Un modello di pancreatite cronica ostruttiva stabilito attraverso l'elettrocoagulazione

Il presente protocollo descrive un nuovo approccio alla modellazione della pancreatite cronica ostruttiva, che prevede la visualizzazione del dotto pancreatico e l'elettrocoagulazione del dotto pancreatico per causare l'ostruzione del dotto pancreatico.

Esistono molti metodi per costruire modelli animali di pancreatite cronica, tra cui l'iniezione intraperitoneale di sodio e la legatura del dotto pancreatico, che hanno i loro limiti. Il nostro team ha recentemente sviluppato un nuovo modello di elettrocoagulazione della pancreatite cronica nei topi, che ha il vantaggio di non richiedere farmaci a iniezione lunga o un metodo difficile da padroneggiare. E possono facilmente stabilire un modello di pancreatite cronica.

L'uso della coagulazione elettrica per indurre la pancreatite cronica nei topi fornisce un modello più conveniente e sperimentale, offrendo una strada promettente per la ricerca futura in questo campo. Per iniziare, posizionare il mouse anestetizzato su un termoforo per mantenere la temperatura corporea. Usando un rifinitore, radere i peli tra il petto e il basso addome.

Successivamente, usa le forbici per praticare un'incisione lunga due centimetri nell'addome centrale, seguita da un'incisione di un centimetro tra la parte superiore dell'addome e il processo xifoideo. Utilizzare un espansore addominale per localizzare l'area del pancreas per l'elettrocoagulazione. Utilizzando un batuffolo di cotone sterile, identificare il duodeno dalla parte posteriore della parte superiore sinistra dell'addome e ruotarlo per visualizzare il dotto biliare che collega il fegato.

Occludere temporaneamente il dotto biliare comune prossimale utilizzando una clip microvascolare per prevenire l'infusione retrograda nel fegato. Collegare il tubo in polietilene da 0,25 x 0,35 millimetri a un ago da 0,25 millimetri e perforare l'area circostante l'ampolla, puntando alla grande papilla duodenale. Inserire il tubo nella papilla e passarlo a metà nel dotto biliare, quindi fermare l'ingresso.

Avviare la pompa per infusione e infondere una soluzione di blu di metilene allo 0,2% fino a quando il dotto pancreatico diventa blu. Dopo l'infusione, estrarre il tubo di polietilene e rimuovere la clip microvascolare. Utilizzare tamponi di cotone sterili per fissare il pancreas e dirigere il coltello per elettrocoagulazione verso l'area di colore blu.

Dopo aver impostato i parametri operativi dell'elettrocoagulazione, utilizzare rame puro come materiale dell'elettrodo e applicare il trattamento al pancreas per due o tre secondi evitando i vasi sanguigni. Continuare l'elettrocoagulazione fino a quando la regione colorata di blu di metilene cambia colore in giallo o marrone. Quando la soluzione colorante blu non è più visibile nel pancreas, interrompere l'elettrocoagulazione.

Dopo l'intervento, posizionare il topo in una scatola di polietilene rivestita con materiale da lettiera. Dopo l'elettrocoagulazione del dotto pancreatico, anestetizzare il topo e posizionarlo su una piattaforma operativa. Per raccogliere il sangue attraverso il plesso orbitale, tenere delicatamente la pelle sul retro per creare una leggera sporgenza del bulbo oculare.

Quindi, posizionare l'estremità di un tubo capillare nell'angolo dell'occhio e inserirlo delicatamente sotto il bulbo oculare con un angolo compreso tra 30 e 45 gradi. Ruotare il capillare fino a quando il sangue inizia a fluire. Dopo il prelievo di sangue, chiudere le palpebre applicando una leggera pressione con una garza.

Centrifugare il sangue a 1,200 g per 15 minuti e raccogliere il surnatante in una nuova provetta. Misurare l'amilasi, la bilirubina e l'acido ialuronico utilizzando i kit disponibili in commercio, seguendo le raccomandazioni del produttore. Quindi, posiziona il mouse soppresso sul tavolo operatorio impostato a quattro gradi Celsius.

Usando forbici e pinze, praticare un'incisione a V nella parete addominale per esporre la cavità addominale. Rimuovere il pancreas e dividerlo in tre parti per la colorazione. Fissare il pancreas in una soluzione di poliformaldeide al 4%, quindi incorporare il pancreas fissato nella paraffina per il sezionamento.

Tagliare i blocchi di paraffina in sezioni spesse 0,5 millimetri e colorarli con ematossilina ed eosina, nonché con la colorazione di Masson per l'analisi immunoistochimica. Osservare il tessuto pancreatico colorato al microscopio ottico. La colorazione con ematossilina-eosina ha mostrato cellule acinose pancreatiche sparse e evidenza di pancreatite cronica nel gruppo di elettrocoagulazione al giorno 14.

Il giorno 28 sono stati osservati segni di recupero tissutale e inversione della patologia nelle cellule acinose pancreatiche. La colorazione di Masson ha rivelato una fibrosi significativamente maggiore nel gruppo di elettrocoagulazione rispetto al gruppo sham. La colorazione immunoistochimica ha mostrato elevati livelli di alfa uno, collagene di tipo uno e alfa actina della muscolatura liscia nel gruppo di elettrocoagulazione, indicando un grado più elevato di pancreatite cronica.

I livelli di acido ialuronico sono aumentati nel gruppo elettrocoagulante, raggiungendo il picco intorno al giorno 21, mentre sono rimasti stabili nel gruppo fittizio. I livelli di bilirubina sono aumentati significativamente entro il giorno 14 nel gruppo di elettrocoagulazione, mostrando un picco intorno al giorno 21, mentre il gruppo fittizio non ha mostrato cambiamenti. I livelli di amilasi nel gruppo di elettrocoagulazione hanno raggiunto un picco il giorno 14, seguito da un calo entro il giorno 28, con il gruppo fittizio che ha mostrato poche variazioni.