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Neuroscience

El uso de condicionamiento de clásico de Eyeblink rastro para evaluar disfunción hipocampal en un modelo de rata de trastornos del espectro alcohólico Fetal

Published: August 5, 2017 doi: 10.3791/55350

Summary

Condicionamiento de clásico de rastro eyeblink (ECC) se utilizó para evaluar aprendizaje dependiente de hipocampo en ratas adultas que fueron administrados a una alta concentración (11,9% v/v) de alcohol durante el desarrollo temprano del cerebro neonatal. En general, los procedimientos ECC son sonidas herramientas de diagnóstico para detectar disfunción cerebral a través de muchos contextos psicológicos y biomédicos.

Abstract

Administraron a las ratas neonatales una relativamente alta concentración de alcohol etílico (11,9% v/v) durante días postnatales 4-9, cuando el cerebro fetal experimenta rápidos cambios organizacionales y es similar a acelerados cambios en el cerebro que ocurren durante el tercer trimestre en los seres humanos. Este modelo de trastornos del espectro alcohólico fetal (FASD) produce daño cerebral grave, mímico la cantidad y el patrón de consumo de concentrado que se produce en algunas embarazadas alcohólicas. Describimos el uso del rastro eyeblink condicionamiento clásico (ECC), una variante de orden superior de aprendizaje, para evaluar la disfunción hipocampo a largo plazo que se ve normalmente en la descendencia de adultos expuestos al alcohol. A los 90 días de edad, roedores fueron quirúrgicamente preparados con grabación y electrodos estimulantes, que medida electromiográfica (EMG) parpadean la actividad del músculo del párpado izquierdo y entregan leve choque posterior para el ojo izquierdo, respectivamente. Después de un período de recuperación de 5 días, experimentaron 6 sesiones de traza ECC para determinar diferencias de aprendizaje entre los exponen al alcohol y las ratas de control. Rastro de ECC es uno de muchos procedimientos posibles de ECC que pueden ser fácilmente modificados usando el mismo equipo y software, que pueden evaluarse diferentes sistemas neurales. Procedimientos ECC en general, pueden utilizarse como herramientas de diagnóstico para la detección de patología neural en sistemas cerebrales diferentes y distintas condiciones que insultan al cerebro.

Representative Results

El software del eyeblink es capaz de proporcionar un conjunto de datos grande y amplio para muchos tipos de mediciones. Por brevedad, se reporta en este estudio, representante de resultados para el aprendizaje y rendimiento medidas adaptativa porcentaje de CR, amplitud CR adaptable, porcentaje de UR y amplitud de UR. El período adaptativo de CR fue elegido ya que representa la adquisición de eyeblink oportunas respuestas sobre entrenamiento repetido, como resultado de la mayor plasticidad sináptica en el hipocampo durante el rastro ECC50,51,52. Las medidas de UR fueron escogidas para dilucidar si los déficits de aprendizaje neonatal inducida por el alcohol en trazan ECC fueron debido a trastornos en el aprendizaje asociativo o interrupciones en la respuesta al choque en nosotros - lo cual podría indicar diferencias motivacionales o motor, en lugar de las diferencias de aprendizaje entre grupos de tratamiento. Datos para cada medida se analizaron 2 (sexo) x 3 (Neonatal Group) x 6 (sesión) mezclado ANOVAs, con período de sesiones como el factor de medidas repetidas. Efectos principales significativos para el tratamiento de neonatal se analizaron usando pruebas post-hoc de Tukey e interacciones significativas se analizaron mediante pruebas de efectos simples. Todos los análisis estadísticos se realizaron utilizando un mínimo nivel alfa de 0.05 y los resultados en gráficos son media ± SEM.

A partir de la medida de porcentaje de CR adaptable, el ANOVA indicaron un efecto principal significativo de grupo neonatal, F(2,21) = 11.69, p < 0.001, pero ningún efecto principal significativo del sexo (p = 0.71) o interacción significativa entre estos factores (p = 0,20). Como se esperaba, adaptación porcentaje CR aumentó durante las seis sesiones de entrenamiento, F(5, 105) = 81.15, p < 0.001 y las diferencias entre los grupos neonatales dependían de algún nivel de sesión, F(10, 105) = 4.58, p < 0.001. No había ninguna otras interacciones significativas con el factor de la sesión. Además de amplitud adaptativa de CR, otra vez hubo un efecto principal significativo de grupo neonatal, F(2,21) = 22.32, p < 0.001, pero ningún efecto principal significativo del sexo (p = 0.21) o interacción significativa entre estos factores (p = 0.48). Amplitud de CR también aumentó significativamente con las seis sesiones de entrenamiento, F(5, 105) = 59,27, p < 0.001 y las diferencias entre los grupos neonatales dependían de algún nivel de sesión, F(10, 105) = 4.31, p < 0.001. En general, ambas medidas CR mostraron diferencias significativas entre el grupo de medios y estos medios separados considerablemente en diferentes sesiones de entrenamiento. Para confirmar que los grupos difieren significativamente, pruebas post-hoc de Tukey demostraron que las ratas (AI) intubados alcohol realizaron significativamente peor en ambas medidas de CR que el unintubated de control (UC) y ratas (SI) sham intubados (p < 0.01 para el porcentaje de CR; p < 0.001 para amplitud de CR), que no difirieron entre sí (p> 0.05). Efectos simples pruebas realizadas en el grupo Neonatal x interacciones sesión ambas medidas CR, confirmada que las ratas AI fueron significativamente más deterioradas en la adquisición de CRs iniciando a las 2 de la sesión y realizar en la sesión 6 en comparación con ratas UC y SI (todos p< 0.05), que no difieren unos de otros a lo largo de seis sesiones. La única excepción era amplitud CR adaptable para las ratas SI no comenzó a difieren significativamente de las ratas de AI hasta sesión 3. Estos resultados se muestran en la figura 5A, 5B.

No hubo diferencias significativas en las medidas de UR debido a sexo, grupo de Neonatología o las interacciones de estos factores con el factor de la sesión. Estos resultados negativos indican que cada grupo era capaz de emitir respuestas eyeblink al choque nos igual, y que los déficits de aprendizaje observados en las ratas de AI no fueron influyeron por las diferencias motivacionales o motor de centelleo (figura 6A, 6B).

Figure 5
Figura 5 : Adquisición de rastro condicionado respuesta (media ± SEM). La exposición temprana de alcohol (Grupo IA) había afectada significativamente la adquisición de porcentaje de adaptación respuesta condicionada (CR) (A) y amplitud (B). Traza ECC es inherentemente difícil de adquirir, por lo tanto las medidas son relativamente más bajas para todos los grupos - con retraso ECC, porcentajes pueden llegar a 80-85% en modelos de roedores de FASD21,53. Sin embargo, el rastro, el procedimiento ECC es más impuestos en el hipocampo, que es susceptible a los efectos del alcohol durante el desarrollo temprano del cerebro. * = p < 0.05, ** = p < 0.01, *** = p < 0.001 entre UC y AI ratas; tamaños de muestra se encuentran en paréntesis. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figure 6
Figura 6 : Adquisición de respuestas de unconditioned (media ± SEM). Rendimiento del eyeblink (porcentaje de UR y amplitud de UR) no fue significativamente diferente entre los grupos. La falta de diferencias indican que la intensidad de choque utilizada durante el entrenamiento de la adquisición no alteró diferencialmente motivación en las ratas de AI o su capacidad de producir defensiva parpadear las respuestas al choque, en comparación con ambos grupos de control (UC y SI). Tamaños de muestra se encuentran en paréntesis. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Discussion

Crías de rata neonatal que recibieron alcohol etílico durante días postnatales 4-9 exhibieron rastro eyeblink acondicionado debilitaciones en la edad adulta. Estos resultados apoyan la idea que el alcohol es un teratógeno con aguantar efectos perjudiciales en la función hippocampal. En general, condicionada respuesta en el procedimiento de seguimiento fue menor en las ratas expuestas al alcohol en comparación con las ratas en ambos grupos de control. Las debilitaciones de aprendizaje asociativo en las ratas expuestas al alcohol no fueron influenciadas por las diferencias de motivación o motor (es decir., no hubo diferencias en parpadear a intensidad de choque U.S.).

Mientras que rastro ECC es una herramienta diagnóstica útil para desdoblamiento neuropatología hipocampo inducida por el desafío, los resultados de este método deben colocarse en el contexto adecuado. En primer lugar, los elementos procesales fundamentales en esta demostración implicó la entrega específica de alcohol durante un período conocido de vulnerabilidad para el cerebro en desarrollo, fabricación de hardware de electrodo que permite la grabación de la actividad electromiográfica y ofrece golpes, implante quirúrgico del citado hardware y prueba animal subsecuente usando un paradigma de aprendizaje que evalúa una función cognitiva de interés. En cada etapa del proceso, se debe tener cuidado para no causar daño innecesario/involuntario a los roedores sujetos y para monitorear sus señales de salud regularmente. Los resultados conductuales proporcionan la "ventana" a cognición, un constructo psicológico que sólo está exactamente descrito cuando su salud no se vea comprometida por los errores experimentales que abarcan dosis de alcohol, defectos de hardware o implantación quirúrgica. Así, cada elemento procesal en el proceso de investigación debe ser aplicado de una manera sana con el fin de asegurar que los resultados de ECC se pueden extrapolar a los resultados en los seres humanos. En segundo lugar, el paradigma de la ECC proporciona una idea sobre la naturaleza del aprendizaje asociativo, pero debe procurar no extender resultados con este enfoque y ampliamente los atribuyen a otros dominios cognitivos - como memoria de trabajo, memorias de corto/largo plazo y la conciencia - a menos que uno ha incorporado algunas facetas de estos dominios dentro de un estudio ECC de diseño experimental. Por ejemplo, esta demostración había examinado de la fase de adquisición del aprendizaje de ECC de rastro, pero no examinaron la retención de memoria en las ratas después de completado el entrenamiento. Memoria es un proceso psicológico independiente que debe ser evaluado además de aprendizaje. Por su diseño, uno puede incorporar un intervalo de retención de memoria para evaluar o capacidad de la memoria a corto plazo o a largo plazo. En tercer lugar, el reconocimiento que hay memoria paralelo sistemas54 que pueden funcionar simultáneamente junto con los factores motivacionales, vivenciales y hormonales que contribuyen al comportamiento, es esencial para entender que es la asociatividad (durante ECC) pero uno de los muchos procesos que revelan lo que es "bueno" o "pobre" sobre el aprendizaje. Por último, traza ECC no es una tarea puramente hipocampo dependientes, como otras regiones del cerebro pueden mediar algún componente de la CR. Por lo tanto, una comprensión de las interacciones entre diferentes circuitos neuronales o del tipo de los parámetros de estímulo que se utilizan en un estudio, debe tenerse en cuenta al hacer implicaciones en base a resultados discretos. El cerebelo, por ejemplo, también contribuye al rastro ECC, donde influye en las características topográficas de la CR y CR tiempo, particularmente cuando el ISI es corto en duración. Rastro de ECC no se ve afectado en los seres humanos con daño cerebeloso que se prueban con un intervalo largo rastro (1.000 ms), pero se ve afectado en aquellos que reciben un seguimiento más corto intervalo (400 ms)34. Además, lesiones bilaterales de la corteza prefrontal medial dorsal (mPFC) dirigidos a las regiones agranular anterior del cingulate y medial en ratones, evitar la adquisición de rastro CRs55, mientras que la destrucción del mPFC caudal en conejos produce similares resultados46. Estos resultados también destacan la importancia de considerar las diferencias especies de contribuciones prefrontales cerebelosa cerebro tallo por aprendizaje asociativo, como rastro ECC. Mientras que la exposición neonatal alcohol durante la adquisición de 4-9 afectado PD de CRs de traza de 500 ms para adulto ratas en este estudio y otros47,56, no es el mismo caso para las ratas expuestas al alcohol neonatales que experimentar un intervalo de seguimiento de 300 ms, incluso cuando en una relativamente alta dosis de alcohol (5 g/kg)57, sugiriendo que la debilitación de la traza en las ratas expuestas al alcohol depende de la duración del intervalo del rastro.

En este estudio, el hipocampo se destacó como ser vital importancia para mediar rastro ECC y cuando por la exposición neonatal alcohol, exposiciones daño neural relacionado como se refleja por deficiencias en la adquisición de traza CRs. Debe advirtió, sin embargo, que el circuito cerebelo-cerebro de vástago, particularmente el núcleo interpositus, es esencial para muchas facetas de la ECC, incluyendo la adquisición, la expresión y características topográficas de la CR, dependiendo del tipo de tarea ECC incluyendo rastro ECC36,40,55,58,59. De hecho, este circuito neural interactúa con el hipocampo para la conducción de la expresión de CRs en formas de orden superior de ECC, como rastro ECC60. No está completamente claro si exposición de alcohol durante el desarrollo temprano del cerebro específicamente afecta la función hipocampal en el rastro ECC. Muchas regiones diferentes del cerebro son vulnerables al insulto de alcohol temprano, incluyendo el mPFC, el cerebelo y el hipocampo18,19,23,47,61,62, y es muy probable que el alcohol altera el funcionamiento de estas estructuras en diferentes grados y diversos, pero funcionalmente importantes diferencias en muchos procedimientos ECC. A pesar de las dificultades sobre la interpretación de los resultados de estudios ECC de rastro, adquisición de rastro CRs ha demostrado depender menos de un hipocampo intacto, apoyada por lesión animal estudios42,44,63,64,65. Así, este procedimiento sigue siendo un enfoque altamente valioso para demostrar los vínculos entre la exposición del alcohol del desarrollo trazar acondicionado responder porque el circuito neural subyacente, es mucho mejor entendían que la de otras tareas de dependiente del hipocampo, como lugar de aprendizaje en el laberinto de agua de Morris, reconocimiento de objetos nuevos y contextual y miedo acondicionado.

ECC como forma de conducta a la cognición, del "análisis" tiene amplia aplicabilidad en el campo de desarrollo neuroteratology. De hecho, hallazgos recientes de nuestro laboratorio apoyan la noción que el hipocampo en desarrollo es altamente sensible a los efectos del alcohol, que pueden ser mitigados por diferentes estrategias intervencionistas18,47. El beneficio clave aquí es que con una mejor comprensión de los déficits de aprendizaje ECC rastro inducida por el alcohol, pueden ser predictivos de otros problemas en funciones basadas en el hipocampo fuera aprendizaje asociativo - particularmente los conocidos ser mediado por el neurocircuitry hipocampo mismo.

Aplicación de seguimiento ECC y sus otras variantes (por ejemplo, demora, reversión, discriminación, compuesta) para dilucidar los mecanismos neurobiológicos y sistemas neurales implicados en el aprendizaje asociativo, se puede extender más allá del campo de la investigación del alcohol en el feto. Por ejemplo, este paradigma ha recibido mucha atención en casos humanos y modelos animales de enfermedades psiquiátricas como esquizofrenia66,67, enfermedades neurodegenerativas como la enfermedad de Alzheimer68,69, drogas de abuso70,71,72. Sus ventajas como método de investigación para evaluar la disfunción y función neurocognitiva así son evidentes a través de muchas disciplinas psicológicas y biomédicas, incluyendo la neurociencia.

Disclosures

Los autores no tienen nada que revelar.

Acknowledgments

Este trabajo fue apoyado por una beca para TDT del Alcohol bebida médica investigación Fundación (ABMRF).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Neonatal Alcohol Exposure
190 Proof Ethyl Alcohol (USP) Pharmco-AAPER 225-36000 [ECU Medical Storeroom] Can be substituted; should be USP; avoid using 200 proof ethyl alcohol
Container/Basket for Pups Any
Corn Oil Any Food grade
Heated Water Therapy Pump w/ Pads Gaymar TP-500 To keep pups warm; can be substituted
Hypodermic Needles 22G x 1 in, Sterile Any
Hypodermic Needles 30G x 1/2 in, Sterile Any
Isopropyl Alcohol 70% EMD Millipore PX1840-4 [Fisher Scientific] Can be substituted; reagent grade
www.fishersci.com
Long-Evans Rats (Female and Male Breeders) Charles River Laboratories N/A [ECU Dept. of Comparative Medicine] Age and weight need to be specified; pricing varies by these factors
www.criver.com
Micro Dissecting Scissors, 3.5 in, 23 mm Blades Biomedical Research Instruments 11-2200 For cutting PE tubing
brisurgical.com
Polyethylene 10 Tubing (0.011 in. I.D.; 0.024 in. O.D.) BD Diagnostic Systems 22-204008 [Fisher Scientific] Can be substituted
www.fishersci.com
Polyethylene 50 Tubing (0.023 in. I.D.; 0.038 in. O.D.) BD Diagnostic Systems 22270835 [Fisher Scientific] Can be substituted
www.fishersci.com
Regulated water heater or baby milk bottle warmer Any Optional; helps with warming up cold milk solutions
Tuberculin Syringes, Sterile, 1.0 ml Any
Tuberculin Syringes, Sterile, 10 ml Any Can be used to draw out ethyl alcohol or use appropriate size micropipet
Weigh Scale Any Should have good resolution (in gram units)
Name Company Catalog Number Comments
EMG Headstage Fabrication and Bipolar Electrode Modification
Bipolar Electrode, 2 Channel SS Twisted Plastics One, Inc. MS303/2-B/SPC  ELECT SS  2C TW .008" Must specify custom length of 20 mm below pedestal
www.plastics1.com
Centi-Loc Strip Socket Insulator (aka, Micro Strip) ITT Cannon / ITT Interconnect Solutions CTA4-IS-60* or CTA4-1S-60* *Depends on vendor; see www.onlinecomponents.com or www.avnetexpress.avnet.com
Dental Pliers, Serrated CMF Medicon 390.20.05 Can be substituted; use to crimp wires to male contact pins
www.medicon.de
Micro Dissecting Scissors, 3.5 in, 23 mm Blades Biomedical Research Instruments 11-2200 Only use to cut 3T wires; cutting 10T wires will damage the blade - use the blade of the wire stripper instead
brisurgical.com
PTFE-Coated Stainless Steel Wire, 10T (Bare Diameter .010 in) Sigmund Cohn-Medwire 316SS10T
www.sigmundcohn.com
PTFE-Coated Stainless Steel Wire, 3T (Bare Diameter 0.003 in) Sigmund Cohn-Medwire 316SS3T
www.sigmundcohn.com
Razor Blade Any To strip 1 mm from prongs of bipolar electrode
Relia-Tac Socket Contact Pin, Male Cooper Interconnect 220-P02-100 See Allied Electronics Cat # 70144761
www.alliedelec.com
Tweezers, High Precision, Serrated, 4 3/4 in Electron Microscopy Sciences 78314-00D To grasp 10T wire firmly while stripping PTFE with smooth tweezers
www.emsdiasum.com
Tweezers, High Precision, Smooth, 4 3/4 in Electron Microscopy Sciences 78313-00B
www.emsdiasum.com
Tweezers, Ultra Fine Tips, 4 3/4 in Electron Microscopy Sciences 78510-0 To strip 1 mm of PTFE from one end of 3T wire; grasp shielded portion with smooth tweezers
www.emsdiasum.com
Wire Stripper, 16-26 AWG Any Use the blade end to cut micro strips
Name Company Catalog Number Comments
Eyelid Surgery
Surgical Instruments (High Quality Stainless Steel)
2 x Dressing Forceps, 4 in Serrated Biomedical Research Instruments 30-1205 Can be substituted; extra forceps for grasping electrodes/screws outside of surgery tray
brisurgical.com
Dressing Forceps, 3 in Serrated Biomedical Research Instruments 30-1200 Can be substituted
brisurgical.com
Instrument Tray Biomedical Research Instruments 24-1355 Can be substituted
brisurgical.com
Knife Handle No. 3, 5 in Biomedical Research Instruments 26-1000 Can be substituted
brisurgical.com
Micro Dissecting Forceps, 3.5 in, Fine Points Biomedical Research Instruments 10-1630 Can be substituted
brisurgical.com
Micro Dissecting Forceps, 3.5 in, Smooth Platform (0.3 x 5 mm) Biomedical Research Instruments 10-1720
brisurgical.com
Micro Dissecting Scissors, 3.5 in, Extremely Delicate, 15 mm Blades Biomedical Research Instruments 11-2000 Can be substituted
brisurgical.com
Plain Splinter Forceps, 3.5 in  Biomedical Research Instruments 30-1600 Can be substituted
brisurgical.com
#10 Stainless Steel Surgical Blade for #3 Handle, Sterile Any Can be substituted
0-80 x 0.125 in Stainless Steel Screws Plastics One, Inc. 0-80 x 0.125 Can be substituted
www.plastics1.com
Alcohol Prep Pads, Sterile Fisher Scientific 22-363-750 [Fisher Scientific Can be substituted
www.fishersci.com
Betadine Povidone-Iodine Purdue Frederick Co. 6761815101 [Fisher Scientific] Can be substituted
www.fishersci.com
Betadine Povidone-Iodine Prep Pads Moore Medical 19-898-946 [Fisher Scientific] Can be substituted
www.fishersci.com
Cotton-Tipped Swabs, Autoclavable Any Typically 7.6 cm or 15.2 cm length
Drill Bit for Pin Vise, #55 (0.052 in) Any Metal should resist rusting and corrosion
Gauze Pads, 2 in x 2 in Fisher Scientific 22-362-178 [Fisher Scientific] Can be substituted
www.fishersci.com
General Purpose Latex/Nitrile/Vinyl Gloves Any
Glass Bead Sterilizer Any Sterilize instruments between surgeries
Heated Water Therapy Pump w/ Pads x 2 Gaymar TP-500 Can be substituted; separate pumps are recommended - 1 for surgery, 1 for recovery
Hypodermic Needles 26G x 3/8 in, Sterile Any
Isoflurane Vedco NDC 50989-150-12 Manfacturer can be substituted; veterinary approval may be required
Isoflurane Vaporizer System, Tabletop, Non-Rebreathing Parkland Scientific V3000PK Can be substituted
www.parklandscientific.com
Jewelers Screwdriver w/ 1.8-2 mm Blade Any Metal should resist rusting and corrosion
Ortho-Jet BCA Package (Dental Cement) Lang Dental B1334 Contains powder (1 lb) and liquid
www.langdental.com
Oxygen Tank with Pressure Regulator, Large Local supplier
Porcelain Crucible, High-Form, Glazed, 10 ml CoorsTek, Inc. 07-965C [Fisher Scientific] Can be substituted with Fisher FB-965-I Wide-Form Crucible
www.fishersci.com
Puralube Veterinary Ophthalmic Ointment, Sterile Henry Schein Company NC0144682 [Fisher Scientific] Can be substituted
www.fishersci.com
Quatricide PV-15 Pharmacal PV-15 Antimicrobial disinfectant; can be substituted
www.pharmacal.com
Rat Gas Anesthesia Masks for Stereotaxic Surgery  Stoelting Company 51610
www.stoeltingco.com
Rat Stereotaxic Apparatus w/ Ear Bars (45 Degree) Any 45 degree bars are recommended to prevent damaging eardrums
Roboz Surgical Instrument Milk Roboz Surgical NC9358575 [Fisher Scientific] Can be substituted; for lubricating instruments during autoclaving
www.fishersci.com
Rodent Hair Trimmer Any
Sodium Chloride Fisher Scientific S641-500 [Fisher Scientific] To make 0.9% saline; reagent grade; USP
www.fishersci.com
Stainless Steel Microspatula (Blade: 0.75 L x 0.18 in. W) Fisher Scientific 21-401-15 [Fisher Scientific] Can be substituted
www.fishersci.com
Starrett Pin Vise, 0.000 in - 0.055 in Any Nickel-plated or equivalent recommended to resist rusting and corrosion
Sterile Surgical Gloves Any
Sterilization Wraps, 20 in x 20 in, Autoclavable Propper Manufacturing 11-890-8C [Fisher Scientific] Useful for wrapping autoclavable supplies and on sterile field during surgery
www.fishersci.com
Surgical Drape, Sterile/Autoclavable Any May need to cut to size for rats
Surgical Gown* Any *If required by IACUC
Surgical Mask Any
Tuberculin Syringes, Sterile, 1.0 ml Any
Weigh Scale Any Should have good resolution (in gram units)
Name Company Catalog Number Comments
Eyeblink System and Components (assuming 4-rodent system)
5 Channel Commutator x 4 Plastics One, Inc. SL2 + 3C
www.plastics1.com
Bipolar Electrode Cable, Dual 305 x 4 Plastics One, Inc. 305-305 80CM TT2 (C) Provides plug end to bipolar electrode on rat and to commutator; must be modified
www.plastics1.com
Cable, 5 Channel, Shielded, 26 AWG x 4 Any To fabricate commutator cable; this must be made from scratch
Chamber for Operant Test Box (Inside: 24 H x 23 W x 14 D in) x 4 Med-Associates Can be substituted; inner dimensions should fit operant test box comfortably, with room for acoustical foam; fit with fan - 55-60 dB
www.med-associates.com
Eyeblink System and Software JSA Designs N/A Proprietary and customized for research lab
Heat Shrink Tubing (3/16 in, 1/4 in, 3/8 in, 1/2 in Diameters) Any To protect modified commutator cable soldered ends and splices
Melamine Triple Peak Acoustical Foam w/Black Hypalon (24 x 48 in) McMaster-Carr 9162T5 Can be substituted; cut to fit 4 housing chambers
www.mcmaster.com
Operant Test Box (Exterior 12.5 L x 10 W x 13.5 in H), Complete x 4 Med-Associates ENV-007 Custom Package With stainless steel grid floor and custom top (3 in hole in center for commutator cable)
www.med-associates.com
Oscilloscope (Optional) Any Recommended minimum specs: 200 MHz analog bandwidth, 1 GS/s real-time sampling, 4 channels; see www.picotech.com
/td>
Piezo Tweeters (Speakers) x 4 (7 x 3 in) MCM Electronics 53-805 Must match frequency range specifications for eyeblink system (2500 Hz - 25 KHz)
www.mcmelectronics.com
Soldering Station, Solder, Flux, Tinner Any For soldering 26 AWG cables to female sockets (that fit male relia-tac contact pins) and bipolar plugs
Stimulus Isolators x 4 WPI International A365 These units run on 16-9V alkaline batteries; a suitable rechargeable version (A365R) is available
www.wpiinc.com
Tripolar Electrode Cable for SL3C Commutator x 4 Plastics One, Inc. 335-335 80cm TT3 C Provides plug end to EMG headstage on rat and to commutator; must be modified
www.plastics1.com
USB LED Lights x 4 Any USB-based lights do not cause electrical "noise" with the EMG signals from the rats
www.plastics1.com
Webcams x 4, Surveillance Software Any
PC Computer Running MS Windows OS Any

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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Neurociencia número 126 Eyeblink acondicionado hipocampo trastornos del espectro alcohólico fetal aprendizaje memoria cerebelo
El uso de condicionamiento de clásico de Eyeblink rastro para evaluar disfunción hipocampal en un modelo de rata de trastornos del espectro alcohólico Fetal
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Tran, T. D., Amin, A., Jones, K. G., More

Tran, T. D., Amin, A., Jones, K. G., Sheffer, E. M., Ortega, L., Dolman, K. The Use of Trace Eyeblink Classical Conditioning to Assess Hippocampal Dysfunction in a Rat Model of Fetal Alcohol Spectrum Disorders. J. Vis. Exp. (126), e55350, doi:10.3791/55350 (2017).

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