Summary
La privación del sueño es una herramienta poderosa para investigar la función y regulación del sueño. Describimos un protocolo para privar del sueño a Drosophila utilizando el Aparato Anulador del Sueño, y para determinar el alcance del sueño de rebote inducido por la privación.
Abstract
La homeostasis del sueño, el aumento del sueño observado después de la pérdida de sueño, es uno de los criterios definitorios utilizados para identificar el sueño en todo el reino animal. Como consecuencia, la privación del sueño y la restricción del sueño son herramientas poderosas que se utilizan comúnmente para proporcionar información sobre la función del sueño. Sin embargo, los experimentos de privación del sueño son inherentemente problemáticos en el momento en que el estímulo de privación en sí mismo puede ser la causa de los cambios observados en la fisiología y el comportamiento. En consecuencia, las técnicas exitosas de privación del sueño deben mantener a los animales despiertos e, idealmente, dar como resultado un rebote robusto del sueño sin inducir también una gran cantidad de consecuencias no deseadas. Aquí, describimos una técnica de privación del sueño para Drosophila melanogaster. El Aparato Anulador del Sueño (SNAP) administra un estímulo cada 10s para inducir geotaxis negativas. Aunque el estímulo es predecible, el SNAP previene eficazmente el sueño >95% de la noche, incluso en moscas con un alto impulso de sueño. Es importante destacar que la respuesta homeostática posterior es muy similar a la lograda mediante la privación de la mano. El tiempo y el espaciamiento de los estímulos se pueden modificar para minimizar la pérdida de sueño y, por lo tanto, examinar los efectos no específicos del estímulo en la fisiología y el comportamiento. El SNAP también se puede utilizar para la restricción del sueño y para evaluar los umbrales de excitación. El SNAP es una poderosa técnica de interrupción del sueño que se puede utilizar para comprender mejor la función del sueño.
Introduction
El sueño es casi universal en los animales, sin embargo, su función sigue sin estar clara. La homeostasis del sueño, el aumento compensatorio del sueño después de la privación del sueño, es una propiedad definitoria del sueño, que se ha utilizado para caracterizar los estados de sueño en un número de animales1,2,3,4,5.
El sueño en la mosca tiene muchas similitudes con el sueño humano, incluida una respuesta homeostática robusta a la pérdida de sueño4,5. Numerosos estudios sobre el sueño en la mosca han utilizado la privación del sueño tanto para inferir la función del sueño al examinar las consecuencias adversas que se derivan de la vigilia prolongada, como para comprender la regulación del sueño mediante la determinación de los mecanismos neurobiológicos que controlan la regulación homeostática del sueño. Así, se demostró que las moscas privadas de sueño exhiben deficiencias en el aprendizaje y la memoria6,7,8,9,10,11, 12,plasticidad estructural13,14,15,atención visual16,recuperación de una lesión neuronal17,18,apareamiento y comportamientos agresivos19, 20, proliferación celular21, y respuestas al estrés oxidativo22,23 por nombrar algunos. Además, las investigaciones sobre los mecanismos neurobiológicos que controlan el sueño de rebote han arrojado información crítica sobre la maquinaria neuronal que constituye el homeostato del sueño8,9,23,24,25,26,27,28,29 . Finalmente, además de revelar información fundamental sobre la función del sueño en animales sanos, los estudios de privación del sueño también han informado sobre la función del sueño en estados enfermos30,31.
Si bien la privación del sueño es innegablemente una herramienta poderosa, con cualquier experimento de privación del sueño, es importante distinguir los fenotipos que resultan de la vigilia prolongada, de los inducidos por el estímulo utilizado para mantener al animal despierto. La privación del sueño por privación de la mano o manejo suave, generalmente se considera que establece el estándar para la privación del sueño mínimamente perturbadora. Aquí describimos un protocolo para privar del sueño a las moscas utilizando el Aparato de Anulación del Sueño (SNAP). El SNAP es un dispositivo que entrega un estímulo mecánico a las moscas cada 10 s, manteniendo a las moscas despiertas mediante la inducción de geotaxis negativas(Figura 1). El SNAP priva eficientemente a las moscas del >98% del sueño nocturno, incluso en moscas con alto nivel de sueño8,32. El SNAP ha sido calibrado en moscas sensibles a la explosión, la agitación de las moscas en el SNAP no daña a las moscas; la privación del sueño con el SNAP induce un rebote comparable al obtenido por la privación de la mano7. El SNAP es, por lo tanto, un método robusto para privar del sueño a las moscas mientras controla los efectos del estímulo excitante.
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Protocol
1. Preparación experimental
- Recolecte moscas a medida que eclosión en viales, separando las moscas macho y hembra.
NOTA: Los experimentos de sueño se realizan comúnmente con moscas hembras. Es importante recolectar hembras vírgenes. Las hembras apareadas pondrán huevos que eclosionan en larvas complicando el análisis de los datos. - Moscas domésticas de un solo sexo en grupos de <20.
NOTA: La vivienda de moscas en un entorno socialmente enriquecido (grupos de >50) modula la unidad de sueño6,13 mediciones potencialmente confusas del sueño de rebote. Además, después del enriquecimiento social, el sueño disminuirá en unos pocos días6. Por lo tanto, el sueño basal no es estable, lo que complica el análisis del sueño de rebote. Mantener las moscas en grupos de <20 evita esta posible confusión. - Mantenga las moscas en viales durante 3-5 días en un ambiente ligero y con humedad controlada.
NOTA: La edad y la madurez de las moscas influyen fuertemente en el sueño. El sueño es alto en las moscas de un día de edad y se estabiliza a los 3-5 días de edad4. Las moscas se mantienen típicamente en un horario oscuro de 12 h: 12 h a un 50% de humedad.
2. Preparación de tubos para la grabación del sueño
NOTA: El sueño se monitorea usando monitores de actividad locomotora. Un monitor puede contener 32 moscas alojadas individualmente en tubos de 5 mm de diámetro. Típicamente, los genotipos se analizan en grupos de 16 o 32 moscas.
- Prepare un número apropiado de tubos con comida para moscas en un extremo.
NOTA: Se sabe que la dieta y el metabolismo influyen en el sueño33,34, por lo tanto, es particularmente importante colocar moscas en el mismo alimento en el que fueron criadas. - Selle el extremo de los tubos con cera.
NOTA: La privación del sueño y el rebote es un experimento de cinco días, y la comida puede secarse si no se sella adecuadamente. En tubos debidamente sellados, los alimentos se pueden mantener durante 10 días o más. Por lo tanto, es fundamental asegurarse de que los extremos de los tubos estén bien sellados. Sin embargo, las moscas también pueden atascarse en la comida húmeda. Por lo tanto, ayuda a hacer tubos 1-2 días antes del inicio del experimento. - Coloque individualmente las moscas de estela, que se comportan en tubos de vidrio de 65 mm de largo para la grabación del sueño con un aspirador y enchufe el extremo de los tubos con un tapón de espuma.
NOTA: Las moscas nunca se vuelven a exponer a la anestesia con CO2 cuando se colocan moscas en tubos para registrar el sueño. El aspirador está hecho de tubos de goma con un extremo cubierto con gasa e insertado en una punta de pipeta de 1 ml.
3. Grabación del sueño
- Cargue moscas en tubos en monitores de actividad para monitorear el sueño.
NOTA: El SNAP monitorea las rocas de ida y vuelta de -60 ° a + 60 ° cada ~ 10 s. Los monitores se mantienen a -60 ° durante ~ 5.9s; se necesitan ~ 2.9 s para que la bandeja que sostiene los monitores se mueva de -60 ° a + 60 ° y ~ 1 s para retroceder de + 60 ° a -60 °. La duración del ciclo se puede alterar según sea necesario ajustando el voltaje suministrado al motor.- Tenga cuidado de asegurarse de que los tubos se coloquen en los monitores de actividad en la orientación correcta. En la orientación correcta, el extremo del tubo con comida está en la parte superior del SNAP para garantizar que las moscas no se empujen hacia la comida. Además, el extremo con la comida está en el lado del monitor con el conector de grabación del sueño. Esto permite que los monitores de actividad se orienten correctamente en el SNAP para una privación eficiente del sueño mientras se monitorea simultáneamente la actividad.
- Coloque monitores de actividad en la cámara de grabación para monitorear el sueño.
- Controle el sueño durante al menos dos días completos para estimar el sueño inicial.
NOTA: El día en que las moscas se cargan en monitores de actividad generalmente se excluye como un día de adaptación para permitir que las moscas se adapten a ser alojadas en tubos. El sueño basal se registra durante al menos dos días completos (48 horas) a partir de la mañana siguiente al día en que se cargan las moscas. - Guarde los recuentos de actividad locomotora de las moscas en contenedores de 1 minuto desde el momento de las luces en un día determinado hasta las luces del día anterior utilizando un software de registro de actividad (por ejemplo, de 8 AM a 8 AM).
- Calcule el sueño a partir de los datos de actividad locomotora con macros personalizadas utilizando 5 minutos de inactividad como umbral para un episodio de sueño35.
NOTA: Una serie de métricas de sueño se calculan a partir de los recuentos de actividad locomotora. Estos incluyen el sueño en min/h durante 24 h, el tiempo total de sueño en 24 h, la duración media y máxima del sueño diurno y nocturno36.
4. Privación del sueño y recuperación
- Como las moscas pueden estar privadas de sueño durante períodos de tiempo variables (por ejemplo, 12 h, 24 h y 36 h) y el sueño de recuperación también se puede evaluar a varios intervalos (por ejemplo, 6 h, 12 h, 24 h y 48 h), determine la duración de la recuperación por necesidad experimental. La recuperación del sueño se puede visualizar utilizando una gráfica de ganancia/pérdida de sueño o examinando el porcentaje de sueño recuperado durante un intervalo predeterminado (por ejemplo, 6 h).
- Si el sueño es estable durante los dos días de referencia, en el tercer día, coloque monitores de actividad en el SNAP para la privación del sueño durante la noche.
NOTA: Las moscas exhibirán un rebote de sueño robusto en un rango de tiempos de sueño8,32,37,38,pero el sueño debe ser estable para evaluar de manera confiable el sueño de rebote. El sueño es estable cuando la diferencia en el sueño entre los días basales es de ± 100 min. - Asegúrese de que los monitores de actividad estén asegurados en su lugar con pines de soporte para monitores, cables de monitor enchufados y monitores orientados correctamente con el extremo con alimentos en la parte posterior y barreras de plástico en la parte delantera(Figura 1).
NOTA: El SNAP está diseñado para que la leva gire una vez cada 10 s (Figura 1). El inserto de plástico restablece los tubos empujando los tubos hacia atrás cuando el aparato está en la posición "hacia arriba". El restablecimiento de los tubos es importante para garantizar que todos los tubos tengan el rango completo de movimiento al comienzo de cada ciclo. - Desconecte los monitores de actividad y saque los monitores del SNAP inmediatamente después de encender las luces después de la privación del sueño durante la noche.
NOTA: Es fundamental que se ponga fin a la privación del sueño, y las moscas se colocan en recuperación inmediatamente después de las luces encendidas después de 12 h de privación del sueño durante la noche. Incluso un retraso de 20-30 minutos en la colocación de moscas en la recuperación puede interferir con la extensión del sueño de rebote. - Coloque las moscas en una cámara de grabación donde no serán molestadas durante dos días (48 h) para monitorear el sueño de recuperación.
NOTA: Si la cámara de grabación se está utilizando para otros experimentos, se debe tener especial cuidado para evitar estimular las moscas en recuperación. - Calcule la cantidad de sueño perdido. Para cada mosca individual, calcule la diferencia horaria entre el sueño obtenido durante la privación del sueño y la hora correspondiente durante la línea de base; sumar las diferencias horarias para calcular el sueño total perdido.
- Calcula la cantidad de sueño recuperado. Para cada mosca individual, calcule la diferencia horaria entre el sueño obtenido durante la recuperación y la hora correspondiente durante la línea de base; sumar las diferencias horarias para calcular el sueño total ganado.
NOTA: Si una mosca está realmente privada de sueño es empírico. Por lo tanto, el experimentador debe examinar el porcentaje de sueño perdido. Si la mosca no ha perdido una cantidad suficiente de sueño, puede excluirse del análisis. Aunque esto podría ser necesario para otros enfoques de privación del sueño, rara vez o nunca se requiere para el SNAP. Más comúnmente, el sueño puede no ser estable en una mosca dada antes del inicio de la privación del sueño. Si el sueño no es estable, no se puede calcular la homeostasis. Aceptamos una diferencia máxima de ± 100 min de sueño calculada antes del inicio de la privación del sueño como candidatos para la inclusión. En ocasiones, el sueño de una mosca individual se distribuye de manera desigual a lo largo del día de 24 horas (por ejemplo, algunos individuos pueden obtener el 60-70% de su cuota de sueño durante el día y, por lo tanto, solo pierden una pequeña proporción de su cuota de sueño de 24 horas cuando se les priva durante 12 horas por la noche). Estas moscas se pueden evaluar por separado. - Calcular el porcentaje medio de sueño recuperado (en relación con el valor basal) durante 12 h, 24 h y 48 h del período de recuperación para cada genotipo.
- A partir de los datos de sueño, calcule la duración promedio y máxima del sueño diurno en la línea de base y los días de recuperación para cada genotipo.
NOTA: El sueño de rebote en las moscas se caracteriza por un aumento de la cantidad de sueño y una mayor profundidad del sueño en los días de recuperación. La consolidación del sueño se utiliza como medida de la profundidad del sueño. Los umbrales de excitación también podrían usarse como una medida de la profundidad del sueño.
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Representative Results
Canton S (Cs) se utilizó como una cepa de tipo salvaje. Las moscas se mantuvieron en un horario de luz de 12 h: 12 h de oscuridad y se privó de sueño durante 12 horas durante la noche. La inspección de los perfiles de sueño de las moscas Cs en el día basal (bs), el día de privación del sueño (sd) y dos días de recuperación (rec1 y rec2)(Figura 2A)sugiere que las moscas fueron efectivamente privadas de sueño en el SNAP, y recuperaron el sueño durante el día de acuerdo con los informes observados en la literatura4,5. La efectividad del SNAP para mantener a las moscas despiertas también se ve en la alta actividad (300-350 recuentos / h) exhibida por las moscas durante la privación del sueño(Figura 2B). De hecho, el monitoreo de los recuentos de actividad de las moscas durante la privación del sueño puede ser un barómetro útil de la efectividad del protocolo de privación y / o una medida indirecta del impulso del sueño. Cuando la privación del sueño es ineficaz, las moscas no son tan activas durante el período de privación. Las moscas que están bajo un alto nivel de sueño se duermen rápidamente después de cada estímulo y no atraviesan el tubo tanto35. Tanto el ángulo de inclinación del aparato como la velocidad de la caída son fundamentales para garantizar que las moscas se mantengan efectivamente despiertas sin dañarlas. Cada laboratorio puede optimizar el ángulo y la velocidad ajustando el resorte(Figura 1B)y/o el tamaño y la forma de la leva(Figura 1C y Figura 1D,derecha).
Para estimar cuantitativamente la efectividad de la privación del sueño y de la recuperación, se calculó el sueño perdido durante la privación y luego recuperado en los días de recuperación para cada mosca individual (Figura 2C). Es importante destacar que no hubo cambios significativos en el sueño basal entre el día de privación y el día de referencia (ver 0-12 h en la Figura 2C),lo que indica que el sueño es estable en estas moscas. Una gran diferencia en el sueño en este período de 12 horas (por ejemplo, ± 100 minutos) sugeriría que el sueño no fue estable. El SNAP privó efectivamente a las moscas de >98% de su sueño nocturno. Las moscas recuperaron ~ 20% de su sueño en las primeras 12 h y no recuperaron el sueño adicional durante la noche, como se informó anteriormente. Sin embargo, las moscas comenzaron a recuperar el sueño al día siguiente de tal manera que recuperaron ~ 36% de su sueño durante 48 h de recuperación(Figura 2D). 30 - 40% de sueño recuperado durante 48 h es bastante típico para las moscas salvajes privadas de sueño usando el SNAP.
La homeostasis del sueño se caracteriza tanto por el aumento de la duración del sueño como por el aumento de la profundidad del sueño durante el período de recuperación después de la privación. La consolidación del sueño diurno se usa comúnmente como una lectura de la profundidad del sueño. La consolidación del sueño se puede evaluar como la duración promedio de la sesión de sueño durante todo el día(Figura 2E). Sin embargo, a medida que la presión del sueño se disipa durante la recuperación, la duración promedio del sueño se reducirá a medida que avance el día. Por lo tanto, con frecuencia es útil examinar también los cambios en la duración máxima del sueño que puede proporcionar una métrica más sensible(Figura 2F).
| Método de privación del sueño | Número total de artículos | % papeles / técnica | Recuperación media evaluada |
| CHASQUEAR | 52 | 37.14% | 33 ± 3 |
| Vórtice/Temblor aleatorio | 49 | 35.00% | 18 ± 3 |
| Privación de manos | 9 | 6.43% | 36 ± 11 |
| SD termogenética | 15 | 10.71% | 36 ± 12 |
| No especificado | 15 | 10.71% | 29 ± 10 |
Tabla 1: Estudio de los diferentes métodos de privación del sueño utilizados en la literatura. Solo 116 /254 artículos utilizaron la privación del sueño. El número de artículos que utilizan cada método = "Número total de artículos". La fracción de artículos que utilizan cada método = "% de papeles / técnica". La duración media de la recuperación evaluada para cada método = "Recuperación media evaluada". SD - Privación del sueño. SNAP - Aparato anulador del sueño
| Longitud de la SD | Total de estudios |
| < 6 h | 12 |
| 6 h | 23 |
| >6 h y < 12 h | 17 |
| 12 horas | 69 |
| >12 h y <24 h | 7 |
| 24 horas | 19 |
| > 24 h | 9 |
| SD crónica | 4 |
| Cualquier SD | 160 |
Tabla 2. Duración de la privación del sueño realizada en diferentes estudios. SD - Privación del sueño
Figura 1. El Apparatus que anula el sueño (SNAP). A)Vista frontal del aparato. El SNAP puede acomodar 8 monitores de actividad en dos filas; los pasadores de soporte sujetan los monitores en su lugar. Las piernas se pueden ajustar para ayudar a colocar el aparato en la orientación correcta. B)Vista de cerca del motor y el resorte que balancea el aparato hacia adelante y hacia atrás. El motor gira una leva que inclina el aparato hacia atrás a la posición "arriba" y comprime el resorte. La liberación del resorte de la compresión hace que el aparato vuelva a la posición "hacia abajo". C)Izquierda - Vista lateral del aparato en la posición "abajo". Los pines de soporte sujetan los monitores; una ranura para cable de monitor garantiza que los cables de monitor se mantengan en su lugar. Las almohadillas ayudan a amortiguar el impacto del aparato que se acopla a la posición "hacia abajo". Derecha - Vista de cerca de la leva. D)Vista lateral izquierda del aparato en la posición "arriba". Derecha - La rotación en sentido contrario a las agujas del reloj de la leva inclina el aparato en la posición "hacia arriba". Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 2. Resultados experimentales. A)Diagramas de sueño de las moscas Cs durante los cuatro días del experimento: el día de referencia (bs), el día de privación del sueño (sd) y dos días de recuperación (rec1 y rec2). B)Recuento promedio de la actividad locomotora de las moscas en el día de la privación del sueño. Las moscas estaban privadas de sueño de las horas 12-24. C)Curso de tiempo de privación y recuperación del sueño. Las moscas Cs fueron privadas de sueño de las horas 12 a 24, y se les permitió recuperarse de la hora 24 a 72. El SNAP privó efectivamente a las moscas de >98% de sueño, que se recuperó parcialmente durante 48 h (n = 12 moscas, Medidas repetidas ANOVA para el tiempo, F [70,1470]= 12.97, p < 10-15). D)Porcentaje de sueño recuperado a lo largo de 48 h. Las moscas recuperaron ~ 20% de su sueño durante 12 h, y ~ 36% de su sueño durante 48 h. E) Consolidación del sueño para cada día del experimento según lo medido por la duración promedio del sueño durante el día. El sueño está más consolidado en el primer día de recuperación en comparación con el valor basal (p <0,05, prueba t). F)Consolidación del sueño para cada día del experimento medido por la duración máxima del sueño durante el día. El sueño está más consolidado en el primer día de recuperación en comparación con el valor basal (p <0,05, prueba t). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
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Discussion
El sueño en Drosophila se caracterizó de forma independiente en 2000, por dos grupos4,5. En estos estudios pioneros, las moscas se vieron privadas del sueño por un manejo suave (es decir, privación de la mano) y se demostró que exhiben una respuesta homeostática robusta a la privación del sueño durante la noche. Es importante destacar que con cualquier experimento de privación del sueño es crucial controlar los posibles efectos de confusión del método utilizado para mantener al animal despierto. Los estudios de privación de manos establecen el punto de referencia para los estudios de homeostasis de moscas como un medio mínimamente disruptivo de privar de sueño a las moscas. El SNAP priva eficientemente a las moscas del sueño del >98% del sueño nocturno y, lo que es más importante, induce un rebote del sueño comparable al obtenido con la privación de la mano4,7.
Desde los estudios fundacionales que definen el sueño en moscas, se han desarrollado una serie de métodos para evaluar la homeostasis del sueño en moscas de una manera de alto rendimiento7,9,39,40,41. Encuestamos ~ 250 artículos sobre el sueño en moscas y encontramos ~ 46% de estos artículos publicados informaron haber estado usando la privación del sueño para evaluar la regulación o función del sueño(Tabla 1). Una serie de métodos diferentes indujeron efectivamente un rebote del sueño en las moscas. Curiosamente, de los estudios que han evaluado el rebote del sueño, los protocolos utilizados para la privación del sueño y el rebote del sueño diferían. En concreto, tanto la duración de la privación del sueño(Tabla 2)como la duración para la que se evaluó el rebote(Tabla 1)variaron sustancialmente, lo que podría complicar las comparaciones de los resultados obtenidos con diferentes protocolos. Se sabe que el rebote del sueño en las moscas persiste hasta 48 horas después de la privación del sueño5. En consecuencia, creemos que una descripción exhaustiva de los efectos de una manipulación del sueño dada sobre la homeostasis se obtiene mejor cuando se evalúa el rebote homeostático durante un período de recuperación de 48 h.
Es importante tener en cuenta que privar a las moscas del sueño durante el día no aumenta constantemente el sueño4. Por lo tanto, comenzar un protocolo de privación del sueño de 24 horas con las luces encendidas y continuar hasta el día siguiente no mejoraría adicionalmente el sueño de recuperación en comparación con un protocolo de privación del sueño de 12 horas que comienza con las luces apagadas. De hecho, el rebote del sueño calculado puede ser menor, ya que incluirá el sueño diurno no regulado homeostáticamente además del sueño nocturno. Sin embargo, la observación de que la privación del sueño durante el día no induce un rebote homeostático puede utilizarse para controlar los posibles efectos de confusión del método de privación del sueño. Así, las moscas privadas de sueño durante la noche en el SNAP se comparan con las moscas que reciben un estímulo comparable durante el día7.
Además de ser utilizado para la privación total del sueño, al cambiar la frecuencia del estímulo, el SNAP también se puede utilizar para restringir y fragmentar crónicamente el sueño7,42,imitando así las condiciones de pérdida crónica de sueño en humanos. Además, al entregar estímulos en pasos de frecuencia creciente, el SNAP también se puede usar para medir los umbrales de excitación8. Por lo tanto, el SNAP es una forma fácil de privar y restringir eficazmente el sueño de las moscas, evaluar la respuesta homeostática y medir otras características del sueño.
El SNAP puede caber en una incubadora de moscas de laboratorio estándar, pero definitivamente molestará a las moscas en la incubadora que no forman parte del experimento. Afortunadamente, el SNAP se puede colocar en un lugar aislado para privar a las moscas del sueño sin perturbar otros experimentos en curso. Dado que el sueño de recuperación es frágil, se debe tener cuidado para garantizar que el sueño de recuperación se lleve a cabo en un lugar tranquilo.
Complementando los estudios de privación del sueño, se han desarrollado herramientas genéticas y farmacológicas para mejorar el sueño en moscas8,43,44. Por lo tanto, la capacidad de modular fácilmente el sueño bidireccionalmente permitirá que la investigación del sueño con mosca continúe proporcionando información profunda sobre la regulación y la función del sueño.
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Disclosures
Los autores no tienen nada que revelar.
Acknowledgments
Este trabajo fue apoyado por las subvenciones de los NIH 5R01NS051305-14 y 5R01NS076980-08 a PJS.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Locomotor activity tubes | |||
| Fisher Tissue Prep Wax | Thermo Fisher | 13404-122 | Wax used for sealing tubes |
| Glass tubes | Wale Apparatus | 244050 | We cut 5mm diameter Pyrex glass tubes into 65mm long tubes to record sleep. Pre-cut tubes can also be purchased. |
| Nutri Fly Bloomington Formulation fly food | Genesee Scientific | 66-113 | Labs might use their own fly food recipe. It is important that sleep be recorded on the same food that flies were reared in. |
| Rotary glass cutting tool | Dremel Multi Pro | 395 | Used to cut 65mm long glass tubes |
| Monitoring Sleep | |||
| DAM System and DAMFileScan software | Trikinetics | Software used to acquire data from DAM monitors and save the acquired data in an appropriate format | |
| Data acquisition computer | Lenovo | Idea Centre AIO3 | A equivalent computer from any manufacturer can substitute |
| Drosophila Activity Monitors | Trikinetics | DAM2 | These monitors are used to record flies' locomotor activity |
| Environment Monitor | Trikinetics | DEnM | Not essential, but an easy way to monitor environmental conditions in the chamber where sleep is recorded |
| Light Controller | Trikinetics | LC4 | A convenient way to control the timing of when the SNAP is turned on and off |
| Power Supply Interface Unit for DAM | Trikinetics | PSIU-9 | Required for data acquisition computers to record Trikinetics locomotor acitvity data |
| RJ11 connector | 7001-64PC | Multicomp | DAM monitors accept RJ11 jacks |
| Splitters | Trikinetics | SPLT5 | Used to connect upto 5 DAM monitors |
| Telephone cable wire | Radioshack | 278-367 | Phone cables to acquire data from DAM monitors |
| Sleep Deprivation | |||
| Power supply | Gw INSTEK | GPS-30300 | Power supply for the SNAP |
| Sleep Nullifying Apparatus | Washington University School of Medicine machine shop |
References
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