Name: 加速動脈硬化家兎モデル: 内腸骨動脈バルーン傷害の方法論的視点 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-03T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 14 s
Description: 学ぶ 内腸骨動脈バルーン傷害法によるウサギ動脈硬化モデル。内皮損傷と高脂質食でプラーク形成を誘導し、ヒト冠動脈に類似したモデルで治療法評価に活用します。

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この作品は、スイスの国立科学財団助成 150271 によって支えられました。

、スイス連邦獣医局、スイス連邦共和国 (FR 2015/58)、フリブール州の獣医のオフィスによって承認されたこの実験的プロトコル。
 注: 3.2 2.8 キロの間の重量を量る雄 NZW ウサギが使用されました。動物は、従来の条件 (12 h 光と暗いサイクル、アドリブの水と食糧を提供) の下で収容されました。バルーン侵食前に動物は 1 週間中に、彼らは通常の食事の飼料で飼育した順応しました。順化 1 週間後ウサギは高脂肪 (8.6%) から成る動脈硬化の食事療法に切り替えていたし、全体の調査の持続期間のための 205 mg/kg (1%) のコレステロールの食事療法の飽和脂肪酸。左総腸骨動脈のバルーン傷害を行ったダイエット開始後 1 週間、2 週間または 4 週間バルーン傷害の後の動物が犠牲になった。
 1 術前手順 <ol><li>ガラス ビーズ滅菌器やその他機器に使用する前にすべての手術器具を滅菌します。</li>。
	<li>準備とバルーン カテーテルのアセンブリをチェックします。
	<ol><li>アタッチ 1 mL ルアーロック シリンジはバルーンカテーテルのルアーロック部分に食塩に満ちています。閉じ込められた空気の欠席の理由を慎重に監視します。漏れの注射器のプランジャーを押して適切なバルーンの膨張を確認してください</li>。
	</ol></li> <li>ウサギの重量を量るし、オンに 37 に thermopad ° C</li>
	<li>/Ml 0.01 mg/kg の投与量を皮下注入 0.3 mg の濃度のブプレノルフィン ソリューションを使用します</li>。
	<li>麻酔 5% イソフルランと 10-15 分のための部屋に誘導 5 L/min O 2 ウサギ</li>
	<li>は、手術のプラットフォーム上に保存加熱パッドに麻酔下のウサギを配置します。パッチや温度、呼吸、および心電図監視にクリップを配置します</li>。
	<li>は、ウサギの鼻をマシンに適した麻酔マスクに接続します。イソフルラン (2.5 L/min O 2 4.0%) で麻酔を維持します。(筋肉の緊張の欠如とギャグと耳介反射の喪失によって示される) 適切な anesthetization を確認します</li>。
	<li>は、角膜の乾燥を防ぐために両方の目に眼軟膏を適用されます。滅菌手術用シートで公開される下肢のみでウサギをドレープします</li>。
</ol> 2。外科プロトコル <ol><li>動物のバリカンを使用して膝の関節のすぐ下の腹側領域から髪を削除します</li>。
	<li>皮膚をきれいにし緩い毛を取除く適切な消毒剤との区域を綿棒します</li>。
	<li>伏在動を見つけて、約 1.5 cm の小さな皮膚切開は、メスを使用して長さ</li>。
	<li>大腿静脈と大腿神経を損傷することがなく小さなカーブタイプ鉗子と伏在動のごく一部を公開します</li>。
	<li>は、伏在動の下に 2 つの緩い合字ループ (5-0 絹糸) を置き、動脈の遠位端に向かって 1 つの合字ループを結ぶ。合字の内腸骨動脈から血流を停止する上記の微小血管クランプを配置します</li>。
	<li>局所動脈を拡張し、血管攣縮を防ぐためにパパベリンの一滴を適用します</li>。
	<li>タイの合字の助けを借りて伏在動を持ち上げて確認、24 を使用して小さな切開切開ゲージ針します</li>。
	<li>微細鉗子で切開フラップを上げるし、動脈の内腔に静脈ピックや誘導針をゆっくりと挿入します</li>。
	<li>は、2 フランス語肺葉動脈塞栓を伏在動脈に挿入します。静脈ピックおよび血管クランプ削除します</li>。
	<li>6 のマーク (20-25 cm) の位置に大体対応するまでカテーテルを進める 2 5 cm 腸骨の分岐上</li>。
	<li>0.1 mL 通常生理食塩水 1 mL の注射器を使用して、または 6 のわずかな圧力で風船を膨らませる 16 , 22 で説明するように規制手動空気入れを使用して atm</li>。
	<li>鉗子でバルーンカテーテルを押しながら戻って腸骨の arterytoward を 6 cm カテーテルを回転させながら挿入のポイントをドラッグします</li>。
	<li>注射器のピストンを引いてバルーンをしぼませる</li>。
	<li>完全な内皮細胞の侵食を確実に 2.10 に 2.13 の手順を 3 回繰り返します</li>。
	<li>カテーテルを外し、すぐに出血を止めるため切開の真上結紮ループを結ぶ</li>。
	<li>は傷の周囲の適切な防腐剤すべてを適用し、綿棒に血の塊。5-0 縫合糸で皮膚切開を閉じるし、消毒ポビドン ヨード溶液による手術サイト</li>。
	<li>手順 2.1 に 2.16 側のカテーテルを用いた腸骨</li>。
	<li>目から眼軟膏を綿棒します</li>。
</ol> 3。術後ケア <ol><li>管理 sulfadoxine 40 mg/kg とトリメトプリム 8 mg/kg または手術後すぐに他の適した抗生物質</li>。
	<li>麻酔回復期間中にきれいなオートクレーブ檻に入れられた熱パッド上にウサギを維持します</li>。
	<li>監視パッチとクリップを削除します</li>。
	<li>回復後、ホームの檻にウサギを戻る。ブプレノルフィン 0.05 を皮下注入 - 0.1 mg/kg のポスト - 48 h. もう 2 週間か 4 週間の続行動脈硬化の食事療法のすべての 6-12 h 作動します</li>。
</ol> 4。組織の収穫とプラークの組成分析 <ol><li>(初期の薄いプラーク) の 2 週間、3 週間バルーン傷害の後前述のように同様の方法でイソフルランを使用してウサギを麻酔します</li>。
	<li>胸腔内を開き、intracardial デスメタルでウサギを安楽死させる</li>。
	<li>は、 23 で説明したように総腸骨動脈を分離します。
	<ol><li>簡単に、腹部を開くし、後腹膜を公開します。腸骨の分岐に向けて大動脈をトレースし、分岐上に結ぶ。慎重に公開し、左右の腸骨動脈を分離する周囲の組織を削除します</li>。
	</ol></li> <li>Dissect 両方の腸骨動脈をして冷たいリン酸緩衝生理食塩水でそれらを浸します。鉗子の助けを借りて、血栓を除去します。動脈内プラークの厚さを特徴付けるための 4-6 セグメントに各総腸骨動脈を分割します</li>。
	<li>すぐに凍結する液体窒素を使用して最適な切削温度化合物を含む金型で動脈セグメントを埋め込み、クライオスタットを使用して 24-70 ° c. の準備 5 μ m 厚いセクションにそれを維持します</li>。
	<li>実行組織や蛍光抗体の免疫染色形態計測、プラークの脂質および細胞内容 10 , 25 で説明したようします 。
	注: 簡単に言えば、リン酸緩衝生理食塩水 (PBS) で動脈のセクションを洗い、0.2% を使用してを permeabilize トリトン。PBS のセクションを洗い、抗 α-SM アクチン (レバレッジ) や RAM11 抗体 (レバレッジ) 37 ° C で 1 時間のセクション 30 分加温 2% ウシ血清アルブミンと非特定のサイトをブロックします。PBS でセクションをすすぎ、PBS で再び 37 ° c. の洗浄で 30 分の適切な二次抗体とインキュベートしてヘキストを追加 (5 μ g/mL) 10 分間核の検出にします</li>。
</ol>

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著者は競合する金銭的な利益を宣言しません。

ウサギ腸骨動脈のアテローム性動脈硬化モデルは動脈硬化研究で広く使用されます。このプロトコルでウサギは急速にコレステロールの食事療法のみで開発された自発的な病変と比較してより厳しいと高度なプラクを開発しました。重要なは、動物は手術から迅速に回復します。
粥状動脈硬化のための主要な刺激は、血管内皮細胞を傷つける、distends 容器壁26バルーンカテーテルによる機械的損傷です。この手順は、マクロファージの募集そして脂質蓄積 hypercholestorolemic ダイエット、血管平滑筋細胞の遊走および増殖、強化されたマトリックスに関連付けられている炎症によって特徴づけられる改造反応を誘導します。合成、および時間依存の方法15,16で侵襲的新生内膜の確立。バルーンカテーテルを挿入するプロシージャの最も重要な部分です。強制的にバルーンを挿入することを避けるために注意を行使する必要があります。末梢の伏在動脈、総腸骨動脈にアク...

動脈硬化性プラークの破裂は、先進国1死の主要な原因の 1 つです。過去十年にわたって研究は、プラークの進展に関与するいくつかの分子・細胞メカニズムを展開してきた、病気の進行の複雑なメカニズムを解明するだけでなく、新しいテストにも努力が必要まだ続けている治療近づきます。動脈硬化症を研究するいくつかの動物モデルを提案されています。遺伝子操作、コレステロール供給または機械的内皮損傷動脈硬化マウス、ウサギ、ミニブタなどのほとんどの動物モデルで共有標準戦略であります。これらのうち、NZW ウサギは、正常ラットおよびマウスでは、食餌療法のコレステロール2,3,4は大幅吸収しない中コレステロールの食事療法に敏感です。ウサギは自発的にコレステロール豊富な食事療法5,6にうんざりしたいくつかの線維性のコンポーネントとマクロファージの豊富な大動脈病変を開発します。しかし、動脈硬化 plaquesby コレステロール食事療法だけで6,7を給餌を誘発する 4-8 ヶ月の長い準備時間は実験的設定のほとんどのための主な欠点です。比較的短時間で病変を誘導するための追求、Baumgarter、ステューダー8でコレス トロールが高い食事療法およびバルーン傷害の組み合わせを開発しました。この手法の全体的な目標は、高コレステロール血症ウサギにおける泡沫細胞 (人間の脂肪のストリークに類似) 2 週間以内で構成される動脈硬化性プラークを誘導するためです。本手法では、nzw 種高コレステロール血症ウサギの腸骨動脈に高度なバルーンカテーテルを用いた Baumgarter の法に基づく動脈壁損傷の手順について説明します。
コレステロール豊富な食事と一緒に解消の内皮化が誘起されるバルーン傷害、動脈硬化に します。バルーン傷害はアテローム性動脈硬化病変の形成を加速し、均一なサイズと分布のプラークが生成されます。内膜肥厚は傷害の後の数日以内時間と内膜細胞浸潤の開始の期間にわたって増加します。実質的なマクロファージと脂肪筋はバルーン傷害の 7 ~ 10 日後現われ始めるし、アメリカ心臓協会分類 II 型病変として表されます。ウサギ バルーン傷害は、しばしば大動脈プラークの組成を研究する実行されます。新生内膜内皮細胞間接着分子の高レベルを表しています。プラークは、内側と外の変化に関連付けられます。動脈硬化病変、脂質、増殖平滑筋細胞 (SMCs)、コラーゲン線維と再生内皮の下で蓄積、大抵タイプ II 本質的に炎症性細胞の構成されます。原則としてひと大動脈9,10で報告に類似していたウサギのプラクの位相分布、大動脈腸骨動脈と比較してサイズは大きくより大きい長さのプラークになります。しかし、動脈硬化家兎のサイトとして総腸骨動脈を使用しての主な利点は、アクセシビリティ、ひと冠動脈11、制服病変開発12、高組織率に筋肉のコンテンツの類似性活動13と一貫性のある容器寸法ひと冠動脈形態と血管造影のエンドポイントに商業的に製造されたデバイスの評価に匹敵します。生きている動物のウサギ腸骨動脈のプラークを分析する侵襲的、非侵襲的な方法を検討しました。磁気共鳴画像 (MRI) をさらに 2.35 テスラ MR システム14の助けを借りての使用については以前のレポート、血管内超音波 (IVUS) や光コヒーレンス断層法 (OCT) カテーテルを適切にすることができます画像に適用ウサギ腸骨動脈で動脈硬化プラーク。総腸骨動脈は、高解像度の超音波を使用して超音波検査バリアフリーと大動脈は、この手法で調べることができます。
過去 10 年間でさらにプラーク進行15とプラーク回帰16のメカニズムを理解するバルーン傷害のこの家兎モデルをしました。さらに、モデルは、スタチン系薬剤、標準的な抗血小板剤、抗酸化剤17,18エベロリムスなどの薬剤溶出ステントなどの新規治療薬の影響を研究に使用されていますかゾタロリムス溶出ステント19,20新生内膜肥厚。このモデルは、血管内カテーテル21近赤外蛍光イメージングを調査する使用されています。

<table><tbody><tr><td>ニュージーランド 白ウサギ</td><td>チャールズリバー研究所、フランス</td><td>Cre:KBL(NZW)</td><td></td></tr><tr><td>コレステロールが豊富な食事</td><td>Ssniff spezialdi&auml;10</td><td>Ssniff EF K 高脂肪およびコレステロール</td><td></td></tr><tr><td>ガラスビーズ滅菌器 - Germinator 500</td><td>VWR、レスターシャー、英国</td><td>101326-488</td><td></td></tr><tr><td>フォガティバルーン塞栓切除カテーテル、2 French</td><td>Edwards Lifesciences、スイス</td><td>120602F</td><td>単回使用のみ</td></tr><tr><td>ルアーロックシリンジ</td><td>ベクトン、ディキンソンアンドカンパニー、米国</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>サーモパッドタイプ226</td><td>ソリス、Switzerland AG</td><td>397387</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine- Temgesic</td><td>Reckitt Benckiser AG, Switzerland</td><td>7.68042E+12</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Critical Care, Inc, Bethlehem, PA 18017</td><td>2667-46-7</td><td></td></tr><tr><td>Anaesthesia machine-combi-vet Base Anesthesia System</td><td>Rothacher Medical GmbH, Switzerland</td><td>CV 30-301-A</td><td></td></tr><tr><td>Cardell touch veterinary vital signs monitor</td><td>米国オハイオ州ミッドマーク</td><td>8013-001</td><td></td></tr><tr><td>眼科軟膏-Humigel</td><td>Virbac, フランス</td><td></td><td></td></tr><tr><td>動物用バリカン</td><td>Aesculap AG, ドイツ</td><td>GT420</td><td></td></tr><tr><td>消毒剤-ベタジン溶液</td><td>MundipharmaMedicalCompany, Switzerland</td><td>14671-1203</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #7 Forceps</td><td>FST ドイツ</td><td>11274-20</td><td></td></tr><tr><td>中小マイクロシザー、</td><td>メドラインインターナショナルスイス、S&agrave;rl</td><td>UC4337</td><td></td></tr><tr><td>微小血管クランプ</td><td>FST, ドイツ</td><td>18051-28</td><td></td></tr><tr><td>パパベリン</td><td>ESCA chemicals, Switzerland</td><td>RE 356 803</td><td></td></tr><tr><td>Vein Pick</td><td>Harvard Apparatus, Cambridge, UK</td><td>72-4169</td><td>For single use only</td></tr><tr><td>Saline</td><td>Laboratorium Dr. G. Bichsel AG, , Switzerland</td><td>1330055</td><td></td></tr><tr><td>Polysorb 5-0 suture</td><td>Covidien AG, Switzerland</td><td>UL 202</td><td>Monofilament</td></tr><tr><td>Sulfadoxine and Trimethoprim-Trimethazol</td><td>Werner Stricker AG, Switzerland</td><td>Swissmedic Nr. 50'361</td><td></td></tr><tr><td>Antiseptic- Octenisept</td><td>Sch&uuml;lke &Mayr AG, Switzerland</td><td>GTIN: 4032651214068</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline</td><td>Roth</td><td>1058.1</td><td></td></tr><tr><td>Isobutanol-2-Methylbutane</td><td>Sigma-Aldrich, Switzerland</td><td>M32631-1L</td><td></td></tr><tr><td>Optimum Cutting Temperature compound-Tissue-Tek</td><td>VWR Chemicals, Belgium</td><td>25608-930</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Leica, Glattbrugg, Switzerland</td><td>Leica CM1860 UV</td><td></td></tr><tr><td>スライドガラス - Superfrost Plus</td><td>Thermo Scientific</td><td>4951PLUS4</td><td></td></tr><tr><td>Mayer's Haematoxylin</td><td>Sigma-Aldrich, Switzerland</td><td>MHS32-1L</td><td></td></tr><tr><td>Eosin 0.5% aq.</td><td>Sigma-Aldrich, Switzerland</td><td>HT110232-1L</td><td></td></tr><tr><td>Oil Red O</td><td>Sigma-Aldrich, Switzerland</td><td>O0625-25G</td><td></td></tr><tr><td>&alpha;-smooth muscle actin antibody</td><td>Abcam, UK.</td><td>ab7817</td><td></td></tr><tr><td>マクロファージクローン RAM11 抗体</td><td>DAKO, Switzerland</td><td>M063301</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst</td><td>Abcam, UK.</td><td>ab145596</td><td></td></tr><tr><td>Goat polyclonal 二次抗体 (Chromeo 546)</td><td>Abcam, UK.</td><td>ab60316</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488/547</td><td>アブカム、英国。</td><td></td><td></td></tr><tr><td>グリセルゲル封入剤、水性</td><td>DAKO、スイス</td><td>C056330</td><td></td></tr><tr><td>Movat ペンタクロム染色用ヘマトキシリン</td><td>Sigma-Aldrich、スイス</td><td>H3136-25G</td><td></td></tr><tr><td>Movat ペンタクロム染色用塩化第二鉄</td><td>Sigma-Aldrich、スイス</td><td>157740-100G</td><td></td></tr><tr><td>Movat 染色用ヨウ素</td><td>Sigma-Aldrich、スイス</td><td>207772-100G</td><td></td></tr><tr><td>Movatペンタクローム染色用ヨウ化カリウム</td><td>Sigma-Aldrich、スイス</td><td>60400-100G-F</td><td></td></tr><tr><td>Movat染色用アルシアンブルー</td><td>Sigma-Aldrich、スイス</td><td>A5268-10G</td><td></td></tr><tr><td>Movatペンタクローム染色用強アンモニア</td><td>Sigma-Aldrich、スイス</td><td>320145-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Movatペンタクローム染色用ブリリアントクロセインMOO</td><td>Sigma-Aldrich、スイス</td><td>210757-50G</td><td></td></tr><tr><td>Movat ペンタクロム染色用酸性フクシン</td><td>Sigma-Aldrich、スイス</td><td>F8129-50G</td><td></td></tr><tr><td>Movat ペンタクロム染色用チオ硫酸</td>ナトリウム <td>Sigma-Aldrich、スイス</td><td>72049-250G</td><td></td></tr><tr><td>Movat ペンタクローム染色用リンタングステン酸</td><td>Sigma-Aldrich、スイス</td><td>79690-100G</td><td></td></tr><tr><td>Movat ペンタクローム用クロシン染色</td><td>Sigma-Aldrich, Switzerland</td><td>17304-5G</td><td></td></tr><tr><td>EUKITT for Movat pentachrome staining</td><td>Sigma-Aldrich, Switzerland</td><td>03989-100ML</td><td></td></tr></tbody></table>

加速動脈硬化家兎モデル: 内腸骨動脈バルーン傷害の方法論的視点

The Rabbit Model of Accelerated Atherosclerosis: A Methodological Perspective of the Iliac Artery Balloon Injury

動脈硬化性プラークの開発と破壊に続く冠動脈閉塞による急性冠症候群は、先進世界での死の主要な原因です。ニュージーランド ホワイト (nzw 種) ウサギは、アテローム性動脈硬化の研究の動物モデルとして広く使用されます。彼らは動脈硬化食事にうんざりした自発的な病変を開発します。ただし、これは 4-8 ヶ月の長い時間を必要があります。さらに強化し、粥状動脈硬化を促進、動脈硬化の食事と機械的血管内皮傷害の組み合わせがしばしば利用されます。家兎動脈硬化性プラークを誘導するため提示された手順は、動脈硬化の飼料 NZW ウサギの左総腸骨動脈の内皮細胞を破壊するのにバルーンカテーテルを使用します。バルーンカテーテルによるこのような機械的な損傷は、時間依存的新生内膜脂質の蓄積を開始する炎症反応の連鎖を誘発します。次のバルーン傷害ショー新生内膜肥厚広範な脂肪浸潤、高平滑筋細胞内容マクロファージの存在と動脈硬化性プラークには、泡沫細胞が派生しました。この手法、シンプルで再現性のある、内腸骨動脈内長の制御のプラークを生成します。全体の手順は 20-30 分以内に完了します。手順は、安全低死亡率では、実質的な内膜肥厚病変に高い成功を提供しています。バルーンカテーテルのプロシージャは、2 週間以内動脈硬化症における動脈傷害の結果を誘発しました。このモデルは病の病理を調査するため使用することができます画像診断と新しい治療戦略を評価します。

総腸骨動脈のバルーン傷害は、(図 1) の合併症もなく正常に実行されました。20 〜 30 分の怪我のため手術時間の合計は、のみ 1 つの腸骨動脈、および両方の動脈の損傷のための 35 〜 45 分を行います。ウサギはバルーン損傷後 1 h 以内に回復。すべての動物は、有意な体重を失うことがなく健康な登場。感染症、浮腫や動脈血栓症発生しませんでした。創傷部は縫合のサイトでいくつかの軽度の線維化以外にも正常であった。動脈硬化食事餌やりの 4 週間、続いてウサギ展示高コレステロール血症 44 ± 18 mM/l。
図 2 a図 2 e、および図 2 iを右無傷腸骨動脈 (バルーン損傷にさらされていない) 通常の外観と。(図 2および図 3</str...

動脈硬化症の動物モデルは、メカニズムを理解してプラークの開発や破断、先進国の死亡原因を防止するための新しいアプローチを調査するために不可欠です。このプロトコルは、ウサギ腸骨動脈の動脈硬化性プラークを誘発するのにバルーン傷害と高コレステロール食の組み合わせを使用します。

Acute coronary syndrome resulting from coronary occlusion following atherosclerotic plaque development and rupture is the leading cause of death in the ...

本手順の目的は、ウサギの左腸骨動脈の内皮を外科的に損傷させ、アテローム形成食を投与することにより、アテローム性動脈硬化プラークの形成を誘導することです。ウサギにおける単独の損傷は、プラーク組成を研究するために大動脈で行われることが多いですが、腸骨動脈はヒトの冠動脈と非常に類似しているため、アテローム性動脈硬化プラークのモデル化に適した部位となります。ウサギ腸骨動脈の筋肉含有量の一様性、組織因子活性、および一貫した血管径は、いずれもヒト冠動脈に匹敵します。これにより、市販のデバイスを形態計測学的および血管造影的なエンドポイントで評価することが可能になります。本手順の実演は、私の研究室の共同研究者であるAurelien Frobertが行います。ガラスビーズ滅菌器などを用いて、すべての手術器具を確実に滅菌してください。次に、2つのバルーンカテーテルアセンブリを準備し、点検します。それぞれに生理食塩水を満たした1 mL ルアーロックシリンジを取り付け、バルーンの膨張機構を用いて気泡が混入していないかを確認してください。次に、手術台のサーマルパッドを37 °Cに設定します。その後、ウサギの体重を測定します。続いて、ブプレノルフィンを注射し、5% isofluoraneを毎分5 Lの流量で10〜15分間投与して、ウサギを麻酔させます。次に、麻酔をかけたウサギを手術台上のヒーティングパッドの上に置きます。ウサギの体温と呼吸をモニタリングし、心電図を収集するためのセンサーを取り付けます。次に、4% isofluoraneを毎分2.5 litersで投与するためのフェイスマスクを装着します。次に、嘔吐反射と眼瞼反射が消失していることを確認し、適切な麻酔深度にあるかを確認します。また、全身の筋緊張が消失していることも、深い麻酔状態にある指標となります。続いて、両眼にアトニック軟膏を塗布します。次に、動物用バリカンを使用して、膝関節の直下の腹側領域から被毛を除去します。その後、浮き毛を取り除き、70% ethanolとベタジンを交互に3回擦って露出した皮膚を洗浄し、下肢のみを露出させて動物をドレープします。手術を開始するために、伏在動脈を特定し、1.5 centimeterの切開を加えます。次に、小型の曲尖鉗子を用いて、大伏在静脈の一部を慎重に露出させます。大腿静脈や大腿神経を損傷しないよう注意してください。この露出操作において、動脈を十分に洗浄することが非常に重要です。次に、伏在動脈の下に2つの緩い結紮ループを配置し、動脈の遠位端付近で1つの結紮ループを縛ります。その後、結紮の上方の動脈に沿ってマイクロ血管クランプを配置し、クランプを閉じて血流を停止させます。直ちにパパベリンを1滴投与して動脈を拡張させ、血管痙攣を防止します。次に、結紮糸を用いて伏在動脈を持ち上げ、24ゲージの針で小さな動脈切開を行います。続いて、切開口のフラップを持ち上げ、静脈ピックまたはガイド針を動脈の管腔内にゆっくりと挿入します。その後、動脈塞栓除去カテーテルを伏在動脈内に慎重に挿入します。破裂を防ぐため、慎重に操作してください。その後、静脈ピックを取り除き、動脈のマイクロ血管クランプを解除します。損傷を作成するには、まずバルーンカテーテルを3番目のマークまで進めます。これにより、腸骨動脈分岐点から約2〜5cm上に位置することになります。次に、0.1 mLの生理食塩水でバルーンを膨らませます。続いて、カテーテルをクランプし、組織を損傷させるように回転させながら6cm引き戻します。バルーンを後退させた後、脱気させます。内皮を完全に拡張させるため、この工程をさらに2回繰り返します。その後、カテーテルを抜去し、出血を止めるために動脈切開部位の直上で結紮ループを直ちに締め付けます。次に、創傷の穿孔部位の周囲に適切な消毒剤を塗布し、血栓を綿球などで拭き取ります。最後に、皮膚切開部を閉鎖し、ポビドンヨード溶液で手術部位を消毒します。その後、2本目のカテーテルを使用して、対側腸骨動脈に同様の手術手順を繰り返します。手術後、まずウサギの側腹部から腹痛用軟膏を拭き取ります。次に、スルファドキシンとトリメトプリムを投与します。その後、ヘッドパッドを装着したウサギを、モニタリングパッチとクリップを備えた清潔な回復用ケージに移します。動物が正位に戻り、歩行可能になったら、ホームケージに戻します。疼痛管理のため、ブプレノルフィンを投与してください。その後、必要な期間、動物にアテローム形成性食事を与え始めます。術後2週間または4週間の早期薄い亜麻を採取するには、まずウサギを麻酔し、次いで心停止切開により安楽死させます。次に、腹部を開いて後腹膜を露出させます。その後、大動脈を腸骨分岐に向かって辿り、分岐部の上方で結紮します。続いて、周囲の組織を慎重に取り除き、両側の腸骨動脈を単離します。次に、両側の動脈を切り出し、氷冷PBSに浸します。そこで、ピンセットを用いて血栓を除去し、各動脈を46のセグメントに分割します。その後、直ちにセグメントをOCT化合物を含む型に埋め込み、液体窒素で急速冷凍します。組織を-80 °Cで保存し、後日、標準的な手法を用いて5 µm厚の切片を染色します。腸骨動脈のバルーン損傷は、合併症なく1時間以内に正常に完了しました。ウサギは1時間以内に回復し、および/または著しい体重減少がなく健康な状態であった。術後の合併症は認められなかった。また、4週間のアテローム形成食の投与後、すべてのウサギに高コレステロール血症が認められた。バルーンによる損傷とコレステロール食を組み合わせたことで、血管壁に構造的な変化が生じ、2週間でアテローム性動脈硬化プラークが形成されました。同一個体から損傷のない腸骨動脈とバルーン損傷させた腸骨動脈を単離し、比較を行いました。プラークは、脂質の浸潤に加えて、平滑筋細胞の遊走および増殖によって特徴付けられました。損傷した血管内で線維化が進行し、一方で管腔サイズは縮小し続けます。その結果生じる変化は、4週目までに非常に顕著になりました。2週後および4週後の形態計測による定量化では、内膜・中膜厚の増加、プラーク面積の拡大、管腔面積の減少、そして最終的に脂質蓄積の増加が認められました。α-smooth muscle actin抗体による染色は筋肉アクチンと反応するため、血管平滑筋細胞を同定することができます。一方、CD11bモノクローナル抗体による染色はマクロファージの細胞質を明らかにします。これらの染色を併用することで、損傷した血管内のアテローム性動脈硬化プラークにおいて、平滑筋細胞とマクロファージがどの程度増殖しているかを明らかにすることができます。このビデオを視聴することで、動物の安全管理について十分に理解し、ウサギの腸骨動脈に暴力的な損傷を容易に誘導できるようになります。アテローム形成食を併用したこの損傷により、腸骨動脈において経時的に均一なプラーク形成が促されます。

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Research

JoVE Journal

Medicine

医学

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炎症性プラークの赤外蛍光（NIRF）血管内分子イメージング、マルチモーダルアプローチの近くin vivoでの動脈硬化のイメージングに

このビデオでは、マウスの動脈の内膜のプラークの開発の2つのモデルを示し、筋内膜増殖症およびアテローム性動脈硬化症の違いを強調している。...

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ラット頸動脈バルーン傷害は、アテローム硬化性血管の血流を回復させるために行われる臨床血管形成術手順を模倣する。このモデルは、動脈壁を遠ざけ、内皮細胞の内皮層を脱脂することによって動脈損傷応答を誘導し、最終的にはリモデリングおよびインティタル過形成応答を引き起こす。...

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頭蓋内動脈瘤治療のための血管内装置の開発と試験は依然として非常に重要です。今日使用されているほとんどの動脈瘤モデルは、動脈変性壁の重要な特性または真の分岐の血行動態のいずれかを見逃している。そこで、ウサギにおける新規な動脈パウチ分岐模型の設計を目指した。...

ウサギの動脈ポーチ微小外科分岐動脈瘤モデル

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大動脈弁狭窄症(AVS)の根底にある病理学的メカニズムを理解し、治療的介入の有効性を評価するには、適切な動物モデルが必要である。本プロトコルは、in...

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