Name: Procedure per lidentificazione Infettive prioni dopo il passaggio attraverso lapparato digerente di una specie aviaria (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-06T21:30:00.000+00:00
Duration: 12 min
Description: Scopri come identificare prioni infettivi dopo il passaggio attraverso l'apparato digerente di Corvus brachyrhynchos. Questo metodo utilizza gavaggio, raccolta fecale e bioassaggio murino con western blot per verificare la trasmissione.

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Vorremmo ringraziare S. Werner per fornire i corvi utilizzati in questo studio e USDA, APHIS, WS, NWRC personale cura degli animali per la cura degli animali e monitoraggio. Menzione o l&#39;uso di un prodotto non implica l&#39;approvazione USDA. Finanziamento per questo studio è stato fornito da USDA, APHIS, servizi veterinari.

Il nostro protocollo è adattato da quello che abbiamo già pubblicato 7. Tutte le procedure che coinvolgono gli animali sono stati approvati dal Comitato Istituzionale cura degli animali ed uso del Dipartimento dell&#39;Agricoltura degli Stati Uniti (USDA), animale e vegetale servizio di ispezione sanitaria (APHIS), Wildlife Services (WS), National Wildlife Research Center (NWRC). 1. Crow Gavaging <ol><li> Stima tempo di passaggio di &#39;materiale cerebrale pseudo&#39; attraverso il tratto alimentare di corvi americani. <ol><li> Mescolare 5 ml di cotte e strapazzate uovo intero con il colorante blu e sonda gastrica 1 corvo con un 2 a gavage ago (Figura 1). </li><li> Controllare corvo ogni 30 minuti fino a quando / feci verde macchiato di blu non sono più escreti. </li></ol></li><li> Ottenere RML (ceppo Chandler)-infetti C57BL / 6 cervelli infetti e malati terminali mouse. </li><li> Generare un 20% di peso / volume normale e infetto omogeneizzato mouse cervello in un omogeneizzatore proiettile frullatore con 1xtampone fosfato salino (PBS), e perle di vetro, poi centrifugare a 3000 xg per 1 minuto per rimuovere le particelle più grandi. Rimuovere il surnatante e diluire con un volume uguale di PBS 1x per generare un 10% peso / volume in PBS sterile. Congelare a -80 ° C fino al momento dell&#39;uso. </li><li> 17 ore prima del gavage rimuovere il cibo, ma non l&#39;acqua, da penne d&#39;aria. </li><li> Casualmente destinare corvi ai gruppi di trattamento e per via orale sonda gastrica ogni corvo con 5 ml di normale o infetto omogeneizzato cervello di topo con un 2 in gavage ago. </li><li> Trasferimento corvi di gabbie individuali e di raccogliere tutta feci all&#39;interno di ogni gabbia per 4 ore dopo gavage (Figura 2). </li><li> Omogeneizzare feci pool per ogni corvo in un omogeneizzatore proiettile frullatore con perle di vetro fino ad ottenere una consistenza omogenea. * Feci gallina sono più liquidi e possono essere mescolati facilmente. </li><li> Per ogni corvo, diluire 500 ml di omogenato fecale in 9,5 ml di PBS 1x per un volume totale di 10 ml. </li><li> Centrifugare la homogena fecaleTE per 15 min a 1400 xg ed estrarre il surnatante. </li><li> Per minimizzare il rischio di una infezione microbica secondaria, trattare surnatante con 1 ml di 100 unità / ml di penicillina e 100 pg / ml streptomicina (Invitrogen, NY) per 100 ml di omogenato poi posto sotto luce UV a temperatura ambiente per 20 min per ridurre rischio di contaminazione virale e batterica. Dopo l&#39;esposizione ai raggi UV, i campioni Sonicare in un Mp sonicatore 3000 a creare 70 per 30 secondi per distruggere la membrana di eventuali microbi rimanenti. </li></ol> 2. Topo inoculazione <ol><li> Casualmente destinare topi per i seguenti gruppi di trattamento (Tabella 1): <ol><li> Gruppo 1 - topi trattamento positivo inoculati per via intraperitoneale (IP) di 1 ml di omogenato fecale da corvi oralmente gavaged con 5ml infettato cervelli del mouse. </li><li> Gruppo 2 - Negativo topi inoculati trattamento IP con 1 ml di omogenato fecale da corvi oralmente gavaged con 5ml normali cervelli del mouse. </li><li> Diluire infected e normale omogeneizzato cervello di topo per i gruppi 3 e 4 a 1:100 w / v in PBS 1x. </li><li> Gruppo 3 - topi di controllo positivi inoculato IP con 1 ml di omogenato infetto topo-cervello. </li><li> Gruppo 4 - Negativo topi di controllo inoculati IP con 1 ml di omogenato normale mouse del cervello. </li></ol></li></ol><table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Gruppo di trattamento </td><td> Numero di animali </td></tr><tr><td> Gruppo 1 </td><td> Scrapie + Crow Feci </td><td> 100 </td></tr><tr><td> Gruppo 2 </td><td> Scrapie - Crow Feci </td><td> 25 </td></tr><tr><td> Gruppo 3 </td><td> Cervello Scrapie + mouse </td><td> 10 </td></tr><tr><td> Gruppo 4 </td><td> Scrapie - cervello di topo </td><td> 5 </td></tr></tbody></table> . Tabella 1 Stato Scrapie di inoculo (+ positivo, negativo -) e il numero di animali utilizzati 7. <ol start="2"><li> Intraperitoneale inoculare il mouse: <ol><li> Scruff mouse dorsale collo di pelliccia con il pollice e l&#39;indice e delicatamente ruotare per esporre lato ventrale. </li><li> Elevare estremità posteriore del mouse in modo testa è leggermente inferiore. </li><li> Inserire 25 ago G 1 centimetro attraverso la pelle, 1 centimetro laterale della linea mediana, e di 1-2 cm anteriormente alla sacroiliaca usando una siringa-ago di bloccaggio. </li><li> Iniettare 1 ml trapiantare lentamente nel topo cavità del corpo. </li></ol></li></ol> 3. Monitoraggio mouse <ol><li> Controllo topi ogni giorno fino esprimono segni clinici di topo scrapie. I segni clinici possono includere: cifosi, atassia, coda rigida, la mancanza di governare, deperimento, e letargia. </li><li> Punteggio topi per ognuno dei 6 segni clinici quando segni visibili sono evidenti, in cui 0 = nessuna visibile, 1 = moderato, e 2 = grave. </li><li> Eutanasia topi quando punteggi totali giornalieri per ogni segno raggiungere ≥ 8 per 1 giorno, ≥ 6 ininterrottamente per 3 giorni, oa 365 giorni dopo l&#39;inoculazione (dpi). </li><li> Cervelli raccolto subito dopo euthanasia e conservare a -70 ° C. </li><li> Per confermare una diagnosi di scrapie, digerire campioni di cervello con 3 ml di un 50 mg / ml di soluzione di proteinasi-K (PK) diluito come segue: 3.1. microlitri PK, 12.5 ml di EDTA 500 mM, pH 8, 109.39 ml di PBS 1x per 30 min a 45 ° C, poi inattivare il PK aggiungendo 8 microlitri tampone di caricamento e incubando i campioni a 95 ° C per 5 min. Campioni caricare su un 12% SDS-PAGE gel, elettroforesi e trasferimento su membrana di PVDF e Immobilon blocco con 5% di latte scremato in 0,2% di Tween 20 in PBS per 1 ora a temperatura ambiente. Poi sonda con Bar224 anti-PrP anticorpo monoclonale coniugato con perossidasi di rafano, diluita in Superblocco, per 1 ora a temperatura ambiente. Risciacquare membrana per 1 ora con PBS-0.2% Tween 20. Per visualizzare, incubare Western Blot 5 minuti con il substrato chemiluminescente e immagine su un sistema di documentazione gel G-box. </li></ol>

<ol><li>Prusiner, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+proteinaceous+infectious+particles+cause+scrapie%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Novel proteinaceous infectious particles cause scrapie.</a> Science. 216 (4542), 136-144 (1982).</li>
<li>Miller, M. W., Williams, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epizootiology+of+chronic+wasting+disease+in+free-ranging+cervids+in+Colorado+and+Wyoming%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Epizootiology of chronic wasting disease in free-ranging cervids in Colorado and Wyoming.</a> Journal of Wildlife Diseases. 36 (4), 676-690 (2000).</li>
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<li>Scherbel, C., Pichner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degradation+of+scrapie+associated+prion+protein+%28PrPSc%29+by+the+gastrointestinal+microbiota+of+cattle%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Degradation of scrapie associated prion protein (PrPSc) by the gastrointestinal microbiota of cattle.</a> Veterinary Research. 37 (5), 695-703 (2006).</li>
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<li>Mathiason, C. K., Nalls, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Susceptibility+of+domestic+cats+to+chronic+wasting+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Susceptibility of domestic cats to chronic wasting disease.</a> Journal of Virology. 87 (4), 1947-1956 (2013).</li>
<li>Bjorndal, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flexibility+of+digestive+responses+in+two+generalist+herbivores%2C+the+tortoises+Geochelone+carbonaria+and+Geochelone+denticulate%5BTitle%5D)+AND+%22Oecologia%22%5BJournal%5D)">Flexibility of digestive responses in two generalist herbivores, the tortoises Geochelone carbonaria and Geochelone denticulate.</a> Oecologia. 78 (3), 317-321 (1989).</li>
<li>Clark, R. G., Gentle, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimates+of+grain+passage+time+in+captive+mallards%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+Zoology%22%5BJournal%5D)">Estimates of grain passage time in captive mallards.</a> Canadian Journal of Zoology. 68 (11), 2275-2279 (1990).</li>
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<li>Pulford, B., Spraker, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+PrPCWD+in+feces+from+naturally+exposed+Rocky+Mountain+elk+%28Cervus+elaphus+nelsoni%29+using+protein+misfolding+cyclic+amplification%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Detection of PrPCWD in feces from naturally exposed Rocky Mountain elk (Cervus elaphus nelsoni) using protein misfolding cyclic amplification.</a> Journal of Wildlife Diseases. 48 (2), 425-433 (2012).</li>
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<li>Aldous, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Winter+habits+of+crows+in+Oklahoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Management%22%5BJournal%5D)">Winter habits of crows in Oklahoma.</a> Journal of Wildlife Management. 73 (4), 290-295 (1944).</li>
</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Dimostriamo una procedura per documentare il passaggio del materiale PrP Res attraverso il sistema digestivo di corvi. Abbiamo usato metodi convenzionali per determinare se i corvi hanno la possibilità di traslocare il materiale PrP Res per aree geografiche indenni. Altri hanno valutato la resistenza di PrP Res ai ruminanti 19-21 e roditori 22,23 fluidi digestivi, entrambi i quali non è riuscito a eliminarlo. La futura applicazione di queste tecniche dovrebbe essere...

Encefalopatie spongiformi trasmissibili (TSE) sono fatali disturbi infettivi neurodegenerative che colpiscono la fauna selvatica, animali domestici, e gli esseri umani. L&#39;agente infettivo delle malattie TSE sembra essere isoforme mal ripiegate o patogeni (PrP Res) di proteine ​​prioniche 1. Malattie TSE animale includono sindrome del dimagrimento cronico (CWD) in cervo mulo (Odocoileus hemionus), cervi dalla coda bianca (Odocoileus virginianus), alce (Cervus elaphus), e alce (Alces alces); scrapie in ovini e caprini; encefalopatia spongiforme bovina ( BSE) nel bestiame domestico; encefalopatia visone in visone d&#39;allevamento; encefalopatia spongiforme felina nei gatti; esotico encefalopatia spongiforme ungulati in zoo esotico rumina della famiglia dei bovidi, e l&#39;encefalopatia spongiforme nei primati non umani 8. Il singolo malattia TSE umana, malattia di Creutzfeldt-Jakob variante è rara e pensato per essere acquisita da consumare PrP Res-Contamincibo ated 9. Allo stesso modo, la BSE può infettare l&#39;uomo se manzo contaminato è consumato 10. Di tutte le malattie TSE, scrapie e CWD sono gli unici due con epidemie autosufficienti e fonti per l&#39;infezione si presume essere da animale ad animale 2,3,11 così come da fonti ambientali 4-6. La ricerca suggerisce che la maggior parte delle malattie EST richiedono notevoli tempi di incubazione lunghi di esposizione eventi naturali di PrP Res alla manifestazione dei segni clinici 2-4,6,8 e delle specie apparenti ostacoli minimizzano, ma non eliminano il rischio di trasmissione interspecie 12-14 . Identificare i meccanismi per la diffusione del prione infettivo (PrP Res) materiale è estremamente importante per rispondere alle domande su come le malattie EST muovono attraverso il paesaggio. Indagini sperimentali hanno suggerito che gli insetti 15,16, pollame e suini 17, e corvi americani (Corvus brachyrhynchos) 7,18 sono vettori passivi o dispersori di materiale PrP Res. Passaggio di materiale PrP Res attraverso il sistema digestivo di corvi è stato recentemente documentato, dimostrando il ruolo che possono svolgere in dispersione delle malattie TSE 7. Questi risultati rendono plausibile che i corvi, uno spazzino, potrebbero incontrare, consumano, e trasportano materiale infetto tramite le feci deposizione, in aree indenni. Le procedure dimostriamo qui sono stati usati per documentare il passaggio del materiale PrP Res attraverso il sistema di digestione di corvi e notevolmente facilitare l&#39;applicazione di questi metodi per altri scavenger e modelli carnivoro specie-specifiche in ricerche future correlate. In questo studio sono stati utilizzati i metodi convenzionali per indagare su un mezzo non convenzionali di traffico di materiale PrP Res, che potrebbe contribuire alla diffusione e gravità complessiva della materia PrP Res.

<table><tbody><tr><td>RML Chandler ceppo scrapie adattata al topo</td><td>Rocky Mountain Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>RC57BL/6 topi</td><td>Hilltop Lab Animals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Corvi americani</td><td>catturati</td><td></td><td></td></tr><tr><td>selvatici Pen/Strep</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato</td><td>Invitrogen</td><td>70011-044</td><td></td></tr><tr><td>Sonicator</td><td>Soluzione di proteinasi-K di Misonix</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Roche</td><td>3115887001</td><td></td></tr><tr><td>Tampone di caricamento</td><td>Invitrogen</td><td>NP0007 e 0009</td><td></td></tr><tr><td>Bis-tris SDS PAGE 12% gel</td><td>Invitrogen</td><td>NP0342</td><td></td></tr><tr><td>Membrana Immobilon PVDF</td><td>Millipore</td><td>1SEQ00010</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P2287</td><td></td></tr><tr><td>Bullet omogeneizzatore</td><td>miscelatore Braintree Scientific</td><td>BBX24B</td><td></td></tr><tr><td>2,3 mm Perle di zirconia/silice</td><td>BioSpec Products</td><td>11079125Z</td><td></td></tr><tr><td>Bar224 anticorpo monoclonale anti-PrP</td><td>Cayman Chemical</td><td>10009035</td><td></td></tr><tr><td>Superblock</td><td>Thermo Scientific</td><td>37517</td><td></td></tr><tr><td>substrato chemiluminescente</td><td>Millipore</td><td>WBKLS0500</td><td></td></tr><tr><td>G-box sistema di documentazione su gel</td><td>Syngene</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

procedure per l&#39;identificazione infettive prioni dopo il passaggio attraverso l&#39;apparato digerente di una specie aviaria

Procedures for Identifying Infectious Prions After Passage Through the Digestive System of an Avian Species

Prionica infettiva (PrP Res) materiale è probabile che la causa della fatale, neurodegenerative l&#39;encefalopatia spongiforme trasmissibile (TSE) malattie 1. Trasmissione di malattie TSE, quali sindrome del dimagrimento cronico (CWD), si presume essere da animale ad animale 2,3 così come da fonti ambientali 4-6. Spazzini e carnivori hanno un potenziale di traslocare il materiale PrP Res attraverso il consumo e l&#39;escrezione di carogne CWD contaminati. Studi recenti hanno documentato il passaggio di materiale PrP Res attraverso il sistema digestivo di corvi americani (Corvus brachyrhynchos), un nordamericano tesoro comune 7. Descriviamo procedure utilizzate per documentare il passaggio del materiale PrP Res attraverso corvi americani. Crows sono stati gavaged con RML-ceppo di topi-adattato scrapie e le loro feci sono stati raccolti 4 ore dopo sonda gastrica. Feci Crow sono stati poi riuniti e iniettato per via intraperitoneale inTopi C57BL / 6. I topi sono stati monitorati giornalmente finché non espressi segni clinici di topo scrapie e sono stati successivamente sottoposti a eutanasia. Topi asintomatici sono stati monitorati fino a 365 giorni dopo l&#39;inoculazione. Western blot è stata condotta per confermare lo stato di malattia. I risultati hanno rivelato che i prioni rimangono contagiosi dopo aver viaggiato attraverso il sistema digestivo di corvi e sono presenti nelle feci, causando la malattia nei topi di prova.

Le procedure utilizzate dimostrano che il sistema digestivo dei corvi non elimina PrP Res infettività 4 ore dopo la sonda gastrica di omogenato cerebrale scrapie 7. Tutti i venti corvi che sono stati gavaged con materiale PrP Res successivamente trasmessi materiale PrP Res tramite le feci di topi. Topi malati sono stati identificati dalla manifestazione di segni topo-scrapie clinici e conferma malattia è stata completata da analisi Western Blot. In...

Spazzini hanno un potenziale di traslocare infettive trasmissibili prioni dell&#39;encefalopatia spongiforme nelle loro feci in aree indenni. Abbiamo metodi di dettaglio utilizzati per determinare se i prioni scrapie mouse adattati rimangono contagiosi dopo il passaggio se il tratto digestivo di corvi americani (Corvus brachyrhynchos), un consumatore comune di animali morti.

Procedure per l&#39;identificazione Infettive prioni dopo il passaggio attraverso l&#39;apparato digerente di una specie aviaria

Infectious prion (PrPRes) material is likely the cause of fatal, neurodegenerative transmissible spongiform encephalopathy (TSE) diseases1. Transmission ...

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di documentare il passaggio di materiale infettivo PreOn attraverso l'apparato digerente dei corvi americani. Ciò si ottiene misurando prima i corvi con materiale PreOn infettivo. Il secondo passo consiste nel raccogliere le feci di corvo per quattro ore dopo la sonda e prepararle per l'iniezione nei topi.Successivamente, i topi vengono inoculati per via intraperitoneale con un millilitro di omogenato fecale di corvo. Il passo finale consiste nel monitorare i topi ogni giorno fino a quando non esprimono segni clinici di raschiatura del topo. In definitiva, l'analisi western blot viene utilizzata per confermare la presenza di PreOn infettivo nel modello murino e verificare la trasmissione della malattia.L'idea che i corvi potessero trasportare. CWD è venuto da noi un giorno d'inverno quando, dopo aver guidato verso una struttura di alci in cattività dove stavamo facendo alcune ricerche e vedendo alci uccisi sulla strada nutriti dai corvi, e più tardi quel giorno, corvi che uscivano dal cielo dal nulla, atterrando in queste mangiatoie, nutrendosi proprio accanto all'alce, defecando sul grano che l'alce stava consumando che in cima all

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Immunologia e Infezioni

Qui si descrive un nuovo metodo di analisi per monitorare l'assorbimento del prione e del traffico da parte delle cellule immunitarie subito dopo l'inoculazione intraperitoneale purificando e fluorescente etichettatura aste prioni aggregati da materiale cerebrale infetto allora monitoraggio loro adozione, e il movimento dal sito di iniezione e caratterizzare le cellule che mediano questi eventi.

Monitoraggio Traffico di cellule immunitarie fluorescente Rods prioni ore dopo l&#39;infezione intraperitoneale

Questo studio descrive la diagnosi dell'influenza aviaria nei volatili selvatici utilizzando un portatile rRT-PCR sistema. Il metodo si avvale di liofilizzati reagenti per lo screening degli uccelli selvatici in un non-laboratorio di impostazione, tipica di uno scenario di un'epidemia. L'uso di strumenti molecolari fornisce alternative accurata e sensibile per la diagnosi rapida.

La diagnosi rapida del virus dell&#39;influenza aviaria nei volatili selvatici: l&#39;uso di un Portable rRT-PCR e liofilizzato reagenti nel campo

Un metodo per preservare, rilevare e sequenza di RNA da virus dell'influenza aviaria è stato convalidato ed esteso usando naturale campioni di feci di uccelli. Questa tecnica elimina la necessità di mantenere una catena del freddo e la manipolazione di virus infettivo e può essere applicato in un 96-e high-throughput di setup.

Sorveglianza dell&#39;influenza aviaria con FTA Carte: metodi per i campi, Biosicurezza, e problemi di trasporto Risolto

Source: Brauer, R. et al., Influenza Virus Propagation in Embryonated Chicken Eggs. J. Vis. Exp. (2015)This video demonstrates the synthesis and harvest of the influenza virus in fertilized chicken eggs. The virus is inoculated into the allantoic cavity, where it replicates in epithelial cells and buds into the allantoic fluid, which is then collected and stored for downstream applications.

Propagation and Harvest of Influenza Virus from a Fertilized Chicken Egg

Questo video mostra una tecnica per rilevare la proteina prionica mal ripiegata nelle sezioni cerebrali utilizzando l'immunoistochimica. Dopo aver trattato la sezione cerebrale con acido formico per denaturare i prioni e ridurre al minimo il rischio di infezione, oltre a smascherare gli aggregati prionici utilizzando il recupero degli epitopi indotto dal calore, le sezioni vengono immunomarcate per gli aggregati di proteine prioniche mal ripiegate e osservate al microscopio.

Rilevamento di proteine prioniche anomale nel tessuto cerebrale mediante immunoistochimica

Viene presentato un breve protocollo di esame clinico per aiutare nell'individuazione della scrapie classica e atipica negli ovini e nei caprini.

Protocollo di esame clinico per rilevare la scrapie atipica e classica negli ovini

Misurare la barriera alla trasmissione interspecie delle malattie da prioni è impegnativo e in genere comporta sfide animali o saggi biochimici. Qui, presentiamo un saggio di conversione della proteina prionica in vitro con la capacità di prevedere le barriere di specie.

Valutare l&#39;encefalopatia spongiforme trasmissibile Specie Barriere con un<em&gt; In Vitro</em&gt; Prion Protein Assay Conversion

Qui, presentiamo un protocollo per descrivere una tecnica di amplificazione del prion semplice, veloce ed efficiente, il metodo di conversione indotta da tremare in tempo reale (RT-QuIC).

In tempo reale tremare-indotta conversione analisi per rilevazione di CWD prioni nel materiale fecale

Qui presentiamo un protocollo per creare chirurgicamente 'anse intestinali legati' in intestini di pollo. Questa procedura consente il confronto di virulenza in situ in un singolo host di più ceppi Clostridium perfringens . Questo metodo notevolmente riduce il numero di polli solitamente necessari per simili esperimenti in vivo .

Un modello di ciclo intestinale legati nei polli gratis anestetizzati patogeno specifico per studiare la virulenza di Clostridium Perfringens

L'immunomarcatura della proteina prionica anomala utilizzando protocolli immunoistochimici richiede specifiche metodologie di preparazione di campioni e anticorpi anti-PrP. Il presente protocollo descrive i passaggi chiave del demasking degli epitopi per garantire una corretta etichettatura immunologica della PrP e per ridurre al minimo la colorazione di fondo non specifica. Inoltre, questo approccio considera le misure di biosicurezza quando si conducono studi di immunoistochimica con i...

Rilevazione di proteine prioniche anomale mediante immunoistochimica

Manca un metodo per valutare le aree comunemente utilizzate in laboratorio per la contaminazione da prioni e un'efficace decontaminazione. Il protocollo qui descritto fornisce i fondamenti chiave per l'implementazione di un test di sicurezza con strisciamento di prioni di laboratorio che può essere facilmente modificato per soddisfare le esigenze individuali di laboratori specifici.

Test di strisciamento del laboratorio di sicurezza dei prioni

Scopri come identificare prioni infettivi dopo il passaggio attraverso l'apparato digerente di Corvus brachyrhynchos. Questo metodo utilizza gavaggio, raccolta fecale e bioassaggio murino con western blot per verificare la trasmissione.

Procedure per l'identificazione Infettive prioni dopo il passaggio attraverso l'apparato digerente di una specie aviaria

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