Riconoscimento di oggetti nuovi e oggetto posizione comportamentali test in topi con un budget limitato

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave sulla regolazione della memoria. Ad esempio, determiniamo il ruolo di proteine specifiche in memoria testando topi knockout transgenici in questi compiti. Il vantaggio principale di questa tecnica è che è un modo rapido ed economico per condurre test di memoria in qualsiasi laboratorio.

La dimostrazione della costruzione dell'arena è fondamentale, perché la saldatura a solvente produrrà risultati forti solo se eseguita con cura. Inizia acquisendo cinque fogli di acrilico, cemento acrilico e un applicatore ipo calibro 16. Rimuovere il rivestimento protettivo della carta dai fogli acrilici.

Quindi asciugare tutti i materiali per confermare che le dimensioni sono corrette. Quindi, assemblare e caricare la siringa con cemento acrilico. Allineare il bordo lungo di una parete esterna con il bordo superiore della base e assicurarsi che siano perpendicolari l'uno all'altro utilizzando una combinazione o un quadrato macchinista.

Quindi utilizzare la siringa per applicare una piccola e costante perla di cemento direttamente all'angolo dei due pezzi uniti. Tenere i due pezzi in posizione per cinque minuti fino a quando non sono inizialmente impostati. Ripetere gli stessi passaggi per attaccare l'altra parete esterna alla base.

Quindi, attaccare due pareti interne, una alla volta, la base con cemento acrilico. Infine, utilizzare la siringa per applicare una piccola e costante perla di cemento direttamente all'angolo ora formato dalla parete esterna e dalla parete interna. Inizia la sessione di assualazione dividendo i topi in gruppi di quattro e ospitali in singole gabbie di detenzione pulite.

Successivamente, portare un gruppo di topi nella sala prove e consentire loro di acclimatarsi per almeno 30 minuti. Dopo l'acclimatazione, inizia a registrare il video. Posiziona ogni topo nell'arena di fronte alle pareti dell'angolo di rilascio e consenti ai topi di esplorare liberamente le arene per sei minuti.

Quindi, smetti di registrare il video e torna i topi nelle loro gabbie di detenzione pulite durante l'intervallo inter-trial. Pulire tutte le arene con i metodi di pulizia consigliati per la struttura animale, come pulire con 70%etanolo per ridurre al minimo gli spunti olfattivi. Infine, dopo aver completato un totale di tre sessioni di assuazione, riportare tutti i topi nelle loro gabbie di casa.

Dopo 24 ore, portare lo stesso gruppo di topi nella sala prove e consentire loro di acclimatarsi nella sala prove per almeno 30 minuti, come fatto prima delle sessioni di assuazione il giorno precedente. Conduci la prova di allenamento usando due oggetti posizionati nell'arena. Affissi oggetti con nastro a doppia parte a sei per sei centimetri di distanza da due angoli non di rilascio, in modo che siano controbilanciati nell'arena.

Consenti ai topi di indagare liberamente sull'arena e sugli oggetti per 10 minuti. Quindi interrompere la registrazione video. Riposizionare i topi nelle gabbie di detenzione pulite per 20 minuti e pulire le aree con etanolo.

Successivamente, per eseguire l'attività di posizione dell'oggetto OLT, spostare uno degli oggetti utilizzati nella versione di valutazione del training in un nuovo angolo non di rilascio e apporre l'oggetto a sei centimetri da ogni parete di quell'angolo con nastro a doppia parte. Ripetere la stessa registrazione video dei topi nell'area per 10 minuti, come descritto in precedenza. Infine, per eseguire la nuova attività di riconoscimento degli oggetti NORT, sostituire l'oggetto che non è stato spostato durante l'OLT con un oggetto nuovo e apporre il nuovo oggetto a sei centimetri dalle due pareti dell'angolo con nastro a doppia parte.

Ripetere la stessa registrazione video dei topi nell'area per 10 minuti, come descritto in precedenza. Durante l'OLT, la memoria per la posizione dell'oggetto si riflette in un gruppo di mouse che trascorrono, in media, molto più tempo con un oggetto dopo che si è spostato. Ciò può anche essere rappresentato come un aumento dell'indice di discriminazione.

Nel NORT, la memoria per la posizione degli oggetti si riflette in un gruppo di topi che trascorrono, in media, significativamente più del 50% del tempo di indagine con il nuovo oggetto o mostrando un indice di discriminazione significativamente maggiore di zero. Scegliere oggetti per i quali i topi non hanno preferenze intrinseche è fondamentale. Ad esempio, in un test pilota con una dimensione del campione di quattro, i topi hanno mostrato una tendenza a trascorrere meno del 50% del tempo di indagine con l'oggetto A se abbinati all'oggetto B.Quando l'oggetto A è stato quindi utilizzato come nuovo oggetto in un NORT, con una dimensione del campione maggiore di 16, i topi hanno trascorso significativamente meno del 50% del tempo di indagine con l'oggetto A.Questi dati suggeriscono un'avversione intrinseca all'oggetto A.Durante questa procedura , è importante ricordare di pulire accuratamente tutti gli oggetti e le arene tra un uso e l'altro.

In questo metodo, l'indagine sugli oggetti può essere segnata manualmente dai ricercatori o utilizzando software commerciale. Il software ha costi iniziali più elevati ma, una volta calibrato, può far risparmiare tempo e risorse finanziarie a lungo termine.