Name: 基本的な線虫Caenorhabditis elegans方法：同期との観測 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-06-10T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 34 s
Description: 学ぶC. elegansの第1幼虫期同期法。アルカリ性次亜塩素酸ナトリウム溶液を用いて成虫を溶解し、胚を分離・同期化する手法です。発生生物学研究における均一集団の確立に役立ちます。

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著者らは、MICINN（PTAプログラムはモントセラトポルタ·デ·ラ·リーヴァをサポート）、AGAUR（ローラFontrodonaに博士号フェローシップ）のInstituto deサルド山カルロス3世（ユリウスCerónをサポートしているミゲルServetプログラム）、および資金調達のためにマリー·キュリーIRG、ISCIIIとIDIBELLを承認したいと思いますラボ。

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<li>Morley, J. F., Brignull, H. R., Weyers, J. J., Morimoto, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+threshold+for+polyglutamine-expansion+protein+aggregation+and+cellular+toxicity+is+dynamic+and+influenced+by+aging+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">The threshold for polyglutamine-expansion protein aggregation and cellular toxicity is dynamic and influenced by aging in Caenorhabditis elegans.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 10417-10422 (2002).</li>
<li>Protocols [Internet]. , Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://protocols.mmml.nl">http://protocols.mmml.nl</a> (2012).</li>
</ol>

我々は、開示することは何もありません。

線虫の同期いくつかの漂白ソリューションが記載されている。我々は5つの異なるレシピを（ 表I）しようとした、我々の手で、彼らはワーム集団の同期に有意差（ 図1）を表示しませんでした。ワームのボリューム（ 図3）、胚を孵化（ 図4）インキュベートされるとM9の量が影響を与えない：しかし、我々の実験は、温度（ 図2）、比漂白液などのパラメータことを示していたワームの生存率は、文化の適切な通気に関連している。私たちの動揺条件下で、15 mlのチューブに1 mlのボリュームはすべてのワームの生存を可能にしながら、5ミリリットルの量が適切な卵の孵化を可能にするために既に多すぎると15ミリリットルの最大量（図示せず）に匹敵する。 C. elegansの開発その開発中に、 <em&gt; C. elegansは成...

基本的な<em&gt;線虫caenorhabditis elegans</em&gt;方法：同期との観測

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

線虫 Caenorhabditis elegansの分子発生生物学の研究は、シドニー·ブレナーによって1970年代初頭に始まった、それは以降のモデル生物1として広く使用されています。C.は、線虫は、このようなシンプルさ、透明性と、長年にわたって基本的な生物学的研究に適した実験系2作った短いライフサイクルなどの主要な属性を持っています。この線虫の発見は、対照動物の開発は進化の保存された3であることを多くの細胞および分子プロセスのために広範な影響を持っています。 動物たちが成人に達する前に、C. elegansのライフサイクルは胚のステージと4幼虫の段階を通過します。開発は、温度に応じて2から4日かかる場合があります。の各段階でいくつかの特徴的な形質を観察することができます。深いannotatと一緒に、完全な細胞系譜の知識は4,5そのゲノムのイオンは7,8、幹細胞生物学9と生殖生物学ライン10を老化、神経生物学6のように多様な分野での優れたモデルには、この線虫をオンにします。 C.を行う追加機能で動作するように魅力的なモデルは、比較的簡単なプロトコルを介して特定の段階で同期ワームの集団を得る可能性である線虫 。この線虫を維持し、伝播の容易さは、このようなRNAiスクリーニング、マイクロアレイ、大規模シークエンシングのような小さなまたはハイスループット実験の多種多様に使用することができますワームを大量に取得するために強力なツールを提供する同期の可能性に加えとりわけイムノブロットやin situハイブリダイゼーション 、。 その透明性、C.のためelegansの構造もノマルスキーマイクロとして知られている、微分干渉コントラスト顕微鏡を用いた顕微鏡下で区別することができますコピーします。蛍光DNAバインダー、DAPI（4 &#39;,6-ジアミジノ-2 - フェニルインドール）の使用は、例えば、個々の細胞と同様に、それらに関連付けられている細胞内構造/欠陥の特定の識別およびローカライゼーションにつながる可能性があります。

線虫を維持し、伝播の容易さ<em&gt; C.エレガンス</em&gt;それを使って作業するのに良いモデル生物を確認します。同期ワームの可能性は多くの動物の1つの特定のプロセスの研究を促進するもの、同じ発達段階での被験者のかなりの量で作業することができます。

基本的な<em&gt;線虫Caenorhabditis elegans</em&gt;方法：同期との観測

線虫Caenorhabditis elegansの分子生物学および発生生物学の研究は、1970年代初頭にSydney Brennerによって開始され、それは...

このビデオでは、C. elegansをL1期で同期させる方法を説明します。これは非常にシンプルながら一般的で、初心者の方にとっても非常に有用な手法です。C言語のエキスパートであれば、このプロトコルを最適化するためのヒントをここに見つけられるかもしれません。線虫の同期化の基本は、成虫と胚におけるアルカリ性次亜塩素酸溶液に対する相対的な耐性の差に基づいています。多くの胚を体内に持つ成虫を次亜塩素酸溶液でインキュベートすることで、成虫のみを死滅させ、胚だけを残します。同期の第2段階は、餌を枯渇させることで達成され、これにより、胚が異なるタイミングで付着しても、L1期より先に成長しないようにします。ブリッツングプロトコルを開始するための最初のステップは、虫が産卵段階にあり、プレート上にいくつかの卵が散在している状態にすることです。M9を用いて成虫を回収し、採取してください。また、プレート表面にすでに移動している胚は、X線フィルムなどの柔らかい素材で掻き取り、数回のM9洗浄で回収した細菌を洗い流します。通常は2回程度で十分です。線虫の洗浄が完了したら、好みに応じて、あらかじめ調製しておいた新鮮な漂白溶液を添加します。チューブを振盪しながら、インキュベーション時間を制御します。実体顕微鏡下で成虫の発生を確認してください。死骸がほとんど見られなくなった時点で、チューブが満杯になるまでM9バッファーを加えて反応を停止させます。プロトコルを完了させるために、少なくとも3回の洗浄を行ってください。M9バッファーを用いて、卵をオーバーナイトで連続的に振盪しながらインキュベートします。これにより、孵化は促進されますが、線虫のさらなる発育は抑制されます。同期化は15°Cから25°Cの間のどの温度でも可能ですが、15°Cが推奨されます。発生速度が遅いため、またその発生過程で述べたように、C. elegansは成体になるまでに4つの幼虫期を経ますが、その期間は飼育温度によって異なります。タイプCのC. elegansは15から25度の成長温度に耐えますが、温度が高いほど成長速度は速くなります。こちらの高温域では、24時間後にワームの到達段階に違いがあることがわかります。15度と25度の場合、25度で48時間経過すると、すでに胚が観察されます。しかし、プレート表面に胚が見られるまでには、80時間以上待つ必要があります。最適な結果を得るために線虫を15 °Cで育成する場合、ブリッツング（blitzing）実験を行う際にはいくつかの注意点があります。また、実験に使用する適切な段階の線虫を識別することも重要です。そこで、サイズ、微分干渉コントラスト顕微鏡、または染色によって、線虫のステージを区別する方法を説明します。このグラフから、GaNワームの成長速度が温度に応じて変化することが分かり、25度

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Research

JoVE Journal

Biology

生物学

このビデオでは、不妊の成虫C.エレガンスの発達同期集団を生成する方法を示します。このプロトコル例では、線虫を同期させて、生きた動物の酸素消費率を研究します。...

線虫の同期:同一の発生段階にある線虫の集団を取得する方法

タンパク質の恒常性、ストレス、老化の関係を研究するために、遺伝的に扱いやすい後生動物Caenorhabditis...

Caenorhabditis elegansをモデル系として使用して、多細胞生物におけるタンパク質恒常性を研究する

ここでは、線虫C.エレガンスにおける細胞タンパク質毒性ストレス応答を、蛍光転写レポーターの活性化を測定し、生理学的ストレスに対する感受性をアッテルすることによって特徴付ける。...

エレガンスにおける生理的ストレス応答の測定

ここでは、分子レベルでRT-qPCRを使用したカエノハブディティス・エレガンスにおける熱ショック応答(HSR)の誘導、細胞レベルの蛍光レポーター、および生物レベルでの熱回収の誘導を評価するために標準化されたプロトコルが提示される。...

カエノハブディティス・エレガンスにおける熱ショック応答の誘導を測定するための標準化された方法

ここでは、 Caenorhabditis elegans胚を...

4D顕微鏡:ノマルスキ顕微鏡を用いた カエノラブディティス・エレガンス 胚発生の解明

本研究は、C.エレガン複合体I病ガス-1(fc21)ワーム、すなわちZebraLab(中スループットアッセイ)とWormScan(ハイスループットアッセイ)における2つの半自動運動活動分析アプローチのプロトコルを提示し、ネマトデ挙動と統合神経筋機能を定量化するための広範な研究方法の間で比較分析を提供する。...

ミトコンドリア病の ケノハブディティス・エレガンス モデルにおける動物活動量の定量化に関する実験法の比較分析

このプロトコルは、外部細菌を除去するための低温麻痺および表面漂白後の個々の細菌的にコロニー形成された Caenorhabditis elegansの...

単一ワームデータを使用して 、Caenorhabditisエレガンス-細菌相互作用における不均一性を定量化

Caenorhabditis elegansは 、健康寿命、寿命、ストレスに対する回復力を調査するための堅牢で低コストの方法を備えた優れたモデルシステムとして機能します。...

Caenorhabditis elegansの寿命と健康寿命を測定するための低コストの方法の調査

これは、 C.エレガンス 生殖腺解離とそれに続く凍結亀裂に一般的に使用される方法であり、抗体染色 による...

C.エレガンス 免疫蛍光およびDAPI染色のための生殖腺解離および凍結亀裂

このプロトコルは、老化中の C.エレガンスの...

老化中の C.エレガンス におけるミトコンドリア形態のイメージングと定量化

この研究では、最大のリャプノフ指数 (LLE) を測定することにより、C . elegans の運動に対する年齢の影響を調べます。年齢を重ねるにつれて、 C.エレガンスは...

Caenorhabditis elegansにおける運動の年齢依存的動力学:Lyapunov指数解析

学ぶC. elegansの第1幼虫期同期法。アルカリ性次亜塩素酸ナトリウム溶液を用いて成虫を溶解し、胚を分離・同期化する手法です。発生生物学研究における均一集団の確立に役立ちます。

基本的な

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