Name: コラーゲンゲル含有する細胞のモジュールを使用してマイクロ組織の作製 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-13T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 28 s
Description: 学ぶコラーゲンゲルモジュールを用いたマイクロ組織作製法。ポリエチレンチューブ内でコラーゲンをゲル化し、2mmに切断して内皮細胞を被覆することで、in vitroアッセイやin vivo組織工学研究に応用可能な機能的マイクロ組織を構築する手法です。

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資金は、国立衛生研究所（EB 001013）、カナダ自然科学工学研究評議会と保健研究のカナダの協会によって提供されていました。私たちは、彼女の専門知識のために博士はAPマクギガンに感謝し、モジュールの開発に役立つ。

1）チューブの調製<ol><li>ポリエチレンチューブの2〜3メートルの長さをカット（0.76ミリメートル内径x 1.22ミリメートルOD）。 </li><li>チューブの一端に20 G1の針を通します。 </li><li>コンバータセルフシールパウチ（7 1 / 2"× 13"）のコイルチューブと場所。チューブの両端は、袋の未舗装の端に置かれ、ガス滅菌のテープでテーピングしてください。 </li><li>シールの袋とガスは滅菌する。 </li></ol>コラーゲンの2）中和注：コラーゲンの1mlは、ポリエチレン管の約2 mを埋めます。 <ol><li> 15 mlコニカルチューブにチューブの所望の長さに必要なコラーゲンの必要量を配置し、氷上に置きます。 </li><li>繰り返しソリューションをピペッティングすることによりチューブとミックスに10倍のα- MEMあたりのmLのコラーゲンの128のULを追加します。注：（1）ソリューションは、酸性化されたコラーゲンにα- MEMのような黄色が混合されている電源を必要と（2）混合時に気泡を最小限にしようとする。 </li><li>コラーゲンは7.4のpHになるまで0.8Mの重炭酸ナトリウムを添加することによりコラーゲンを中和する。黄色のコラーゲン溶液が淡いピンクの色が消えるまで、pHの一般的な見積もりの​​ために重炭酸ナトリウムを加える。注：これは一般的にコラーゲンの各MLあたり30〜60μLを取る。 </li><li>中和コラーゲンとして使用する準備ができるまでゲル4で保たれていない場合になります氷上で中和コラーゲンを維持℃に</li></ol>細胞の3）埋め込み（オプション） 注：細胞を溶解あたり20万個の細胞へのmL当たり100万の間の細胞の濃度で埋め込むことができる細胞の種類にもよります。あなたが埋め込むするセルに必要な培地を使用してください。 <ol><li>細胞から培地を取り除き、5mLのPBSで洗浄する。 </li><li> PBSを削除し、3 mLのトリプシン- EDTAを加える。 </li><li> 37℃で5分間のためにトリプシン- EDTAで細胞をインキュベート</li><li> 7 mLのメディアで細胞を再懸濁します。 </li><li>細胞を数える。 </li><li> 15 mLコニカルチューブに埋め込むための細胞の必要数を転送する。 </li><li> 5分間、300 xgでペレットは、細胞。 </li><li>細胞ペレットから培地を吸引除去する。 </li><li>中和コラーゲンに細胞を再懸濁し、氷上に置きます。 </li></ol> 4）コラーゲンのゲル化は、 <ol><li>生物学的安全キャビネット内でポリエチレンチューブの入った袋の密封端をカット。 </li><li>滅菌ピンセットを用いてチューブの一端に20G針に3 mlの注射器を取り付けます。袋にチューブを保持します。 </li><li>先端が滅菌ピンセットを用いてコニカルチューブの一番下になるまで中和コラーゲンにチューブのもう一方の端を差し込みます。コニカルチューブを氷上で保管してください。 </li><li>シリンジのプランジャーは、徐々に後退によるポリエチレンのチューブにコラーゲンを引き出します。 注：コラーゲンはすぐにその後にチューブに引き込まれている場合、気泡がコラーゲンで形成される。 </li><li>チューブを介してコラーゲンを引っ張っした後、チューブの外20G針を引っ張ると袋に両端を戻す。テープバッグがシャットダウンします。 </li><li> ℃で60分間で37袋をインキュベートする。コラーゲンは細胞が含まれている場合は、毎15分かけて袋を裏返し。その細胞は、モジュールの片側にセトリングしていないこと。 </li></ol> 5）チューブの切断はゲル状になったコラーゲンを含む<ol><li>切削装置とチューブを保持するトレイ用オートクレーブヘッダとブレード。 </li><li>切削装置を組み立てます。 </li><li>場所は、デバイスを切断の前に滅菌トレイのチューブと切断装置にチューブをロードする。 </li><li>カットモジュールを収集する切削装置の出口でメディアの25 mLを含む50mLのコニカルチューブを設定します。 注：モジュールは、メディアのFBSのないチューブから分離しないようにコラーゲンのみのモジュールに対してもFBSを含む使用メディア。モジュールが含まれている場合は細胞が埋め込まれ、細胞に必要なメディアを使用してください。ある場合はモジュール内に組み込まれた細胞は、内皮細胞用培地を使用します。 </li><li>チューブの2mmの長さをカットしてチューブを切断する切断装置を設定します。 </li><li> 37モジュールをカット° 50 mLコニカルチューブに60分間Cをインキュベートする。 </li></ol> 6）チューブからコラーゲンモジュールの取り外し<ol><li> 10秒のためのチューブ内のモジュールを含む渦50 mLコニカルチューブ。 注：破損を避けるために高い細胞密度で埋め込まれたモジュールを分離するときに優しく。 </li><li>モジュールは、チューブの底に沈降してみましょう。約5分かかります。 </li><li>広口10mlの血清学的ピペットを使用すると、15 mLコニカルチューブに決済モジュールを転送する。 </li><li>ステップ6.1から6.3倍を繰り返します。 </li><li>非組織培養処理されたプレートに内皮細胞または転送モジュールとコートのモジュールに、手順7に進みます。 </li></ol> 7）コーティング内皮細胞とモジュール<ol><li>番目のメディアを5 mL、15 mLコニカルチューブの底にモジュールをセトルeは、細胞を埋め込まれた。 </li><li>内皮細胞から培地を取り除き、5mLのPBSで洗浄する。 </li><li> PBSを削除し、3 mLのトリプシン- EDTAを加える。 </li><li> 37℃で5分間のためにトリプシン- EDTAで細胞をインキュベート</li><li> 7 mLのメディアで細胞を再懸濁します。 </li><li>細胞を数える。コニカルチューブの底にパックされたモジュールのmL当たり5 × 10 6内皮細胞を必要とする。 </li><li>ペレットを5 mLの内皮細胞培地中で5分間再懸濁しますため、300 xgで細胞。 </li><li>モジュールに内皮細胞を含む培地を5mLを追加。 注：これは、我々は両方の細胞型の生存と機能のために働くことが判明している2つのメディアタイプの50:50比率を与える。使用にそれを使用する前に、二つの細胞タイプの表現型を適切に管理するように定式化共培養の培地をテストします。 </li><li>静的および動的に内皮細胞でモジュールをインキュベートする。 </li><li>静的インキュベーションミックス反転による内皮細胞とのモジュールと37℃で直立管をセット℃で15分のため。繰り返します。 </li><li>軽く37℃チューブを揺らすことによって動的にシード内皮細胞℃で60分間。 </li><li>二回静的インキュベーションを繰り返します。 </li><li>非組織培養は、治療をプレートにモジュールを配置し、37℃で一晩インキュベート℃、 </li><li>次の日の代わりに新たな非組織培養のモジュールがアタッチされていない内皮細胞を除去するために新鮮な培地（共培養系を用いた場合50:50）にプレートを処理した。 </li><li>彼らがモジュールの表面の100％をカバーするまで、内皮細胞で被覆されているモジュールをインキュベートする。これは通常、約7日かかります。 </li></ol> 8）代表的な結果： 彼らは最初のチューブから削除されたときのモジュールは、円筒形になります。モジュールが組み込まれた細胞および/を含むまたは内皮細胞で被覆されている場合、それらは体積で50％まで収縮し、楕円形（図1）を開発することができます。モジュールはまた、光学顕微鏡（図1）で見たときより高密度とより不透明になります。また、内皮細胞は、モジュールの表面上にコンフルエントのときにVE -カドヘリンの免疫蛍光染色（図2）で見られるタイトジャンクショ​​ンの形成がある。物質移動の解析は、モジュールが不十分な酸素の輸送に起因する壊死性コアを開発することなく、高い細胞密度（8 × 10 7細胞/ cm 3の ） をサポートできることを明らかに大きな組織の中にしばしば問題とされている（大口径の例：モジュール、D = 1.4しましたMM）（図3）。 <img src="/files/ftp_upload/2177/2177fig1.jpg" alt="図1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図1"> 図1：モジュールの製造と収縮。 HUVEC - C（内皮細胞株）シードを後3日中に発生したモジュールの収縮はかなり小さく、モジュールの直径と長さ（P &lt;0.001）（）の結果。埋め込まれたHepG2細胞は一様に、製造時にモジュール内で分配と高い生存率を（B）保持された。 [細胞は緑のライブ、死んだ細胞赤] [コーストフィン2010年から適応] <img src="/files/ftp_upload/2177/2177fig2.jpg" alt="図2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図2"> 図2：モジュールの表面にコーティングされた10日RAEC後のECタイト細胞間結合のVE -カドヘリン免疫蛍光染色。スケールバー= 50μmの。 <img src="/files/ftp_upload/2177/2177fig3.jpg" alt="図3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図3"> 図3：典型的なモジュール（0.76ミリメートル初期直径）と大型モジュールのマッソントリクローム染色（1.4ミリメートル初期直径）は、酸素の拡散の制限の効果を実証。製造後7日間は、死細胞の多数は生存細胞の唯一の薄いリムを（〜200μmの厚さ）を残して、大規模なモジュール（右下のパネル）のコア内に形成していた。逆に、小規模なモジュールは、生きている細胞の均一かつ高いディストリビューションを保持。 [モジュールは、HepG2細胞を包埋し、内皮細胞で被覆された。] [コーストフィン2010年から撮影] <img src="/files/ftp_upload/2177/2177fig4.jpg" alt="図4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図4"> 図4：poloxamine上（A）HMEC - 1シード-コラーゲンのモジュール。 poloxamine -コラーゲンモジュールを播種の1日後に円筒形の形状を保持し、コラーゲンのみモジュールに比べて限定された細胞の添付ファイルのプロパティがあります。スケールバー= 200μmの。 PLGAベースの生分解性ミクロスフェアを含むコラーゲンのモジュールの（B）光顕微鏡像。スケールバー= 500μmの。 <img src="/files/ftp_upload/2177/2177fig5.jpg" alt="図5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図5"> 図5：in vitro試験の例。 （A）血管新生アッセイ：血管内皮細胞を接種したモジュール上の毛細血管のような岩は、簡単に脂肪由来幹細胞とのインキュベーションの5日後に検出および定量することができる。 （B）のモジュール上でライブ/デッドアッセイの共焦点顕微鏡画像生きている細胞のために泰寧は緑であり、死んだ細胞のために赤いです。 <img src="/files/ftp_upload/2177/2177fig6.jpg" alt="図6" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図6"> 図6：埋め込 ​​まれた間葉系幹細胞と内皮細胞の表面層を含むコラーゲンモジュール。モジュールは、マイクロ流体室で7日間せん断応力（〜0.64 DYN / cm 2）のために暴露し、接触点での融合を示し始めるれた。内皮細胞は、vWFを（茶色）で染色し、間葉系幹細胞核は青色（H＆E）が表示されている。スケールバー=100μmの。 <img src="/files/ftp_upload/2177/2177fig7.jpg" alt="図7" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図7"> 図7：脂肪由来幹細胞（ASC）およびヒト微小血管内皮細胞で被覆されたを含むコラーゲンのモジュールの何百もの（HMEC）脂肪再生アプリケーションのためのin vivoでの ASC / HMEC相互作用を研究するためにマウスの皮膚の下に注入される。

<ol><li>Chamberlain, M. D., Gupta, R., Sefton, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimeric+vessel+tissue+engineering+driven+by+endothelialized+modules%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Chimeric vessel tissue engineering driven by endothelialized modules.</a> , (2010).</li>
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</ol>

利害の衝突は宣言されません。

我々は、異なる種類の細胞1月11日に埋め込 ​​まれたモジュールを使用していくつかの異なるミクロ組織を作製した。我々は成功し、主心筋細胞、膵島、脂肪幹細胞と間葉系幹細胞と同様にしたHepG2、NIH 3T3およびクローン9肝臓の細胞を含むいくつかの細胞株が組み込まれています。我々は、ラット大動脈内皮細胞、ヒト臍帯静脈内皮細胞とヒト微小血管内皮細胞を含む内皮細胞のいくつかのタイプのモジュールをコーティングしている。モジュールはまた、コラーゲンとpoloxamineポリマーまたはミクロスフェア（図4）溶出を含む薬剤の混合物で製造されてきた。 in vitroアッセイのいくつかは、免疫蛍光、ウェスタンブロット、血管新生、アラマーブル増殖とLIVE / DEADアッセイ（図5）を含むモジュールと互換性があることが示されている。彼らはまた、マイクロ流体チャンバ内で使用する（図6）と、マウスやラットに移植（図7）異なる種類の細胞間の相互作用を研究する方法と、ミクロ組織のホストの応答によって改造ですされています。モジュールは、マイクロ流体チャンバー内とホストによるマイクロ組織の生体内<...

<table><tbody><tr><td>Intramedic チュービング PE60</td><td>BD Biosciences</td><td>427416</td><td>モジュールの直径を変更するために、異なる直径のチュービングを使用することができる</td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水 (PBS)</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>20012-027</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>25200-072</td><td></td></tr><tr><td>Purcol 酸性化コラーゲン, 3 mg/mL</td><td>Cedarlane Labs</td><td>5005-B</td><td></td></tr><tr><td>重曹 (炭酸水素ナトリウム)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>20G 針</td><td>BD Biosciences</td><td>305175</td><td>針の直径はチュービングの直径と同程度である必要がある</td></tr><tr><td>3 mL シリンジ</td><td>BD Biosciences</td><td>309585</td><td></td></tr><tr><td>15 mL チューブ</td><td>BD Biosciences</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>50 mL チューブ</td><td>BD Biosciences</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>Convertors セルフシールポーチ 7 1/2&amp;#8221; x 13&amp;#8221;</td><td>Cardinal Health</td><td>92713</td><td></td></tr><tr><td>10 ml ワイドチップ セロロジカルピペット</td><td>BD Biosciences</td><td>357504</td><td></td></tr><tr><td>10 ml セロロジカルピペット</td><td>BD Biosciences</td><td>357551</td><td></td></tr><tr><td>5 ml セロロジカルピペット</td><td>BD Biosciences</td><td>357543</td><td></td></tr></tbody></table>

コラーゲンゲル含有する細胞のモジュールを使用してマイクロ組織の作製

Fabrication of Micro-tissues using Modules of Collagen Gel Containing Cells

このプロトコルは、モジュールと呼ばれるミクロ組織の型の製造を説明します。モジュールのアプローチは、均一な、スケーラブルで血管が新生組織を生成します。モジュールは、コラーゲンだけでなく、他のゲル化または架橋可能な材料から成っていることができる。彼らは、製造時に直径で長さが約2mmと0.7 mmであるが、埋め込まれたセルまたは時のモジュールが内皮細胞で被覆すると大きさに縮小。個別のモジュールが組み込まれた細胞は酸素と他の栄養素の拡散の制限範囲内であるが、モジュールがperfusableな大きな組織を形成するために一緒にパックすることができるくらい小さいです。彼らは複雑な組織を形成するために一緒にパックされる前に別の種類の細胞が内に埋め込ままたはモジュール上にコーティングすることができますので、これらの組織は、建設中のモジュラーです。モジュールを作るために3つの主要なステップがあります：（1）コラーゲンを中和し、その中に細胞を包埋、管の（2）ゲル化コラーゲンをし、内皮細胞とのモジュールと（3）コーティングモジュールを切断。

埋め込まれた細胞とその表面を含むモジュールと呼ばれる円筒状のコラーゲンゲルを、使用して、ミクロ組織の作成は、内皮細胞で被覆されている。

本プロトコルでは、モジュールと呼ばれる種類の微小組織の作製について解説します。モジュールアプローチを用いることで、均一でスケーラブルな、血管化された……を生成することが可能になります。

本手順の全体的な目的は、組織工学の実験に使用可能なモジュール式マイクロ組織を作製することです。まず、シリンジを用いてコラーゲン溶液をポリエチレンチューブ内に吸引し、次にコラーゲンをゲル化させることでこれを達成します。第2のステップでは、ポリエチレンチューブを2 mmの長さに切断し、マイクロ組織モジュールを形成します。手順の第3ステップでは、モジュールをチューブから分離し、最後にモジュールを内皮細胞でコーティングします。最終的に、得られたマイクロ組織は、マイクロ流体チャンバーを介して細胞間の相互作用を研究するためのin vitro細胞アッセイに使用できます。さらに、これらのマイクロ組織を移植することで、in vivoにおけるマイクロ組織の相互作用およびリモデリングを研究するための組織を構築することが可能です。こんにちは。トロント大学Sepan Labのブレンダン・ロングです。大型の3D組織代替物を構築する際の大きな障害となるのが、移植後の迅速な血管新生の不足です。このビデオでは、この制限を克服するために、血管内皮細胞でコーティングされたモジュール式組織を作製する方法をご紹介します。手順のデモンストレーションは、Septinラボの術後フェローであるChamberlainが行います。中和するコラーゲンの量は、ポリエチレンチューブの長さに依存します。このデモンストレーションでは、内径0.76 millimeter、外径1.22 millimeterの2メートルのポリエチレンチューブを使用します。チューブを準備するため、20 Gの針をチューブの一端に挿入し、その後、チューブをガス滅菌用のコンバーター自己修復ポーチに入れます。1 mLのコラーゲンで約2 mのポリエチレンチューブが満たされるため、ここでは1 mLのコラーゲンを中和します。コラーゲンを15 mLコニカルチューブに入れ、チューブを氷上に保持します。コラーゲン1 mLあたり128 µLの10x alpha-MEMをチューブに加え、ピペッティングを繰り返して混合します。気泡が発生しないよう注意しながら混合すると、酸性化したコラーゲンにalpha-MEMが混ざるにつれて溶液が黄色に変化します。次に、0.8 Mの炭酸水素ナトリウムを加えてコラーゲンを中和します。pHの概算として、黄色のコラーゲン溶液が薄いピンク色に変わるまで炭酸水素ナトリウムを加えます。pH 7.4にするには、通常、コラーゲン1 mLあたり30～60 µLが必要です。中和したコラーゲンがゲル化するのを防ぐため、使用直前まで氷上に保持してください。コラーゲンをゲル化させる手順を開始するには、滅菌済みのポリエチレンチューブが入ったバッグをバイオセーフティキャビネットに運び、チューブをバッグに入れたまま、バッグの密封端を切り取ります。滅菌済みのピンセットを使用して、チューブの一端に事前に挿入しておいた20ゲージの針に3 mLのシリンジを取り付けます。チューブのもう一端を、氷上に保持したコニカルチューブの底部に先端が届くまで、中和済みコラーゲンの中に挿入します。次の手順はゆっくりと行う必要があります。そうしないと、コラーゲンの中に気泡が混入してしまいます。シリンジのプランジャーをゆっくりと引き、ポリエチレンチューブにコラーゲンを吸い込みます。コラーゲンがチューブを通過したら、20ゲージの針を引き抜き、チューブの両端をバッグに戻します。バッグをテープで密閉した後、37 °Cで60分間インキュベートします。あらかじめ組み立てられた切断装置を使用して、チューブを切断します。この手順を開始するには、切断装置の前面にある滅菌トレーにチューブを置き、切断装置の出口からチューブをセットします。次に、25 mLの血管内皮細胞培地を入れた50 mLコニカルチューブを用意します。切断されたモジュールを回収するため、切断装置をチューブの長さ2 mmで切断するように設定し、チューブを切断します。切断したモジュールを50 mLコニカルチューブに入れ、37 °Cで60分間インキュベートします。チューブからコラーゲンモジュールを取り出すため、モジュールが入った50 mLコニカルチューブを中速で10秒間ボルテックスします。その後、モジュールがチューブの底に沈殿するまで、約5分間静置します。チューブの底にモジュールの緩いペレットが形成され、チューブは培地の上に層を作ります。モジュールが沈殿した後、口の広い10 mLセロロジカルピペットを使用して、それらを15 mLコニカルチューブに移します。15 mLコニカルチューブをボルテックスし、その後さらに2回、モジュールを沈殿させます。2番目および3番目のボルテックスで沈殿したモジュールも15 mLチューブに移します。すべてのモジュールをチューブから取り出して回収した後、チューブ内の培地量を5 mLに調整します。これでモジュールが血管内皮細胞でコーティングされる準備が整いました。次に、モジュールのコーティングに使用する血管内皮細胞の調製方法について説明します。まず、細胞から培地を除去し、PBSで洗浄します。PBSを除去した後、trypsin EDTAを3 mL加え、37 °Cで5分間インキュベートします。次に、細胞を7 mLの培地で再懸濁し、15 mLチューブに移します。ヘモサイトメーターを用いて細胞数を計測し、コニカルチューブの底部にあるパックされたモジュール1 mLあたり5×10⁶個の内皮細胞を用意します。300 Gで5分間遠心分離して細胞をペレット化します。細胞ペレットを5 mLの内皮細胞培地で再懸濁します。次に、血管内皮細胞を含む培地5 mLをモジュールに加えます。モジュールを血管内皮細胞と共に、静置および動的の両方の条件でインキュベートします。静置インキュベーションの場合、血管内皮細胞を含むモジュールを転倒混和し、その後、チューブを直立させて37 °Cで15分間静置します。15分後、再びチューブを転倒させ、37 °Cでさらに15分間インキュベートします。内皮細胞を用いてモジュールを動的にインキュベートするため、15 mLチューブを37 °Cで60分間緩やかに揺らします。内皮細胞によるインキュベーションが完了したら、モジュールを非組織培養処理プレートに移し、37 °Cで一晩インキュベートします。翌日、未接着の内皮細胞を除去するため、モジュールを新鮮な培地 containing を入れた新しい非組織培養処理プレートに移します。内皮細胞でコーティングされたモジュールを、細胞がモジュール表面の100%を覆うまで37 °Cでインキュベートします。通常、これには約7日かかります。チューブから取り出した直後のモジュールは円柱状に見えます。内皮細胞でコーティングされている場合、体積が最大50%まで収縮して楕円形になり、光学顕微鏡で観察すると密度が高まり、より不透明になります。これらの画像において、モジュールの直径と長さはそれぞれ d および l で示されています。次の画像は、作製時にモジュール内に均一に分散した埋め込み Hep G2 細胞を示しています。生存細胞が緑色に染まっていることから、細胞が高い生存率を維持していたことが分かります。内皮細胞が合流した際、死細胞は赤色に染まります。モジュールの表面にはタイトジャンクションが形成されており、これは免疫蛍光染色で確認できます。VE cadherinの染色および物質移動解析により、モジュールは、大型の組織でしばしば問題となる酸素輸送不足による壊死コアの形成を伴うことなく、高い細胞密度を維持できることが実証されています。この例において、典型的な小型モジュールのマッソン・トリクローム染色では、作製から7日後もモジュール内に生存細胞が均一かつ高密度に分布して維持されていることが示されました。対照的に、大型モジュールの中心部では多数の死細胞が形成されており、生存細胞は薄い外縁部にのみ残っていました。また、コラーゲンと合成ポリマーの混合物を用いたモジュールや、薬剤放出性マイクロスフェアを含むモジュールも作製されています。hhm EC1細胞をPLGA含有コラーゲンモジュールに播種した場合、モジュールは円筒形を維持しますが、コラーゲンのみのモジュールと比較して細胞付着性は限定的になります。ここでは、PLGAベースの生分解性マイクロスフェアを含むコラーゲンモジュールの光学顕微鏡画像を示します。いくつかのin vitroアッセイが、これらのモジュールと適合することが示されています。例えば、血管新生アッセイにおいて、内皮細胞を播種したモジュール上に形成された毛細血管様構造は、脂肪由来幹細胞とともに5日間培養した後、容易に検出および定量することが可能です。別の例として、モジュール上での生存・死滅アッセイの共焦点顕微鏡像では、生存細胞が緑色に、死滅細胞が赤色に染色されて観察されます。さらに、これらのモジュールはマイクロ流体チャンバー内で使用されたり、マウスやラットに移植されたりしており、異なる細胞型間の相互作用や、ホスト反応によってマイクロ組織がどのように再構築されるかの研究にも利用されています。この手順に従い、モジュールをペトリ皿や、バイオリアクター、マイクロ流体デバイスなどの他の容器で培養することができます。また、細胞種類の組み合わせを変更したり、異なる直径のチューブを使用したりすることで、この手法をさまざまな組織の作製に応用することが可能です。ご視聴ありがとうございました。

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コラーゲンゲル含有する細胞のモジュールを使用してマイクロ組織の作製

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