Name: 小型げっ歯類における膀胱内圧測定の使用：膀胱Chemosensationの研究 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-21T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 8 s
Description: 学ぶ小型げっ歯類の膀胱内圧測定法。カテーテル植え込みと生理的な条件下での排尿機能評価により、化学物質が膀胱の貯尿・排尿機能に与える影響を解析します。神経科学と泌尿器科学の研究に有用です。

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この作品は、ベルギー連邦政府（IUAP P6/28）、研究財団·フランダース（FWO）（G.0565.07とG.0686.09）、アステラス欧州財団賞2009とKU Leuvenの研究評議会からの補助金によって支えられて（GOA 2009/07、EF/95/010とPFV/10/006）。 PUと我々は、研究財団フランダース（FWO）のポスドクです。 MBは、マリー·キュリー·フェローでもある。 DDR FWOの基本的な臨床の仲間。

1。実験動物<ol><li>動物（マウス、ラット）が12時間明暗サイクルと水と標準食物ペレットへの不断のアクセス権を持つ専門の動物施設に収容されています。動物の年齢や性別はどちらもニーズに応じて標準化されるべき重要なパラメータである。 12週齢の雌の動物5,6 -我々は、典型的には10で膀胱内圧測定を行います。 </li><li>全ての動物実験は、欧州連合コミュニティ協議会のガイドラインに従って実施され、地域の倫理委員会によって承認されています。 </li></ol> 2。麻酔<ol><li>それはその短い半減期のために投与量に容易であるのでイソフルレン麻酔は、小さな外科的処置を行うために使用されます。イソフルランを使用するときに適切な清掃、廃ガスが必要です。 <ol class="lalpha"><li>動物は純粋な酸素でイソフルラン5％（1リットル/分）でガス、密閉ボックス内に配置されます。 </li><li>適切なlの誘導後、麻酔1と1リットル/分の酸素 - - イソフルランの1.5％を0.8 evelによって小さなマスク（カット10mlシリンジ）によって維持されています。 </li></ol></li><li>マウスの場合、ウレタン麻酔は機能録音（cfr.赤外線）中に使用されます。ほとんどの他の麻酔薬とは対照的に、排尿反射がこの麻酔剤4によって抑制されていない、ので、ウレタン麻酔は、機能録音時に使用されます。ウレタン1.2グラム/ kg体重は60分の録音が開始される前に皮下（sc）投与される。必要に応じて、適切な麻酔を得るために必要なウレタンの用量を皮下に追加投与（0.1 g / kg）を投与することにより、滴定することができる。それは注意すべきである、しかし、その追加の麻酔は排尿効率ひいては排尿頻度7,8を変更することがあります。したがって、cystometric録音が密接に監視および制御動作からの有意な偏差が観察されたときに破棄されるべきである。麻酔薬は、試験中に投与してはならない化合物は、データの誤解釈を避けるために適用されます。 </li></ol> 3。外科手術 - 膀胱カテーテル注入<ol><li>外科用器具は、使用前にオートクレーブで滅菌されています。 、動物の腹部を剃る70％エタノールで消毒し、膀胱を露出させるために低正中開腹を行う。 </li><li>手術用顕微鏡下では、非吸収性モノフィラメント縫合糸（サイズ6-0）を使用して膀胱に巾着縫合を置きます。 </li><li>巾着の中に小さな膀胱を（我々が優先的に18Gの針を使用）を実行し、この貫通孔の端の小さなカフ（慎重にチューブを加熱することによって得られる）と、PE 50ポリエチレンカテーテルを挿入します。我々の手で、より薄いチューブ（PE 10）は、より高く、より可変抵抗を持っています。チューブはエタノール70％溶液に入れ、オートクレーブで滅菌することによって消毒することができます。注入前に、チューブを生理食塩水でフラッシュする必要があります。 </li><li>財布strを確保外科医の結び目で管の周囲ING。釣鐘型の先端が右縫合下に配置されるまでゆっくりと外側にカテーテルを引き抜きます。漏れを防ぐために、縫合糸に向かって18Gのカテーテルの部分を押し込みます。 </li><li>漏れがないか確認するために静かに - 生理食塩水を少量（200μlの100）を吹き込む。漏れがある場合は、追加の縫合糸は、配置する必要があります。 </li><li>切開の上部にカテーテルの通路を残して、モノフィラメント縫合糸を用いて腹部の筋肉を閉じます。 </li><li>トンネル中空の金属棒を使って肩甲間部​​にチューブが、それによって実験中にチューブを噛まないように動物を防ぐ。 </li><li>皮膚は非吸収性モノフィラメント縫合糸を使用して閉じられます。移植されたカテーテルは、その透過性を確認するために、生理食塩水でフラッシュされます。 </li><li>動物が目覚める前に、鎮痛薬（ブプレノルフィン、0.05 mg / kg）を皮下投与されています。 </li></ol> 4。セットアップと膀胱内圧測定<ol><li>実験クエスティに応じて（そして、種が使用される）に膀胱内圧測定は、目を覚まして（拘束またはunrestraint）またはウレタン麻酔動物で行われます。膀胱内圧測定が拘束環境で冷静さを保つ傾向にある意識下ラットにおいて、完全に可能であるのに対し、マウス3,5,6,9を使用しているとき、我々は通常、ウレタン麻酔（1.2 mg / kgの皮下）の下で膀胱内圧測定を行います。 </li><li>麻酔したマウスでは、体温を常に監視し、36.5に保たれている℃±0.2℃の温度プローブと加熱ランプを用いた。 </li><li>セットアップは、製造元の指示に従って、すべての実験の前に校正されています。 </li><li>移植されたカテーテルは、一方の側の圧力変換器（エドワーズライフサイエンス）およびその他（ハーバード装置）上の輸液ポンプに接続されている3ウェイタップにルアースタブによって接続されています。圧力トランスデューサは、データ収集システム（DI-730-USB Dataq楽器）と共同にアンプ（78534cモニター、ヒューレットパッカード）を介して接続されているmputer。 Windaq / Liteソフトウェアは、記録のために使用することができます。 </li><li>輸液ポンプは、例えば、生理食塩水またはPBSの注入を可能にし、開始され、100μl/分（ラット）または20μl/分（マウス）。膀胱内圧が記録されている間などの膀胱は、一定の割合で満たされるでしょう。 </li><li> 図5は、標準的な圧力のトレースを表しています特定のボリューム/圧力に到達するまで、輸液中、遅い圧力上昇は、排尿閾値は、膀胱内にあります。このしきい値に達すると、膀胱が収縮し、その後尿道括約筋は尿道を通って尿の通過を可能にする、オープンします。このように、膀胱が空になると、収縮が停止し、圧力が &quot;基礎&quot;レベルに再び低下します。 </li><li>ラットを代謝ケージ内とデジタルのバランスの上に置かれたように、排尿量は排尿量についての情報を与え、同時に測定することができます。マイルの小さなボイドボリュームに起因するceが、それは、このシステムを使用して非常に困難な場合があります。したがって、排尿量は排尿の前後に計量し、小さなろ紙を用いて決定される。 </li><li>通常、我々は、システムが30分間の記録期間が続く30分間平衡化しましょう​​。その後、薬は全身的または膀胱内投与することができ、さらに30分が記録されている。 </li><li>記録されたデータは、定量分析に特化したソフトウェアにインポートすることができます。csvファイルとしてエクスポートすることができます。我々は一般的に（OriginLabのコーポレーション、米国マサチューセッツ州）原点を使用しています。 </li><li>実験の後、動物を頸椎脱臼（マウス）またはCO 2中毒（ラット）で屠殺する。 </li></ol> 5。代表的な結果<img alt="図1" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig1.jpg" /> 図1：開腹概要。 A）は仰臥位でラットを置きます。 B）を剃ると殺菌して手術部位を準備します。皮膚のC）を切開。 D）を切開OF腹筋、膀胱暴露。 <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig2.jpg" /> 図2：巾着縫合。 <img alt="図3" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig3.jpg" /> （3）カテーテル注入図 。 <img alt="図4" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig4.jpg" /> 図4カテーテルのトンネリング。 覚醒ラット及び麻酔マウスに生理食塩水の膀胱内灌流の間に得 ​​られた圧力測定の例を図5に示す。複数のパラメータが圧力信号（intercontractile間隔、基準圧力と閾値圧力など ）から抽出することができます。これらのパラメータの包括的な説明については、。Anderssonらを参照してください（参考文献4）と吉山ら （<html> REF 10）。 我々は最近、マスタードオイル（MO）で、長い間、膀胱11,12などの内臓器官の炎症や痛覚過敏の実験モデルで使用されてきた非常に反応性の高い化合物の分子標的を同定するために膀胱内圧測定を使用している。 10mMのMOの膀胱内注入は、野生型マウスにおける排尿頻度の大幅な上昇（intercontractile間隔の減少）（ 図6A、B）及び排尿量6の減少を誘発した。興味深いことに、MOはMOのTRPA1受容体の欠損マウスでも同様の変更を誘導した。これとは対照的に、MOはWTマウスに比べてTRPV1 KOマウスにおいてcystometricパラメータのはるかに弱い変化を誘導し、Trpa1/Trpv1 KOマウスで任意の効果がなかった。一緒にペプチド（CGRP）6カルシトニン遺伝子関連のリリースの測定値と、これらのデータは、TRPV1は、MOにより誘発される内臓炎症に重要な役割を果たしている可能性があることを示していることを示します。 ve_content &quot;&gt; <img alt="図5" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig5.jpg" /> 図5に配慮した雌ラット（）で、麻酔雌マウス（B）に記録された膀胱内圧の代表痕跡。最低圧力は &quot;ベースライン圧力&quot;（赤矢印）として定義されています。充填段階の終わりでの圧力は青い矢印でマークされています。ベースラインの圧力） &quot;intercontractile間隔&quot;（ICI）の間の時間です - 圧力差で割ったもの、これらの点の間に注入された流体の体積は、膀胱壁のコンプライアンスの計算（コンプライアンス=注入量/が（閾値圧力を可能2排尿収縮。 <img alt="図6" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig6.jpg" /> 図6野生型における膀胱内圧測定パターンとTRPA1、TRPV1とTrpa1/Trpv1ノックアウトマウスにマスタードオイルの膀胱内のアプリケーションの影響。（A）は、生理食塩水および10mM MOの注入に応答して、WT、KO TRPA1、TRPV1 KOおよびTrpa1/Trpv1 KOマウスに記録されている膀胱内圧の変化の代表的な例。前とMOの膀胱内注入時の平均排尿瞬時周波数の（B）の時間経過。すべてのマウスでは、データは生理食塩水注入の間に得られた平均周波数に正規化された。これらのデータは、エルゼビアの許可を得て、Everaerts ら （文献6）から適合させられます。

<ol><li>Everaerts, W., Gevaert, T., Nilius, B., De Ridder, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+origin+of+bladder+sensing%3A+Tr%28i%29ps+in+urology%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourol.+Urodyn%22%5BJournal%5D)">On the origin of bladder sensing: Tr(i)ps in urology.</a> Neurourol. Urodyn. 27, 264-2673 (2008).</li>
<li>Fry, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+and+their+use+in+understanding+lower+urinary+tract+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourol.+Urodyn%22%5BJournal%5D)">Animal models and their use in understanding lower urinary tract dysfunction.</a> Neurourol. Urodyn. 29, 603-608 (2010).</li>
<li>Gevaert, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+the+transient+receptor+potential+cation+channel+TRPV4+impairs+murine+bladder+voiding%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Deletion of the transient receptor potential cation channel TRPV4 impairs murine bladder voiding.</a> J. Clin. Invest. 117, 3453-3462 (2007).</li>
<li>Andersson, K. E., Soler, R., Fullhase, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+for+urodynamic+investigation%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourol.+Urodyn%22%5BJournal%5D)">Rodent models for urodynamic investigation.</a> Neurourol. Urodyn. 30, 636-646 (2011).</li>
<li>Everaerts, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+the+cation+channel+TRPV4+improves+bladder+function+in+mice+and+rats+with+cyclophosphamide-induced+cystitis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Inhibition of the cation channel TRPV4 improves bladder function in mice and rats with cyclophosphamide-induced cystitis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 19084-19089 (2010).</li>
<li>Everaerts, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+capsaicin+receptor+TRPV1+is+a+crucial+mediator+of+the+noxious+effects+of+mustard+oil%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">The capsaicin receptor TRPV1 is a crucial mediator of the noxious effects of mustard oil.</a> Curr. Biol. 21, 316-321 (2011).</li>
<li>Yoshiyama, M., Roppolo, J. R., Thor, K. B., de Groat, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+LY274614%2C+a+competitive+NMDA+receptor+antagonist%2C+on+the+micturition+reflex+in+the+urethane-anaesthetized+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Effects of LY274614, a competitive NMDA receptor antagonist, on the micturition reflex in the urethane-anaesthetized rat.</a> Br. J. Pharmacol. 110, 77-86 (1993).</li>
<li>Yoshiyama, M., Roppolo, J. R., de Groat, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+MK-801+on+the+micturition+reflex+in+the+rat--possible+sites+of+action%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Exp.+Ther%22%5BJournal%5D)">Effects of MK-801 on the micturition reflex in the rat--possible sites of action.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 265, 844-850 (1993).</li>
<li>Boudes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+Characterization+of+a+Chronic+Cyclophosphamide-Induced+Overactive+Bladder+Model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourol.+Urodyn%22%5BJournal%5D)">Functional Characterization of a Chronic Cyclophosphamide-Induced Overactive Bladder Model in mice.</a> Neurourol. Urodyn. , (2011).</li>
<li>Yoshiyama, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex-related+differences+in+activity+of+lower+urinary+tract+in+response+to+intravesical+acid+irritation+in+decerebrate+unanesthetized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Sex-related differences in activity of lower urinary tract in response to intravesical acid irritation in decerebrate unanesthetized mice.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 295, R954-R960 (2008).</li>
<li>McMahon, S. B., Abel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+the+study+of+visceral+pain+states%3A+chronic+inflammation+of+the+chronic+decerebrate+rat+urinary+bladder+by+irritant+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">A model for the study of visceral pain states: chronic inflammation of the chronic decerebrate rat urinary bladder by irritant chemicals.</a> Pain. 28, 109-127 (1987).</li>
<li>Du, S., Araki, I., Yoshiyama, M., Nomura, T., Takeda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+receptor+potential+channel+A1+involved+in+sensory+transduction+of+rat+urinary+bladder+through+C-fiber+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Transient receptor potential channel A1 involved in sensory transduction of rat urinary bladder through C-fiber pathway.</a> Urology. 70, 826-831 (2007).</li>
<li>Streng, T., Santti, R., Talo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Similarities+and+differences+in+female+and+male+rat+voiding%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourol.+Urodyn%22%5BJournal%5D)">Similarities and differences in female and male rat voiding.</a> Neurourol. Urodyn. 21, 136-141 (2002).</li>
<li>Igawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cystometric+findings+in+mice+lacking+muscarinic+M2+or+M3+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Cystometric findings in mice lacking muscarinic M2 or M3 receptors.</a> J. Urol. 172, 2460-2464 (2004).</li>
<li>Schroder, A., Newgreen, D., Andersson, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detrusor+responses+to+prostaglandin+E2+and+bladder+outlet+obstruction+in+wild-type+and+Ep1+receptor+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Detrusor responses to prostaglandin E2 and bladder outlet obstruction in wild-type and Ep1 receptor knockout mice.</a> J. Urol. 172, 1166-1170 (2004).</li>
<li>Chen, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+of+the+lower+urinary+tract+in+mice+lacking+alpha1d-adrenoceptor%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Function of the lower urinary tract in mice lacking alpha1d-adrenoceptor.</a> J. Urol. 174, 370-374 (2005).</li>
<li>May, V., Vizzard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bladder+dysfunction+and+altered+somatic+sensitivity+in+PACAP-%2F-+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Bladder dysfunction and altered somatic sensitivity in PACAP-/- mice.</a> J. Urol. 183, 772-779 (2010).</li>
<li>Thorneloe, K. S., Meredith, A. L., Knorn, A. M., Aldrich, R. W., Nelson, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Urodynamic+properties+and+neurotransmitter+dependence+of+urinary+bladder+contractility+in+the+BK+channel+deletion+model+of+overactive+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Renal.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Urodynamic properties and neurotransmitter dependence of urinary bladder contractility in the BK channel deletion model of overactive bladder.</a> Am. J. Physiol. Renal. Physiol. 289, 604-610 (2005).</li>
</ol>

特別な利害関係は宣言されません。

ここに提示され膀胱内圧測定技術は、動物モデルにおける膀胱機能の in vivo測定で行うことができます。ラットは、おそらく最もよく使われる動物モデルである。マウスのほうが扱いは難しいですが、遺伝子操作された動物を使用することの利点を提供します。なぜなら埋め込まれたカテーテルと膀胱内圧に影響を与える可能性が腹腔内圧力の変化の緩み、その結果非常に活発になる傾向が意識のあるマウスを使用しての技術的な難しさのため、我々は完全な膀胱内圧測定中にウレタンと彼らは麻酔を維持するように助言するプロトコル。もちろん、鎮静マウスを持つことの利点は、麻酔薬の効果に​​比較考量されるべきです。このように、ウレタンは排尿後残尿量7,8に重大な影響を持つことができます。私達が私達のレコーディングや介入を開始する前に、我々は、麻酔の安定度が得られるまで、我々は待つ。 研究者は、tを考慮する必要があります雄と雌のげっ歯類の排尿13の間、彼は違いがあります。また、動物の年齢は非常に重要である。 12週齢 - 私たちは、10アール動物で膀...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名称 </td><td> 商品名、会社名、 </td><td> カタログ番号 </td><td> 注釈 </td></tr><tr><td>ウレタン</td><td>ウレタン、シグマアルドリッチ</td><td> 315419 </td><td>グループ2B発がん物質</td></tr><tr><td>イソフルレン</td><td> Isoba、シェリング·プラウアニマルヘルス</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ポリエチレンカテーテル</td><td> IntramedicポリエチレンチューブPE50、ベクトン·ディッキンソン</td><td> 427411 </td><td></td></tr><tr><td>外科用顕微鏡</td><td> OP-MI 6、カールツァイス</td><td> OP-MI 6 </td><td></td></tr><tr><td>巾着縫合</td><td>プロレン6/0、エチコン</td><td> 8610H </td><td></td></tr><tr><td>筋膜と皮膚の縫合</td><td> Ethilon 4/0または5/0、エチコン</td><td> 662Gまたは661G </td><td></td></tr><tr><td>術後の鎮痛薬</td><td> Temgesic、シェリング·プラウアニマルヘルス</td><td></td><td>ラットの投与量：0.05 mg / kgで</td></tr><tr><td>アンプ</td><td> 78534cモニター、ヒューレットパッカード</td><td></td><td></td></tr><tr><td>分析天びんとバランスデータ収集ソフト</td><td> FZ 300iは、A＆D </td><td> FZ-300I </td><td></td></tr><tr><td>輸液ポンプ</td><td>ポンプ33、ハーバード装置</td><td> HA33 </td><td></td></tr><tr><td>膀胱内圧測定記録システム</td><td> Dataq楽器、DI-730シリーズとWindaq /ライト</td><td> DI-730-USB Windaq /ライト</td><td></td></tr><tr><td>温度の登録</td><td>フルーク52 KJ体温計</td><td> 52 KJ </td><td></td></tr><tr><td>圧力トランスデューサ</td><td>エドワーズライフサイエンス、圧力監視セット</td><td> T322247A </td><td></td></tr></tbody></table>

小型げっ歯類における膀胱内圧測定の使用：膀胱chemosensationの研究

The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

<p class="jove_content"尿を格納するために、効率的に都合の良い時に、それを追放することができる動的な貯水池として&gt;下部尿路（LUT）で機能します。尿を保存しながら、しかし、膀胱が廃棄物に長時間さらされている。タイトな障壁として作用することにより、LUTの上皮、尿路上皮には、有害物質の再吸収を避けることができます。また、有害化学物質は、膀胱の神経支配侵害を刺激し、膀胱の内容を追放排尿収縮を開始する。興味深いことに、有害な化学物質への膀胱の感度は膀胱神経因性膀胱の過活動の治療にTRPV1アゴニストカプサイシンを注入することにより、臨床現場で正常に使用されています<sup&gt; 1</sup&gt;。これは、化学感覚器官として膀胱を見ることの利点を強調し、さらに臨床研究のためのプロンプトが表示されます。しかし、倫理的な問題は深刻なヒト被験者は、LUT臨床薬理学の分子基盤を解明するために必要な侵襲的な測定では、実行する可能性を制限する。この限界を克服する方法は、いくつかの動物モデルを使用することである<sup&gt; 2</sup&gt;。ここでは、マウスとラットの膀胱内圧測定、制御された膀胱灌流の条件で膀胱内圧を測定可能にする技術の実装について説明します。</p&gt;<p class="jove_content"&gt;開腹後、カテーテルを膀胱内に注入し、肩甲間部に皮下にトンネリングされます。尿道は排尿のための無料のままですその後膀胱は、制御された速度で充填することができる。充填と排尿の反復サイクルの間に、膀胱内圧が埋め込まれたカテーテルを介して測定することができます。このように、圧力の変化を定量化して分析することができます。また、排尿量の同時測定により、非排尿収縮を区別排尿収縮<sup&gt; 3</sup&gt;。</p&gt;<p class="jove_content"&gt;重要なのは、げっ歯類とヒトの間に排尿のコントロールの違いにより、これらの動物におけるcystometric測定は、限られた並進値を持っている<sup&gt; 4</sup&gt;。それにもかかわらず、彼らは実験的な前臨床設定で膀胱の病態生理および薬理学の研究において非常に尽力されています。この手法を用いた最近の研究では、膀胱のメカノと化学感覚特性における新規分子の選手の重要な役割を明らかにした。</p

膀胱内圧測定では、小動物の膀胱機能を測定するための効率的な手法である<em生体内で&gt;</em&gt;。膀胱は、継続的に尿道が排尿のための無料の残っているのに対し、膀胱カテーテルを介して制御された速度で注入されています。これは、膀胱内圧と排尿量が記録されている間、繰り返しのために充填し、膀胱を空にすることができます。

小型げっ歯類における膀胱内圧測定の使用：膀胱Chemosensationの研究

下部尿路（LUT）は、尿を貯留し、適切なタイミングで効率的に排出することができる動的な貯留槽として機能します。一方で、...

本手順の目的は、化学化合物が膀胱の貯尿および排尿機能に及ぼす影響を判定することである。まず、膀胱にカテーテルを留置する。短期間の回復時間を置いた後、カテーテルを介してコントロール溶液を30分間注入する。さらに30分間にわたって膀胱内圧と排尿量を記録しながら、目的の化合物を動物に注入します。最終的に、排尿頻度の分析を通じて、刺激性化学物質が排尿パターンにどのような影響を与えるかを示すことができます。この手法の既存の方法（孤立膀胱の収縮能の記録など）に対する主な利点は、より生理的な条件下でこの器官の機能を研究できることです。例えば、中枢神経系の調節作用は維持されます。この手法の視覚的な実演は極めて重要です。なぜなら、実験を成功させるためには観察すべき多くの技術的な詳細や操作があり、手術の手順を習得するのが困難だからです。まず、膀胱に留置するチューブを準備するために、PE 50チューブを希望の長さにカットし、メインのカテーテル上に18ゲージカテーテルの小さな白い断片を被せます。次に、チューブの端を火で炙って小さなカフを作成し、生理食塩水でフラッシュして空気を抜きます。ここで、10～12週齢の雌ラットにイソフルランで麻酔を導入します。麻酔導入後、イソフルランの維持濃度を設定します。動物を仰臥位に固定し、10 cc シリンジで作製した小型の麻酔マスクを装着させます。腹部を剃毛し、真皮を消毒した後、手術に進みます。以下の手術手順は、ラットとマウスの両方において同様に行われます。まず、下腹部正中切開を行い、膀胱を露出させます。次に、手術において最も重要な工程に入ります。手術用顕微鏡下で、非吸収性モノフィラメント 6-0 縫合糸を用いて、膀胱頂に巾着縫合を施します。次に、針を用いて、パースストリング（巾着縫合）の内側に小さな嚢窓切開を行います。この穴からカフ付きPE 50カテーテルを挿入します。PE 10のようなより細いカテーテルチューブは、抵抗が高く変動しやすいため、推奨されません。サージカルノットを用いて、チューブの周囲にピューアースリング（袋縫い）を固定します。次に、カフ付きの先端が縫合部の直下に来るまで、カテーテルをゆっくりと外側に引きます。漏れを防ぐため、18ゲージのカテーテル片を縫合部に向かって押し込みます。カテーテルと膀胱の間に漏れがないか確認します。生理食塩水を緩やかに注入し、漏れがある場合は追加の縫合で締め付けます。次に、切開部位の上部にカテーテルのための通路を残しながら、モノフィラメント縫合糸を用いて腹筋を閉鎖します。動物がチューブを噛むのを防ぐため、中空の金属棒を使用してカテーテルを肩甲骨間領域までトンネルさせます。手術後、金属棒は皮膚の下かつ腹筋および背筋の上に配置してください。ロッドを動物の皮下を通して肩甲骨間領域まで押し込みます。非吸収性モノフィラメント縫合糸で腹筋と皮膚を閉鎖し、手術を完了させます。ここで、生理食塩水でフラッシングを行い、留置したカテーテルの開通性と安定性を確認することが非常に重要です。注入液が膀胱から尿道へと流出することを確認します。鎮痛剤を皮下投与した後、カテーテルの外端をプラスチックフィルムで密閉し、ラットの下背部の皮膚にカテーテルを固定します。最後に、動物を30分間休ませて回復させます。サイトメトリーを開始する前に、装置が適切に校正されていることを確認してください。デジタル天秤の上に置かれたオイル入りの容器の上に、代謝ケージに入れたラットを配置します。次のステップは、留置カテーテルをルアースタブを介して三方活栓に接続することです。タップを圧力変換器と輸液ポンプに接続します。圧力変換器はアンプを介してデータ収集システムに接続され、一般に公開されているソフトウェアを利用したコンピューターで、輸液ポンプを始動させて膀胱内に生理食塩水を注入し、制御測定を開始します。30分間にわたり、代謝ケージをデジタルバランス上に吊り下げ、ラットの排尿量を推定します。膀胱の充満および排尿に伴う膀胱内圧を記録します。次のステップでは、さらに30分間のデータ収集を行いながら、薬剤を全身的または膀胱内に投与することができます。実験終了後、動物を安楽死させます。ラットの典型的な圧力波形では、液体注入中に膀胱内で緩やかに圧力が上昇し、ある閾値に達することが示されています。その後、膀胱が収縮し、尿道括約筋が開くことで、注入された溶液が尿道を通って排出されます。これにより、膀胱が空になります。収縮は停止し、圧力は再び基底レベルまで低下します。マウスから収集されたデータもすべて同様の特徴を示しています。マスタードオイル（MO）の分子標的を特定するためにサイトメトリーが使用されました。MOは非常に反応性の高い化合物であり、膀胱などの内臓器官の炎症および痛覚過敏の実験モデルに長らく使用されてきました。予想通り、10 millimolar MOの膀胱内注入により、野生型マウスでは収縮間隔の著しい短縮が誘導されました。興味深いことに、MO受容体TRPA1欠損マウスでは、同条件下で野生型と同様の結果となりました。対照的に、TRPV1ノックアウトマウスでは、野生型マウスに比べてMOによる系統的パラメータの変化が大幅に弱まり、TRPA1とTRPV1の両方を欠損させたダブルノックアウトマウスでは、MO投与に対してほとんど反応を示しませんでした。データは、TRPV1がMOによって誘発される内臓刺激において重要な役割を果たしている可能性を示唆しています。MOの膀胱内注入前および注入中の平均瞬間排尿頻度は、これらのデータを裏付けています。平均頻度は、生理食塩水の注入に対する相対値です。この手順を行う際は、注入液が腹腔内に漏れ出さないよう、カテーテルが膀胱にしっかりと固定されていることを確認することが重要です。このビデオを視聴することで、膀胱内圧の測定方法を十分に理解できるはずです。これには、膀胱へのカテーテルの留置、および制御された膀胱灌流下での覚醒または麻酔状態の動物のサイトメトリーステージへの配置が含まれます。

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