インパクタープローブを用いた外傷性脳損傷マウスモデルの生成

を剃った固定され、麻酔をかけられたマウスから始めます。

眼軟膏を塗り、頭皮をヨウ素で消毒します。

余分なヨウ素を取り除き、マウスを外科用ドレープで覆います。

正中線を切開して頭蓋骨を露出させ、傷をきれいにします。

蓋骨の片側に、脳皮質をターゲットに円をマークします。

皮質には、脳と体の間の信号伝達に不可欠な運動ニューロンと感覚ニューロンが含まれています。

蓋骨をマーキングの上に円形にドリルで穴で開け、骨弁を取り外して皮質を露出させます。

滅菌済みのインパクタープローブを露出した領域の上に配置します。プローブを組織に当てて高圧を照射します。

この圧力は脳皮質に外傷を誘発し、運動ニューロンと感覚ニューロンを破壊し、信号伝達を損ないます。

傷を取り除き、縫合します。外傷性脳損傷のマウスモデルは、さらなる実験の準備ができています。

片側頭蓋切除術を行うには、麻酔マウスのつま先ピンチに対する反応の欠如を確認し、マウスを定位固定フレームに固定します。滅菌綿棒で抗生物質の眼科用軟膏を目に塗布し、ヨウ素ベースの溶液を剃った頭皮の部分に塗布します。70%エタノールでヨウ素を取り除き、有窓手術用ドレープで動物を覆います。

頭皮に1.5〜2センチメートルの正中線切開を行い、滅菌綿棒を使用して傷をきれいにし、ブレグマの正中線の左側の筋膜を取り除きます。インパクタープローブを使用して頭蓋切除部位を特定し、xが0に等しい、yが0に等しい位置定位基準点をブレグマに設定します。プローブを正中線の左2ミリメートルまで横方向に調整します。外科的に安全な細い先端マーカーを使用して、推定衝撃領域の周囲に直径 5 ミリメートルの円をランドマークします。

インパクターを上げて回転させて位置から外し、5 mm の円を完成させます。インパクターを所定の位置に短時間戻して、5 ミリメートルの円の精度を確認します。次に、インパクターを上げて回転させ、位置から外し、0.6または0.8ミリメートルのバードドリルビットの丸い先端を備えた高速回転マイクロモーターキットハンドツールを使用して、頭蓋骨に70%から80%の最大速度で開いた穴を開けます。5 mm の円周方向の輪郭に沿って穴を開けながら頭蓋骨に軽い圧力を加えてこの境界を薄くし、鉗子を使用して得られた骨弁を持ち上げます。

縫合糸ラインに穴を開けると、骨が中断され、追加の圧力が必要になるため、さらに困難になる場合があります。血管は密接に関連している可能性があるため、出血イベントが発生する可能性があります。

軽度の制御された皮質衝撃損傷を誘発するには、滅菌アルコール準備パッドでインパクタープローブを洗浄し、インパクタープローブを露出した皮質上の所定の位置に戻します。硬膜表面に触れるまでプローブを下げ、この位置をzが0に等しいとマークします。ピストンを引き抜き、zがマイナス1ミリメートルに等しいまで移動し、ピストンを排出して皮質に衝突します。すぐにピストンを上げて腕を所定の位置から外し、たっぷりの生理食塩水で皮質を灌漑し、単純な断続縫合と5-0シルク縫合糸を使用して頭皮切開部を閉じます。