2013年11月2日
犠牲成分(VASC)工程の気化を微小構造を作製するために使用される。この手順では、レーザーマイクロマシンガイドプレートが提供する正確な3D幾何学的なポジショニングと中空マイクロチャネルを形成するために犠牲(乳酸)、ポリ乳酸繊維を使用しています。
この手順の全体的な目的は、三次元的な微小血管構造を作製することである。これは、まずポリ乳酸繊維にシュウ酸スズ(II)を組み込むことで犠牲繊維を作成し、次にパターニングプレートを用いてこれらの繊維を三次元的にパターニングすることで達成される。
次に、繊維を埋め込み樹脂でキャストします。最終ステップは、加熱と真空条件下で樹脂から繊維を脱気させることです。最終的に、この微小血管系は、熱交換、物質輸送、自己修復システムなど、多くの目的に利用することが可能です。
一般に、この手法に不慣れな方は、ファイバーの操作に必要な手先の器用さと視覚的な認識レベルが高いため、習得に苦労することがあります。ファイバーの化学処理やパターンプレートへの張り込み作業は、手と目の協調動作と専用の装置を必要とするため、学習が困難であり、本手法の視覚的なデモンストレーションが不可欠です。まず、カスタムスピンドルと直径が既知のポリ乳酸ファイバーを用いて、ファイバーへの触媒注入プロセスを開始してください。
ここでは200 µmとします。必要な量のファイバーをスピンドルの下側4分の3に巻き付けます。密閉可能なボトル内で表面積を最大限に露出させるため、ファイバーの重なりを減らしてください。
脱イオン水400 millilitersとdysbaric. One 30を40 milliliters混合します。ボトルを閉め、均質な溶液になるまで振り混ぜます。
次に、1000 mLビーカーを37 °Cのウォーターバスに入れます。ビーカーにトリフルオロエタノールを400 mL注ぎます。そこに水分散溶液を加え、均一になるまで撹拌します。
1 gのマラカイトグリーンまたは他の染料を混合物に加え、溶解するまで撹拌します。次に、スピンドルをデジタルミキサーに取り付け、スピンドルが底から0.5インチの高さになるように調整します。ミキサーを400 RPMに設定し、ゆっくりと混合を開始します。
混合物に1.3 gのシュウ酸スズ触媒を加えます。水酸化ナトリウムを用いて、混合物のpHを約6.8から7.2に調整します。次に、ビーカーに蓋をし、スピンドルの回転数を500 RPMまで上げます。
これを24時間維持しますが、最初の2時間以内に完了させてください。シュウ酸スズの凝集が発生した場合は、手動で分散させてください。24時間後、オーブンを35 °Cに予熱しておきます。
スピンドルをミキサーから取り出し、オーブンに入れます。一晩乾燥させます。少なくとも8時間乾燥させた後、スピンドルをオーブンから取り出し、スピンドルからファイバーを解きます。
繊維から過剰な触媒を除去します。微小血管ガス交換ユニットの作製は、目的の微小血管パターンでレーザーカットされた一対の真鍮製パターニングプレートを入手することから始まります。プレートをクリップホルダーに固定します。
マイクロチャネル1本あたり、触媒処理済みファイバーを10 inchの長さに切断します。ファイバー径に合わせてカットしたプレートを用いて、ファイバーに残っている触媒を除去します。ホットグルーガンのチップを使用して、ファイバーの端をテーパー状に整えます。
ファイバーの先端をゆっくりと押し出して行います。完了後、ファイバーを真鍮製パターニングプレート対の対応する穴に通します。次に、プレートをモールディングボックスにねじ込んで固定します。
プレートを取り付ける際、ファイバーがねじれていないことを確認してください。次に、カスタムテンションボードのチューニングペグにファイバーの先端を通し、PLAファイバーがピンと張るまで緊張させます。過度に緊張させてファイバーを切断しないよう注意してください。
圧縮空気を使用して、ファイバーパターンから過剰な微粒子を取り除きます。次に、ポリジメチルシロキサンベースとその硬化剤を容量比10:1で混合し、混合物をデシケーターに入れます。真空状態で10分間、混合物を脱泡させます。
PDMS混合液を成形ボックスに注ぎます。ただし、ファイバーに直接注がないでください。26ゲージの針を使用して、成形ボックス内またはファイバー間の気泡を取り除きます。完了後、アセンブリを85 °Cで30分間硬化させます。
ボックスが冷却されたら、プレートを曲げたり強く引っ張ったりしないように注意しながら、成形ボックスから真鍮製プレートを外します。成形ボックスから硬化した第1段階の構造体を取り出します。繊維の外径の少なくとも2倍のゲージの皮下注射針を使用して、RTVエンドキャップに穴を開け、針を刺したまま繊維を穴に通します。
次に、ニードルを取り除きます。穴のパターンは真鍮製のパターニングプレートと同様であるはずですが、より広く分散している必要があります。次に、エンドキャップをより大きなモールディングボックスに固定します。
PDMSの2層目を流し込み、残っている気泡を除去します。再度、85 degrees Celsiusで30分間硬化させます。2回目の硬化後、サンプルから余分なPLAファイバーを切り取ります。
それを真空オーブンに入れ、210 °Cで24時間、またはPLAファイバーの大部分が除去されるまで加熱します。PLAが除去できない場合は、クロロホルム 1 mLを注入して、マイクロチャネル内に残ったものを溶解させます。これでユニットの作製は完了です。
この手順では、上図のガス交換ユニットに見られるような、樹脂内への微小血管構造の作製方法について説明します。左下は、構造の一部を拡大した詳細図です。
視覚的な明確さを高めるために染料を使用しています。右側は、マイクロチャネルを作成するために使用した200 micronおよび300 micronの孔の六角形パターンです。マイクロチャネルは完全に中空であり、その間隔を50 microns未満にすることが可能です。
微小血管ネットワークの構造は、犠牲ファイバーで形成可能な構造によってのみ制限されます。マイクロチャネル内には、リーク(漏れ)とプラグ(閉塞)の両方が現れる可能性があります。このガス交換ユニットの左側にはプラグが存在しています。
これらは多くの場合、溶媒で除去できます。右側はリーク(漏れ)の例です。これらは、犠牲繊維が十分に洗浄されていないか、適切に張られていない場合に発生します。この手法を習得すれば、繊維の作製に45分、微小血管ユニットの作製に60分で完了させることができます。
このビデオを視聴することで、犠牲ファイバーを用いて三次元パターンを作成する方法と、その広範なプロセスにおけるトラブルシューティングについて十分に理解することができます。
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犠牲成分気化(VaSC)法は、三次元の微小血管構造を作製するために利用されます。この革新的な手法では、犠牲となるポリ乳酸繊維を用いて中空のマイクロチャネルを作成し、レーザー微細加工されたガイドプレートによって精密な幾何学的配置を実現します。
犠牲成分蒸発(VaSC)法により、精密な幾何学的制御を伴う三次元微小血管構造のスケールアップ可能な作製が可能になります。この機能は、高度なバイオマテリアルや組織工学における複雑な血管構造の再現という重要な課題を解決します。本手法は高忠実度な物質輸送システムをサポートし、初期段階の発見およびトランスレーショナルリサーチのパイプラインに直接的な影響を与えます。
VaSCプロセスは、初期の探索から前臨床モデルの開発までを統合し、仮説検証とアッセイの標準化の両方をサポートします。