ニュージーランド白ウサギにおける母体免疫の研究における鼻腔内免疫とミルクコレクション (オリクトラグス・キュニクルス)

これは、新生児および乳児の病原体および疾患からの免疫伝達とその後の保護の初期経路であるため、母親の免疫化および抗体移動の研究は、多くの理由で非常に貴重である。ヒトとの胎盤および抗体の伝達の類似性により、ウサギは母親の免疫の優れたモデルです。このビデオ記事では、私たちの研究室がニュージーランドの白ウサギにおける母親の予防接種の研究で利用した技術を実証しています。

まず、ニュージーランド白ウサギにおける粘膜母体免疫研究のタイムラインと一連の出来事の例を説明する。このビデオで示すように、雌ウサギは鼻腔内経路を介して免疫されています。研究に応じて、ワクチンはブーストを必要とするか、筋肉内予防接種などの追加のルートを介して与える必要があるかもしれません。

描かれていないが、血液はベースライン測定のための最初の免疫の前に、そして一定の間隔で研究の残りの部分を通して収集されるべきである。血液は、軽度の沈下および局所鎮痛剤を有する中央耳動脈によって容易に得られる。抗原特異的IgGレベルの存在は、これらのサンプルで測定することができる。

ウサギは、その後飼育されます。我々は、これらの研究のためのより高い妊娠率を確保するために使用するベンダーから実績のあるブリーダーを購入することを好む。予防接種のタイムラインに応じて、ウサギは妊娠中に追加の予防接種を受ける可能性があります。

抗原特異的IgGは、キットにトランスサクロス的に移される。妊娠中の繁殖後約30〜32日で親切になります。最初の数日間はキットの取り扱いを制限して、拒否を最小限に抑えることをお勧めします。

血液サンプルは、トランスサプレースに移された抗原特異的IgGレベルを評価するためにキットから収集することができます。血液は、初期の抗原特異的抗体レベルを評価するために、出生時または出生時近くの少数のキットから採取することができる。多種多様な栄養素に加えて、キットは授乳中に授乳中に抗原特異的IgAを受け取ります。

キットは通常、生後4~8週で引き受けます。乳離乳する前に、授乳から簡単に収集することができ、このビデオで示すように行います。次いで、採取した乳サンプルを処理して、抗原特異的IgAを検出します。

研究に応じて、ワクチンおよびブーストをキットに投与することができ、連続血液サンプルは、横型サペヌス静脈を使用して非常に早い時期にキットから収集することができます。ニュージーランドのホワイトラビットで鼻腔内予防接種とミルクコレクションをデモンストレーションします。すべての手順は、デューク大学の制度的動物ケアと使用委員会の方針に従って承認され、実行されました.

鼻腔内予防接種.必要な材料:アセプロマジン、注射器および針、眼用潤滑剤、イソフルラン、鼻コーン、ピペット、ピペットチップ、粘膜ワクチン。動物の取り扱い前に免疫液を準備してください。

ウサギはアセプロマジンを筋肉内に1キログラムあたり1ミリグラム鎮静させ、鼻コーンを使用してイゾフルランで麻酔をする。眼瞼反射によって評価されるように完全に麻酔をすると、眼の潤滑剤を各眼に加え、眼の乾燥とその後の角膜潰瘍を防ぎます。ラボメンバーがワクチンを投与する準備ができ、ウサギが麻酔の適切な平面に入ったら、イオブルランと酸素をオフにして鼻コーンを取り除きます。

ウサギを後部の不用に置き、ワクチンを投与するラボメンバーによる両方の大臼歯の容易なアクセスと視覚化を可能にする約45度の角度で首と頭部を支える。ワクチン溶液の100マイクロリットル以下でピペットをロードし、すぐに1つの鼻孔に溶液を投与し、第2の鼻孔のための手順を繰り返します。ピペットは、およそ45度の角度で保持する必要があります。

鼻通路の内側の側面に向かって角度。免疫の目的は、溶液がナレスの粘膜に接触することです。したがって、粘膜組織の摩耗または刺激をもたらし、鼻腔投与ワクチンの免疫原性に影響を与える可能性があるため、先端をナレス内に配置してはならない。

ワクチンは迅速に投与し、他の鼻孔でも同様に行う必要があります。両方の鼻腔で投与した後、ウサギはワクチン溶液の漏れを最小限に抑えるために30秒間、後部の再実行状態に維持される。ラボは通常、一度に鼻孔あたり100マイクロリットル以下を管理します。

より大きな容積が500マイクロリットルの最大総容積で投与される場合、ワクチンは、予防接種の間に30秒の休息期間を有する100マイクロリットルのアリコートで与えることができる。そして、ワクチンの追加投与は、総ワクチン量が送達されるまで、各投与の間に30秒間の休息を繰り返す。免疫化後、ウサギを心室に置いて回復し、胸骨の精通を維持できるようになるまで動物を注意深く監視する。

いくつかの例では、ワクチン製剤は鼻腔に完全に送達されない可能性があり、ワクチン製剤の一部はナレスの外部分に残ることがある。この場合、鼻腔に適切に送達されたワクチンの正確な量が明らかではないので、未定義の変数を実験に追加するので、追加のワクチン材料の再適用は推奨しないでください。ナレスへのワクチン製剤の完全かつ一貫した送達を提供するワクチン送達技術を使用することが重要である。

ミルクコレクション。必要な材料:アセプロマジン、注射器および針、アルコール綿棒、ガーゼ、眼用潤滑剤、イソフルラン、鼻コーン、オキシトシン、およびコレクションバイアル。ウサギはアセプロマジンを筋肉内に1キログラムあたり1ミリグラム鎮静させ、鼻コーンを使用してイゾフルランで麻酔をする。

眼瞼反射によって評価されるように完全に麻酔をすると、眼の潤滑剤が各眼に塗布され、眼の乾燥とその後の角膜潰瘍を防ぎます。アルコール綿棒で限界耳静脈の上の皮膚をきれいにします。1ミルシリンジと25ゲージ針を使用して、乳を失望させる限界耳静脈によって静脈内に約1〜2つの国際単位のオキシトシンを投与する。

平滑筋弛緩のために、ウサギはオキシトシンの投与後に排尿または排便することが一般的である。オキシトシン投与後、止止めを与えるためにガーゼを注入部位に圧力をかける。ウサギの鼻の上に麻酔マスクまたは鼻コーンを維持しながら、その後ろの四分の一にウサギを支えます。

補足として、ミルクコレクションは横の遅れで動物と一緒に行うこともできますが、ウサギが麻酔マスクでウサギを直立に保持しているアシスタントと一緒に突っ込んだときにコレクションが簡単であることを発見しました。無菌チューブを開いてミルクの採取の準備をし、乳腺組織と関連する乳酸塩を見つけます。ウサギは通常、乳腺の4〜5組を持っています。

乳酸塩は通常、最近の看護から湿った毛皮に囲まれており、乳腺組織はミルクでいっぱいになると容易に触知可能である。親指と人差し指の間の乳頭に関連する乳腺組織をつかみ、乳頭の方向に腺組織に穏やかなマッサージ圧力を加える。コレクションチューブを乳の上に置き、表現された牛乳を回収します。

オキシトシンが効果的になるのに数分かかることがあり、乳腺によって乳の生産が異なるように見えます。ミルクの発現が成功しない場合は、数分待つか、追加の乳腺に回します。すべての乳豆からのミルクは、同じ卑劣で収集することができます。

典型的には、数ミリリットルの牛乳を授乳中のドエから容易に採取することができる。所望の量の牛乳が回収された後、イオブルランと酸素をオフにしてウサギから鼻コーンを取り除き、動物が胸部の持続性を維持できるようになるまで注意深く監視しながらウサギが回復できるようにします。代表結果。

図1。母親の研究では、できるだけ早く妊娠を決定することは、ドエを再繁殖させる必要がないことを確認するのに役立ちます。妊娠検出のためのオプションは、触診、超音波、X線写真、体重増加、およびインスリン成長因子およびプロゲステロンの測定などの分子技術を含む。

十分なプロゲステロンレベルは、ウサギの妊娠の維持のために必要です。したがって、いくつかの研究はまた、妊娠中のウサギのプロゲステロンレベルを評価し、特に妊娠中の臓器形成中に、非妊娠ウサギに対して上昇レベルを実証している。図1に示すように、プロゲステロンレベルの上昇は、すべての人のために金による交配が確認された後でさえ、妊娠していないウサギと比較して妊娠ウサギで検出することができる。

血清プロゲステロンレベルは、自動化学発光アッセイを用いて測定した。図2。妊娠時にトランスサプレイスに転写された抗原特異的IgGは、エリサによりキットの血清中で測定することができる。

血液は、初期の抗原特異的抗体レベルを評価するために、出生時または出生時近くの少数のキットから採取することができる。連続採血は、キットの年齢とサイズの増加に伴い、技術的にはるかに簡単です。図2に示すように、キット内の抗原特異的IgGの血清レベルを測定し、母体レベルと比較することができる。

母性に移されたIgGレベルは出生時に高く、時間の経過とともに減少する。図3。ウサギのミルクは、このビデオに示すように収集することができ、Elisaによって総および抗原特異的抗体レベルを測定するために処理されます。

この図に示すように、IgAは、キットへの受動的な移動に利用可能な母乳内の全抗体のかなりの部分を構成しています。IgA と IgG の両方のレベルは、IgM.Summary よりもかなり高いです。このビデオ記事では、母体免疫の翻訳的に適切なモデルで粘膜免疫を評価する手段として、鼻腔内ワクチンの投与と授乳中ウサギからのミルクの採取について説明し、実証します。

描かれているのは、免疫、繁殖、親切、授乳、抗体の転写を組み込んだ典型的な母体の鼻腔内免疫研究の設計の要約画像である。