Modello di topo per il trapianto di Pancreas usando una tecnica modificata polsino

Mi chiamo Benno Cardini e lavoro presso il Laboratorio di Ricerca Daniel Swarovski del Dipartimento di Chirurgia Viscerale, dei Trapianti e Toracica dell'Università di Medicina di Innsbruck. Oggi vi mostreremo un modello murino per il trapianto di pancreas utilizzando una tecnica di cuffia modificata. Anestetizzare l'animale donatore con un'iniezione intraperitoneale di ketamina e xilazina e radere la regione addominale.

Quindi posizionare il ricevente su un campo operatorio in posizione supina e strofinare la regione chirurgica tre volte con clorexidina. Ora, eseguire una laparotomia della linea mediana dalla regione pubica allo xifoide e allargare l'incisione sottocostale su entrambi i lati per ottenere una migliore visione del campo operatorio. Quindi esteriorizzare i visceri sul lato sinistro e iniettare eparina nella vena cava infrarenale.

Nella fase successiva, identificare l'aorta addominale prossimale all'incrocio della vena renale sinistra, minare l'aorta e legarla in quel punto. Ora, passa all'ilo epatico, identifica e seziona il dotto biliare comune vicino al fegato e legalo vicino al pancreas. Infine, sezionare il dotto biliare comune sopra la legatura.

Quindi, sezionare la vena porta vicino al fegato per ottenere una lunghezza sufficiente per un'anastomosi venosa. Come suggerimento, lasciare un piccolo pezzo di fegato sulla vena porta per una successiva più facile identificazione. Successivamente, minare la vena renale sinistra nel tessuto periaortico e legarla.

Quindi sezionare la vena renale e il tessuto periaortico, rimanendo sul lato destro della legatura. Successivamente, sezionare senza mezzi termini l'aorta addominale dal tronco celiaco al diaframma, minare l'aorta vicino al diaframma e sezionarla in quel punto. Successivamente, identifica e coagula tutti i rami lombari e sezionali.

Ora seziona l'aorta sotto la legatura precedentemente impostata. Ora perfondere il pancreas attraverso il cerotto aortico con una soluzione di perfusione ghiacciata fino a quando non si vede l'effluente uscire dalla vena porta. In alto si può vedere la vena porta perfusa e sotto l'aorta perfusa.

Ora riposizionare i visceri nella cavità peritoneale e separare gradualmente il pancreas dall'intestino usando 8-0 legature di seta. Partendo dalla regione postpilorica minare due volte il duodeno e tirare 8-0 legatura di seta attraverso di esso. Quindi legarlo e separare nettamente il pancreas dal duodeno.

Questo approccio viene eseguito ripetutamente fino a raggiungere il legamento di Treitz. È fondamentale non danneggiare il duodeno poiché escluderebbe l'innesto dagli esperimenti a causa di possibili contaminazioni. Dopo che il pancreas è stato completamente separato dal duodeno, passare al mesenterio, minarlo e legarlo e poi sezionarlo.

In analogia con i passaggi precedenti, separare il pancreas dal colon trasverso minandolo, legandolo e infine sezionandolo. Ora, utilizzando lo stesso approccio, separare il pancreas dalla regione biliare sezionandolo bruscamente dopo la legatura. Successivamente, sezionare senza mezzi termini il pancreas dallo stomaco.

Identificare l'arteria gastrica sinistra, legarla e sezionarla. Alla fine, rimuovere il pancreas con la milza attaccata e metterlo in una soluzione di riperfusione ghiacciata fino a nuovo impianto. Usa la milza come maniglia.

In analogia con il donatore, anestetizzare l'animale ricevente con un'iniezione intraperitoneale di ketamina e xilazina e radere la regione cervicale. Successivamente, mettere l'animale donatore sul campo operatorio in posizione supina e strofinare tre volte la regione cervicale con clorexidina. Successivamente, eseguire un'incisione cutanea dall'incisione giugulare all'angolo mandibolare destro.

Successivamente, identificare tutti i rami laterali della vena giugulare esterna destra, mobilizzarli, minarli e dividerli dopo la coagulazione bipolare. Successivamente, afferrare il polo inferiore della ghiandola sottomandibolare destra, sollevarla cranialmente e sezionarla dopo la coagulazione bipolare dei suoi vasi di alimentazione. Ora sezionare tutti i rami mediali della vena giugulare esterna destra dopo la coagulazione bipolare.

Legare la vena giugulare esterna due volte il più cranialmente possibile e dividerla tra le legature. Passare l'estremità prossimale della vena giugulare esterna attraverso una cuffia in polietilene. Qui è importante che l'impugnatura del bracciale sia rivolta verso il chirurgo che opera.

Come passaggio successivo, posizionare il clamp venoso microvascolare proveniente dal lato laterale. Ora inumidisci la vena con eparina, rimuovi la legatura e tira delicatamente la vena sopra la cuffia in polietilene. Alla fine, fissare la vena sopra il bracciale con un 8-0 circolare Legatura in seta con un nodo sul retro e tre davanti.

Per accedere all'arteria carotide comune destra, mobilizzare e sezionare il muscolo sternocleidomastoideo destro dopo la coagulazione prossimale e distale. Successivamente, mobilizzare delicatamente l'arteria carotide comune, facendo attenzione a non danneggiare le strutture adiacenti come il nervo vagale. In analogia con la vena, legare l'arteria carotide comune due volte, il più cranialmente possibile, e dividerla tra le legature.

Ora passare il vaso attraverso la cuffia arteriosa. Infine, fissare la cuffia arteriosa con il morsetto microvascolare, proveniente dal lato mediale. Quindi, rimuovere la legatura e allargare il lume dell'arteria utilizzando dilatatori vascolari.

Dopo un sufficiente allargamento del lume, tirare l'arteria sopra la cuffia arteriosa. Alla fine, in analogia con la vena, fissare l'arteria con l'8-0 legatura in seta. Qui puoi vedere la vena e l'arteria riparate per l'anastomosi venosa arteriosa.

Per l'impianto, posizionare l'innesto su un Ace inumidito nella regione cervicale. Quindi, tira la vena portale attraverso un 8-0 Anello di legatura in seta, accorciare la vena per un'anastomosi senza tensione e quindi tirare la vena porta sopra la cuffia venosa. Infine, fissare la vena con un 8-0 circolare legatura in seta.

In analogia con la vena, far passare il moncone aortico attraverso un'ansa di legatura e accorciare l'aorta. Quindi, tirare l'aorta sopra la cuffia arteriosa e infine fissarla con un 8-0 circolare legatura in seta. Prima della riperfusione, identificare i vasi splenici e legarli e infine sezionarli bruscamente e rimuovere la milza.

Per la riperfusione, rimuovere prima il morsetto venoso, seguito dal morsetto arterioso. Un'adeguata riperfusione dell'innesto mostra una pulsazione visibile dell'arteria e un colore rosato di tutto l'innesto. Inumidire l'innesto con soluzione salina normotermica.

Prima della chiusura della ferita, rimuovere l'impugnatura della cuffia venosa per evitare l'attorcigliamento del vaso. Al termine, chiudere la ferita con sutura 6-0 in esecuzione e iniettare 0,5 millilitri di soluzione fisiologica normotermica per via sottocutanea. Per convalidare il modello, abbiamo testato la funzione endocrina del pancreas trapiantato.

I topi sono stati resi ipoglicemici dal pretrattamento con streptozotocina quattro giorni prima dell'intervento chirurgico e sono stati considerati ipoglicemici se i livelli di glucosio nel sangue erano superiori a 300 milligrammi percentuali. Questa linea mostra i livelli di glucosio nel sangue di topi di controllo vivi non trapiantati in rosso, così come di riceventi di innesti non esposti a un tempo di ischemia fredda prolungata in blu. Inoltre, i livelli di glucosio nel sangue dei riceventi di innesti pancreatici esposti a 16 ore di ischemia fredda sono mostrati in verde.

I topi vivi sono rimasti ipoglicemici per tutto il periodo di osservazione. Al contrario, il trapianto di innesti pancreatici non esposti a un tempo prolungato di ischemia fredda ha portato a una glicemia normale entro 24 ore, confermando la funzione endocrina del trapianto. Il trapianto di innesti esposti a 16 ore di ischemia a freddo non ha ripristinato la normale glicemia nei riceventi.

Inoltre, in questo gruppo tutti i topi dovevano essere sacrificati entro 48 ore a causa del danno precoce del trapianto associato a lesioni da riperfusione ischemia. In questo video abbiamo presentato un metodo per il trapianto di pancreas nei topi utilizzando una tecnica di cuffia senza sutura. Questo è tecnicamente e microchirurgicamente fattibile con eccellenti percentuali di successo.

Tuttavia, data la progressiva fibrosi del pancreas, dovuta all'occlusione del dotto, è nostra opinione che questo modello sia più adatto per le aree di ricerca che si concentrano sul danno da trapianto associato a lesioni da riperfusione da ischemia precoce