Tween20</td><td>Carl Roth</td><td>28320</td><td>Category: ChIP Abkürzung/Comment: Zur Präparation von Kügelchen</td></tr><tr><td>Weitere Laborgeräte: Neubauer-Zählkammer, Inkubator, Rotator, Shaker, Dissektionsset, Wasserbad</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CCM: Kortikales Zellmedium</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CGM: CGNP-Zellkulturmedium</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

isolierung und kultivierung von neuronalen vorläuferzellen gefolgt von chromatin immunopräzipitation histon 3 lysin 79 dimethylation marke

Isolation and Cultivation of Neural Progenitors Followed by Chromatin-Immunoprecipitation of Histone 3 Lysine 79 Dimethylation Mark

Die Entwicklung des Gehirns ist ein komplexer Prozess, der in gewissem Sinne Temporo-räumliche von Steigungen von Morphogens und verschiedene transkriptionelle Programme gesteuert wird. Darüber hinaus haben die epigenetische Chromatin Modifikationen, wie Histon-Methylierung, für Aufbau und Pflege von bestimmten Zelle Schicksale in diesem Prozess eine wichtige Rolle. Die überwiegende Mehrheit der Histon-Methylierung tritt auf die flexible Histon-Schweif, die Histon-Modifikatoren, Radiergummis und Histonproteine Leser zugänglich ist. Im Gegensatz dazu H3K79 Methylierung befindet sich in der globulären Domäne von Histon 3 und ist in verschiedenen Entwicklungsstörungen Funktionen beteiligt. H3K79-Methylierung ist evolutionär konserviert und finden in den unterschiedlichsten Arten von Homo Sapiens zu Saccharomyces Cerevisiae. Die Änderung tritt in unterschiedlichen Zellpopulationen innerhalb von Organismen, einschließlich des neuronalen Vorläuferzellen. Die Lage der H3K79-Methylierung in der globulären Domäne von Histon 3 macht es schwierig zu beurteilen. Hier präsentieren wir Ihnen Methoden, zu isolieren und Kultur kortikalen Progenitor Zellen (CPCs) aus embryonalen kortikalen Hirngewebe (E11.5-E14.5) oder zerebelläre granulare Neuron Stammväter (CGNPs) vom postnatalen Gewebe (P5-P7) und effizient immunoprecipitate H3K79me2 für quantitative PCR (qPCR) und genomweite Sequenzierung.

Allgemeine Systematik der neuronalen Vorläuferzellen Isolation, Anbau, H3K79me2 ChIP und ChIP-Analyse-Methoden: Abbildung 1 zeigt ein Flussdiagramm H3K79me2 ChIP der kortikalen Vorläuferzellen zu verschiedenen Zeitpunkten während der Entwicklung des embryonalen Gehirns oder zerebelläre granulare Neuron Stammväter in postnatale Phasen durchführen. Als ersten Schritt das Gehirn isoliert werden und das Telencephalon (zwischen E11.5 und E14.5) od...

Wir präsentieren Ihnen eine effektive und reproduzierbare Methode zum isolieren und Kultur neurale Vorläuferzellen aus embryonalen und postnatale Hirngewebe für Chromatin Immunopräzipitation (ChIP) von Histon 3 Lysin 79 Dimethylation (H3K79me2) - eine Histon-Markierung befindet sich innerhalb der globulären Domäne des Histon 3.

Isolierung und Kultivierung von neuronalen Vorläuferzellen gefolgt von Chromatin Immunopräzipitation Histon 3 Lysin 79 Dimethylation Marke

Brain development is a complex process, which is controlled in a temporo-spatial manner by gradients of morphogens and different transcriptional programs. ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, epigenetische Veränderungen während der Gehirnentwicklung, insbesondere in der Großhirnrinde und im Kleinhirn, zu analysieren. Diese Methode kann verwendet werden, um Schlüsselfragen im Bereich der Neurobiologie zu beantworten, z. B. wie Histonmodifikationen wie die H3K79-Methylierung die Entwicklung der kortikalen und zerebellären Schichtung beeinflussen können. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass wir in vivo die Histonmodifikationen, locusspezifisch oder genomweit, in verschiedenen Hirnregionen zu bestimmten Entwicklungszeitpunkten untersuchen können.Beginnen Sie mit Gehirnen von P5 bis P7 und MRT-Mäusen. Entfernen Sie alle Hirnhäute und Blutgefäße. Übertragen Sie dann drei bis fünf Cerebella pro Chip in 15-Milliliter-Röhrchen.Waschen Sie das Kleinhirn vor der Zentrifugation mit HBSS-Glukose. Zentrifugieren Sie die Röhrchen, um das Gewebe zu sammeln. Nach der abschließenden Wäsche homogenisieren Sie das Kleinhirn, indem Sie zwei- bis dreimal vorsichtig mit einer Ein-Milliliter-Pipette auf und ab pipettieren, bis die Fragmente 0,5 bis einen Kubikmillimeter groß sind.Entfernen Sie vorsichtig die gesamte Flüssigkeit, b

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Die zellulären Heterogenität von Hirngewebe stellt eine erhebliche Einschränkung für das Studium der epigenetischen Markierungen in Chromatin, da die meisten Assays einzelne Zelle Auflösung fehlt. Neuronen sind typischerweise mit Glia und andere nicht-neuronalen Zellen vermischt. Wir bieten ein Protokoll zu extrahieren und zu sammeln neuronale Kerne von menschlichen Gehirns.

Neuronale Kerne Isolation von Human Postmortem Gehirngewebe

Hier beschreiben wir, wie zu produzieren, zu erweitern und immunolabel postnatalen Hippocampus neuronale Vorläuferzellen (NPCs) im dreidimensionalen (3D-) Kultur. Als nächstes mit Hybrid-Visualisierungs-Technologien, demonstrieren wir, wie digitale Bilder von immunolabelled Kryoschnitten verwendet werden, um zu rekonstruieren und Karte der räumlichen Lage der immunpositive Zellen über die gesamte 3D-Neurosphäre werden.

Lokalisieren von Protein in 3D Neural Stem Cell Culture: Ein Hybrid Visualisierung Methodology

Dieses Protokoll zeigt Methoden verwendet werden, um 2D-und 3D-Umgebungen in speziell angefertigten electrotactic Kammern einzurichten, die Zellen verfolgen...

Electric Field-gesteuerte gerichtete Wanderung von neuralen Vorläuferzellen in 2D-und 3D-Umgebungen

Isolierung von embryonalen Neuralleiste vom Neuralrohr erleichtert die Verwendung...

Isolierung und Kultivierung von Zellen der Neuralleiste aus embryonalen murinen Neuralrohr

Dieses Video demonstriert eine Technik zur Isolierung von induzierten neuralen Vorläuferzellen (iNPCs), die aus adulten menschlichen Fibroblasten stammen. Es werden die Schritte beschrieben, die erforderlich sind, um die iNPC-Kolonien zu isolieren und sie in lamininbeschichteten Multi-Well-Plattenvertiefungen in Gegenwart geeigneter Nährmedien zu kultivieren, die die weitere Proliferation und Expansion der iNPC-Population erleichtern.

Isolierung induzierter neuraler Vorläuferzellkolonien, die aus adulten humanen Fibroblasten stammen

Dieses Video zeigt die Isolierung und Kultivierung von Kleinhirn-Vorläuferzellen aus dem Kleinhirn eines Mauswelpen. Kleinhirngranula-Neuronen-Vorläuferzellen werden isoliert und durch differentielle Adhäsion gereinigt, wodurch Astrozyten effektiv entfernt werden. Diese kultivierten Vorläuferzellen differenzieren sich anschließend zu Kleinhirn-Körnerneuronen.

Isolierung und Kultivierung von zerebellären granulären Neuronen-Vorläuferzellen der Maus

Quelle: Mendez, F. M. et al., Native Chromatin Immunoprecipitation using Murine Brain Tumor Neurospheres. J. Vis. Exp. (2018). Dieses Video zeigt die Isolierung von Protein-DNA-Komplexen aus Neurosphärenzellen, die aus einem Maushirntumor stammen, mittels nativer Chromatin-Immunpräzipitation. Es beschreibt die Schritte für die Chromatinvorbereitung, die Immunpräzipitation, das Waschen und den Proteinverdau, um DNA für die nachgelagerte Analyse freizusetzen.

Native Chromatin-Immunpräzipitation von Neurosphärenzellen

Mit der Absicht, Veränderungen in miRNAs auf differenzierten humanen neuralen Stammzellen (hNSCs) zu charakterisieren, beschreiben wir die hNSC-Differenzierung auf einem dreidimensionalen System, die Bewertung von Veränderungen in der microRNA-Expression durch miRNA-PCR-Arrays und computergestützte Analysen zur Vorhersage von miRNA-Zielen und deren Validierung durch duale Luciferase-Assays.

Differenzierung einer Menschen Neural Stem Cell Line auf Dreidimensional Kulturen, Analyse der MicroRNA und mutmaßlichen Zielgene

Epigenetische Mechanismen werden häufig in Gliom verändert. Chromatin Immunopräzipitation könnte verwendet werden, um die Auswirkungen der genetischen Veränderungen, die in Gliom zu studieren, die aus Änderungen in Histon Änderungen ergeben, die Chromatin Struktur und gen-Transkription regulieren. Dieses Protokoll beschreibt native Chromatin Immunopräzipitation auf murine Gehirn Tumor Neurosphären.

Native Chromatin Immunopräzipitation mit Murine Gehirn Tumor Neurosphären

Wir beschreiben eine Schritt für Schritt Protokoll für Tandem Chromatin Immunopräzipitation Sequenzierung (tChIP-Seq), die es die Analyse der Zelle-typspezifischen genomweite Histon-Modifikation ermöglicht.

TChIP-Seq: Cell-Type-Specific Epigenom Profilierung

Hier stellen wir eine neuartige mikrochirurgische Technik für die Isolierung von neuralen Stammzellen aus E13 Maus Embryo ganglionic Eminenz.

Isolation und Kultur der embryonalen Maus neurale Stammzellen

Erfahren Sie die Isolierung und Kultivierung neuronaler Vorläuferzellen aus embryonalem und postnatalem Hirngewebe zur Analyse epigenetischer Modifikationen, insbesondere der Histonmarke H3K79me2, mittels Chromatin-Immunpräzipitation.

Isolierung und Kultivierung von neuronalen Vorläuferzellen gefolgt von Chromatin Immunopräzipitation Histon 3 Lysin 79 Dimethylation Marke (Video) | JoVE Journal

Isolierung und Kultivierung von neuronalen Vorläuferzellen gefolgt von Chromatin Immunopräzipitation Histon 3 Lysin 79 Dimethylation Marke

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