Name: Studio del cross-talk tra cellule endoteliali adipose e adipociti nel tessuto adiposo sottocutaneo umano (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-05T14:35:00.000+00:00
Duration: 6 min 35 s
Description: Scopri l'isolamento e la caratterizzazione di cellule endoteliali microvascolari dal tessuto adiposo sottocutaneo umano per studiare il cross-talk con gli adipociti nelle malattie cardiometaboliche.

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<meta charset="utf8"></head><body>SATMVEC umane: isolamento e studi cross-talk con gli adipociti

<ol><li>Bierhansl, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+role+of+metabolism+in+endothelial+cell+function+and+vascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology%22%5BJournal%5D)">Central role of metabolism in endothelial cell function and vascular disease.</a> Physiology. 32 (2), 126-140 (2017).</li>
<li>Aird, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Med%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell heterogeneity.</a> Cold Spring Harb Perspect Med. 2 (1), a006429(2012).</li>
<li>Rajendran, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vascular+endothelium+and+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">The vascular endothelium and human diseases.</a> Int J Biol Sci. 9 (10), 1057-1069 (2013).</li>
<li>Brown, O. I., Bridge, K., Kearney, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nicotinamide+adenine+dinucleotide+phosphate+oxidases+in+glucose+homeostasis+and+diabetes-related+endothelial+cell+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidases in glucose homeostasis and diabetes-related endothelial cell dysfunction.</a> Cells. 10 (9), 2315(2021).</li>
<li>Luk, C., Haywood, N. J., Bridge, K. I., Kearney, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paracrine+role+of+the+endothelium+in+metabolic+homeostasis+in+health+and+nutrient+excess%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">Paracrine role of the endothelium in metabolic homeostasis in health and nutrient excess.</a> Front Cardiovasc Med. 26 (9), 882923(2022).</li>
<li>Click-iT EdU Imaging Kits. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2Fmp10338.pdf">https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2Fmp10338.pdf</a> (2024).</li>
<li>Bouïs, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelium+in+vitro%3A+A+review+of+human+vascular+endothelial+cell+lines+for+blood+vessel-related+research%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Endothelium in vitro: A review of human vascular endothelial cell lines for blood vessel-related research.</a> Angiogenesis. 4 (2), 91-102 (2001).</li>
<li>Ades, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HMEC-1%3A+establishment+of+an+immortalized+human+microvascular+endothelial+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">HMEC-1: establishment of an immortalized human microvascular endothelial cell line.</a> J Invest Dermatol. 99 (6), 683-690 (1992).</li>
<li>Chi, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+diversity+revealed+by+global+expression+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell diversity revealed by global expression profiling.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100 (19), 10623-10628 (2003).</li>
<li>Brignole, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((213+ESC+Guidelines+on+cardiac+pacing+and+cardiac+resynchronization+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Heart+J%22%5BJournal%5D)">213 ESC Guidelines on cardiac pacing and cardiac resynchronization therapy.</a> Eur Heart J. 34 (29), 2281-2329 (2013).</li>
<li>Greenspon, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trends+in+permanent+pacemaker+implantation+in+the+United+States+from+1993+to+2009%3A+Increasing+complexity+of+patients+and+procedures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Trends in permanent pacemaker implantation in the United States from 1993 to 2009: Increasing complexity of patients and procedures.</a> J Am Coll Cardiol. 60 (16), 1540-1545 (2012).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Prioritized+Research+Agenda+for+Prevention+and+Control+of+Noncommunicable+Diseases%22">Prioritized Research Agenda for Prevention and Control of Noncommunicable Diseases</a>. Mendis, S. A., Alwan, A. , World Health Organization. Geneva. (2011).</li>
<li>Brown, O. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+among+diabetes%2C+obesity%2C+and+cardiovascular+disease+phenotypes%3A+A+UK+biobank+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Relationship among diabetes, obesity, and cardiovascular disease phenotypes: A UK biobank cohort study.</a> Diabetes Care. 46 (8), 1531-1540 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>170L CO2 Incubatore</td><td>GS Biotech</td><td>170G-014</td><td></td></tr><tr><td>2-NBDG (2-(N-(7-Nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-il)Ammino)-2-Deossiglucosio)</td><td>Invitrogen</td><td>N13195</td><td></td></tr><tr><td>4% PARAFIX fissativo istologico tamponato</td><td>VWR Chemicals</td><td>PRC/R/38/1</td><td></td></tr><tr><td>Akt (tAkt) Coniglio&nbsp; 1:1000</td><td>Tecnologia di segnalazione cellulare</td><td>9272</td><td></td></tr><tr><td>BD Venflon Pro Safety 14 g x 45 mm, Arancione, 50/conf</td><td>Medisave</td><td>393230</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di albumina sierica bovina, 7,5%</td><td>Merck</td><td>A8412-100ML</td><td></td></tr><tr><td>CD144&nbsp;( VE-Caderina) Anticorpo, anti-umano, PE, REAfinity</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-118-495</td><td></td></tr><tr><td>CD31 Anticorpo, anti-umano, PerCP-Vio 700, REAfinity</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-110-811</td><td></td></tr><tr><td>CD31 MicroBead Kit, umano, 1 kit</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-935</td><td></td></tr><tr><td>CD45 Anticorpo, anti-umano, FITC, REAfinity</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-110-769</td><td></td></tr><tr><td>Estrazione cellulare Tampone</td><td>Invitrogen</td><td>FNN0011</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga 5804 R</td><td>Eppendorf</td><td>5805000060</td><td></td></tr><tr><td>Click-iT EdU Kit di proliferazione cellulare per imaging, Alexa Fluor 488 colorante</td><td>Invitrogen</td><td>C10337</td><td>Kit di imaging della proliferazione cellulare</td></tr><tr><td>Collagenasi/Dispasi, 500 mg</td><td>Roche/Merck</td><td>11097113001</td><td></td></tr><tr><td>Corning Matrigel Fattore di crescita ridotto (GFR) Matrice della membrana basale</td><td>Corning&nbsp;</td><td>354230</td><td>Matrice di membrana basale Corning</td></tr><tr><td>100 mm Piatto di coltura trattato</td><td>TC Corning&nbsp;</td><td></td><td></td>430167</tr><tr><td>Costar Piastre a pozzetti multipli trasparenti a 24 pozzetti trattate con TC, confezionate singolarmente, corning sterili</td><td></td><td>3526</td><td></td></tr><tr><td>Costar Piastre a 6 pozzetti trasparenti con trattamento TC a pozzetti multipli, confezionate singolarmente, Corning sterili</td><td></td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>Citometro a flusso laser Citometro Citometro a flusso laser</td><td>Beckman</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kit per la rimozione delle cellule morte</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-101</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&prime; s Soluzione salina tamponata con fosfato</td><td>Merck</td><td>D8537-500ML</td><td></td></tr><tr><td>EASYstrainer Setaccio cellulare per provette da 50 mL, 70 &; m mesh, blu, sterile, confezione da 50/pz</td><td>Greiner Bio-One</td><td>542070</td><td></td></tr><tr><td>Terreno di crescita cellulare endoteliale MV</td><td>PromoCell</td><td>C-22020</td><td></td></tr><tr><td>Micro provette Eppendorf Safe-Lock</td><td>Merck</td><td>EP0030120094</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di acido etilendiamminotetraacetico</td><td>Merck</td><td>E8008-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 24 Piastra di supporto permeabile al polistirene cellulare trattato a 24 pozzetti, con coperchio, Sterile, 1/confezione, 50/caso</td><td>Appleton Woods</td><td>CF537</td><td></td></tr><tr><td>Falcon Supporto permeabile per piastra a 24 pozzetti con 0,4 & micro; m Membrana in PET trasparente, sterile, 1/confezione, 48/confezione</td><td>Appleton Woods</td><td>CF521</td><td></td></tr><tr><td>Mezzo di congelamento Cryo-SFM</td><td>PromoCell</td><td>C-29912</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di gelatina, 2% in acqua</td><td>Merck</td><td>G1393-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Gibco Antibiotico-Antimicotico (100x), 100mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>11570486</td><td></td></tr><tr><td>Gibco TrypLE Select Enzyme (1x), senza rosso fenolo</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td>12563029</tr><tr><td>Hanks&prime; Soluzione salina bilanciata</td><td>Merck</td><td>H6648-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Cellule preadipocitarie sottocutanee umane</td><td>Lonza</td><td>PT-5020</td><td></td></tr><tr><td>Incucita ZOOM</td><td>Essen BioScience</td><td></td><td>Sistema di analisi di cellule vive</td></tr><tr><td>Soluzione di insulina umana</td><td>Merck</td><td>I9278-5ML</td><td></td></tr><tr><td>LS Colonne, 25/conf.</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>MACS MultiStand</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione per la conservazione dei tessuti MACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-100-008</td><td></td></tr><tr><td>Rotatore per provette MACSmix</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-753</td><td>Rotatore per provette</td></tr><tr><td>MS Colonne, 25/conf.</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>NuPAGE 4&ndash; 12% Bis-Tris Gel</td><td>Invitrogen</td><td>NP0322BOX</td><td></td></tr><tr><td>Separatore OctoMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-109</td><td></td></tr><tr><td>PGM-2 Terreno di crescita preadipocitaria-2 BulletKit</td><td>Lonza</td><td>PT-8002</td><td></td></tr><tr><td>Phospho (Ser1177) eNOS Rabbit 1:1000</td><td>Tecnologia di segnalazione cellulare</td><td>9570</td><td></td></tr><tr><td>Phospho-Akt (Ser473) Rabbit&nbsp; 1:1000</td> Tecnologia <td>di</td> <td>segnalazione cellulare4060</td><td></td></tr><tr><td>Filtri di pre-separazione 30 &; micro; m, 50/conf</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-041-407</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione colorante con ioduro di propidio (PI)/RNasi</td><td>Tecnologia di segnalazione cellulare</td><td>4087</td><td></td></tr><tr><td>Separatore QuadroMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-976</td><td></td></tr><tr><td>Bisturi monouso sterile Stile 10</td><td>VWRI</td><td>501</td><td></td></tr><tr><td>Provetta con tappo a vite, 15 ml, (Lx&Oslash;): 120 x 17 mm, PP, con stampa</td><td>Sarstetd</td><td>62.554.502</td><td></td></tr><tr><td>Provetta con tappo a vite, 50 ml, (Lx&Oslash;): 114 x 28 mm, PP, con stampa</td><td>Sarstedt</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>Provetta con tappo a vite, 50 ml, (Lx&Oslash;): 114 x 28 mm, PP, con stampa</td><td>Sarstetd</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>Total eNOS Mouse 1:1000</td><td>BD Biosciences</td><td>610297</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100, BioUltra, per biologia molecolare</td><td>Merck</td><td>93443-500ML</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-actina (C4) Topo 1:5000</td><td>Santa Cruz Biotecnologia</td><td>&nbsp; Codice SC-47778</td><td></td></tr></tbody></table>

studio del cross-talk tra cellule endoteliali adipose e adipociti nel tessuto adiposo sottocutaneo umano

Studying Adipose Endothelial Cell/Adipocyte Cross-Talk in Human Subcutaneous Adipose Tissue

hSATMVEC purezza e fenotipo Le hSATMVEC isolate dai pazienti di controllo (cioè quelle persone senza una storia di malattia cardiometabolica) erano al 99,5% CD31+CD144+CD45- alla citometria a flusso (Figura 2). L'hSATMVEC isolato aveva una morfologia simile a un ciottolo tipica delle EC (Figura 3A). Le hSATMVEC avevano un tempo medio di raddoppio della popolazione di 56,6 ore ± 8,1 ore (SEM medio ±, n = 10) (Figura 3B) e la replicazione attiva del DNA nelle hSATMVEC è stata confermata utilizzando un kit di imaging della proliferazione cellulare (Figura 3C).
hSATMVEC si è comportato come MVEC funzionanti e ha formato tubi in Matrigel (Figura 3D). L'espressione relativa delle proteine chiave coinvolte nella via di segnalazione dell'insulina Akt-eNOS è mostrata nella Figura 3E. Sia gli eO che gli Akt hanno dimostrato un aumento della fosforilazione indotta dall'insulina, rappresentata come il rapporto tra proteina fosforilata/proteina totale normalizzata alla ß-actina (Figura 3E).
Co-coltura hSATMVEC-adipociti Un modello illustrativo della co-coltura hSATMVEC-adipociti può essere visto nella Figura 4A. Man mano che i preadipociti bianchi sottocutanei umani diventano più differenziati, si noterà lo sviluppo di vacuoli lipidici (Figura 4B), che possono essere quantificati mediante colorazione con O rosso olio (Figura 4B).
La Figura 4C mostra il contrasto di fase illustrativo e l'imaging a fluorescenza (eccitazione 440-480 nm/emissione 504-544 nm) di adipociti differenziati dopo 30 minuti di incubazione con glucosio 20 μM 2-NBD. L'assorbimento del glucosio può essere quantificato misurando l'area verde come percentuale dell'area cellulare totale.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66608/66608fig01v2.jpg"> Figura 1: Schema che dimostra la raccolta e la lavorazione degli hSATMVEC <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66608/66608fig01large.jpg" target="_blank">Fare clic qui per visualizzare una versione più ampia di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66608/66608fig02.jpg"> Figura 2: Output tipico dell'analisi in citometria a flusso di hSATMVEC in coltura. (A) Grafico a dispersione dell'area di dispersione laterale (SSC-A) e dell'area di dispersione diretta (FSC-A) che mostra il gating (riquadro rosso) di hSATMVEC in coltura intorno alla densità di popolazione cellulare specifica. (B) Grafico a dispersione della larghezza di dispersione diretta (FSC-Width) e FSC-A che mostra il gating (riquadro rosso) di hSATMVEC in coltura intorno alla specifica densità di popolazione cellulare. (C) Istogramma che mostra la fluorescenza delle cellule gate verso CD45-FITC. (D) Grafico a dispersione dell'intensità di fluorescenza di CD144-PE (asse x) e CD31-PerCP (asse y). (E) Istogramma che mostra la fluorescenza delle cellule gate in CD144-PE. (F) Istogramma che mostra la fluorescenza delle cellule gate verso CD31-PerCP. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66608/66608fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66608/66608fig03.jpg"> Figura 3: fenotipo di hSATMVEC. (A) Immagine al microscopio ottico di hSATMVEC vicino alla confluenza che mostra l'aspetto simile a un ciottolo. (B) hSATMVEC doubling time - Microscopia ottica di HATEC presa a distanza di 24 ore che dimostra l'entità della proliferazione cellulare. (C) Proliferazione di hSATMVEC. Microscopia a fluorescenza di hSATMVEC con ioduro di propidio e EdU/Alexa-fluor 488 da soggetti di controllo. (D) formazione di tubi hSATMVEC da soggetti di controllo (immagini scattate con ingrandimento 4x). (E) Stimolazione insulinica di HATEC - che mostra l'espressione relativa di Akt fosforilata (serina 473) rispetto all'Akt totale (pannello di sinistra) eNOS fosforilato (serina 1177) rispetto all'eNOS totale (pannello di destra) all'aumentare delle concentrazioni di insulina con western blot illustrativi al di sotto di standardizzato a B-actina. I dati sono mostrati come media ± SEM. Le dimensioni del campione sono sotto ogni pannello. Abbreviazioni: 5-etil-2'-deossiuridina (EdU), cellule endoteliali microvascolari del tessuto adiposo sottocutaneo umano (hSATMVEC), errore standard della media (SEM). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66608/66608fig03large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66608/66608fig04.jpg"> Figura 4: Co-coltura hSATMVEC-adipociti. (A) Immagine schematica della co-coltura hSATMVEC-adipociti. (B) Differenziamento degli adipociti. Il pannello di sinistra mostra i preadipociti al giorno 0 e il pannello di destra mostra gli adipociti differenziati del giorno 10 dopo l'aggiunta di PDM. La figura in basso mostra la quantità di lipidi immagazzinati negli adipociti e nei preadipociti colorati con Oil Red O. (C) Saggio di assorbimento del glucosio. Il pannello di sinistra mostra l'imaging di fase degli adipociti dopo co-coltura e incubazione con 20 μM di glucosio 2-NBD per 30 minuti. Il pannello di destra mostra l'imaging verde da cui è possibile quantificare l'assorbimento di glucosio (come % di verde dell'area totale). I dati sono indicati come media ± SEM. Abbreviazioni: Giorno 10 (D10), cellule endoteliali microvascolari sottocutanee del tessuto adiposo umano (hSATMVEC), mezzi di differenziazione preadipocitaria (PDM) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66608/66608fig04large.jpg" target="_blank">Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
Tabella supplementare 1: Cocktail di colorazione per citometria a flusso. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66608/Supplementary%20Table%201.zip" target="_blank">Clicca qui per scaricare questo file.</a>

Studio del cross-talk tra cellule endoteliali adipose e adipociti nel tessuto adiposo sottocutaneo umano

Microvascular endothelial cells (MVECs) have many critical roles, including control of vascular tone, regulation of thrombosis, and angiogenesis. ...

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Il tessuto adiposo (AT) può influenzare l'omeostasi di tutto il corpo, quindi è importante comprendere i meccanismi molecolari della differenziazione e della funzione degli adipociti. Forniamo un protocollo per ottenere nuove informazioni su questi processi analizzando l'omeostasi degli adipociti, la differenziazione e l'esposizione all'ipossia come modello per l'apoptosi indotta degli adipociti.

Meccanismo di regolazione dei numeri adipociti in organismi adulti attraverso la differenziazione e l&#39;apoptosi omeostasi

Qui riportiamo un metodo per l'isolamento delle popolazioni di cellule progenitrici di Adipocyte (APC) da tessuto adiposo perivascolare (PVAT) utilizzando la selezione delle cellule magnetiche (MCS). Questo metodo consente un aumento dell'isolamento di APC per grammo di tessuto adiposo se confrontato con la selezione delle cellule attivate con fluorescenza (FACS).

L&#39;espansione e l&#39;adipogenesi dell&#39;induzione di progenitori adipociti da tessuto adiposo perivascolare isolati da cellule magnetiche attivate

La differenziazione degli adipociti bianchi e beige da progenitori vascolari del tessuto adiposo porta il potenziale di miglioramento metabolico nell'obesità. Descriviamo i protocolli per CD34 + CD31 + isolamento di cellule endoteliali da grasso umano e per una successiva in vitro espansione e differenziazione in adipociti bianchi e beige. Diverse applicazioni a valle sono discussi.

Isolamento, espansione e adipogenico induzione di CD34 + CD31 + cellule endoteliali dal tessuto adiposo umano omentale e sottocutaneo

A causa del contenuto elevato del lipido, tessuto adiposo è stato impegnativo per visualizzare usando i metodi istologici tradizionali. Adipo-Clear è un tessuto tecnica che permette di etichettatura robusto e imaging fluorescente volumetrica ad alta risoluzione del tessuto adiposo di compensazione. Qui, descriviamo i metodi per la preparazione del campione, pretrattamento, colorazione, compensazione e montaggio per l'imaging.

Adipo-Clear: Un tessuto metodo di compensazione per l'Imaging tridimensionale del tessuto adiposo

Descriviamo un sistema 3D di coltura extracellulare extracellulare umana-adipocito in vitro che permette la dissezione dei ruoli della matrice e adipociti nel contribuire al fenotipo metabolico del tessuto adiposo.

Un modello di coltura a matrice extracellulare extracellulare -adipocyte umano per lo studio del crosstalk metabolico a matrice

Vi presentiamo un protocollo per l'isolamento, la coltura e l'induzione adipogenica delle cellule staminali derivate dalla cresta neurale derivate da cellule staminali derivate da adiposo (NCADSC) dal tessuto adiposo periaortico del Wnt-1Cre Topi Rosa26RFP/z. Le NCADSC possono essere una fonte facilmente accessibile di ADSC per la modellazione dell'adipogenesi o della lipogenesi in vitro.

Isolamento, cultura e induzione adipogenica di cellule staminali adipose originali adipose-derivate da cellule staminali periaortiche

Questo protocollo descrive l'approccio tecnico per isolare sottopopolazioni di cellule stromali adipogeniche e fibro-infiammatorie da depositi di tessuto adiposo bianco (WAT) murino intra-addominale mediante smistamento cellulare attivato dalla fluorescenza o separazione di microsfere immunomagnetiche.

Isolamento di sottopopolazioni di cellule stromali adipogeniche e fibro-infiammatorie da depositi adiposi intra-addominali murini

Questo protocollo fornisce un metodo efficiente di digestione della collagenasi per l'isolamento di adipociti vitali e cellule di frazione vascolare stromale-SVF dal grasso viscerale umano in un unico processo, compresa la metodologia per ottenere RNA di alta qualità dagli adipociti e la fenotipizzazione dei macrofagi SVF attraverso la colorazione di più marcatori legati alla membrana per l'analisi mediante citometria a flusso.

Isolamento di adipociti vitali e frazione vascolare stromale dal tessuto adiposo viscerale umano adatto per l'analisi dell'RNA e la fenotipizzazione dei macrofagi

Il manoscritto e il video associato dimostrano una tecnica di biopsia percutanea per ottenere campioni di tessuto adiposo sottocutaneo dalle aree circostanti l'ombelico. Questo metodo è un modo a basso rischio ed efficiente per studiare una serie di parametri (ad esempio, espressione genica o proteica, attività enzimatica, contenuto lipidico) all'interno del tessuto adiposo.

Campionamento del tessuto adiposo sottocutaneo umano utilizzando una tecnica di mini-liposuzione

Questo protocollo descrive l'isolamento semi-automatico della frazione vascolare stromale (SVF) dal tessuto adiposo murino per ottenere preadipociti e ottenere la differenziazione degli adipociti in vitro. L'uso di un dissociatore tissutale per la digestione della collagenasi riduce la variazione sperimentale e aumenta la riproducibilità.

Isolamento semi-automatico della frazione vascolare stromale dal tessuto adiposo bianco murino mediante un dissociatore tissutale

Scopri l'isolamento e la caratterizzazione di cellule endoteliali microvascolari dal tessuto adiposo sottocutaneo umano per studiare il cross-talk con gli adipociti nelle malattie cardiometaboliche.

Studio del cross-talk tra cellule endoteliali adipose e adipociti nel tessuto adiposo sottocutaneo umano

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