실험적 전이성 흑색종 마우스 모델: 폐 내 흑색종 세포의 전이 가능성을 연구하기 위한 플랫폼

JoVE Encyclopedia of Experiments

암 연구

0 조회수 • 3:52 분 • April 30th, 2023

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- 실험적 전이 모델은 혈관 내 주사 후 특정 부위에서 종양 세포가 유출 및 증식할 가능성을 평가하는 데 도움이 됩니다. 시작하려면 적절한 배지를 사용하여 원하는 농도의 흑색종 세포의 단일 세포 현탁액을 준비합니다. 현탁액을 주사기에 넣습니다.

다음으로, 쥐를 챔버에 구속하고 꼬리에 접근할 수 있도록 고정합니다. 마우스를 90도 회전하여 측면 정맥을 시각화합니다. 열 램프를 사용하여 주변 온도를 높여 꼬리 정맥을 확장시킵니다. 이제 바늘을 꼬리의 말단 쪽으로 삽입하고 준비된 흑색종 세포 현탁액을 확장된 정맥에 주입합니다.

주입된 전이성 종양 세포는 순환계를 통해 이동합니다. 결국, 이러한 세포 중 일부는 순환계에서 폐와 같은 먼 장기로 퍼져 나갑니다. 이러한 종양 세포는 새로운 미세환경에 적응하여 증식하고 실험적 전이성 병소를 확립합니다.

다음 프로토콜에서는 B16-BL6 흑색종 세포의 꼬리 정맥 주입을 마우스 모델에 주입하여 전이 가능성을 연구하는 방법을 시연합니다.

- 모든 B16-BL6 세포 현탁액이 준비된 후 마우스를 선택합니다. 꼬리를 잡고 동물을 뒤쪽부터 구속기로 안내합니다. 마우스의 몸통이 메인 챔버에 있고 꼬리가 장치 외부에 있을 때 동물을 구속기의 끝으로 당깁니다.

그런 다음 재분배기 플런저를 삽입하고 마우스가 고정될 때까지 플런저를 계속 누릅니다. 동물이 제자리에 놓이면 측면 꼬리 정맥 중 하나가 위쪽을 향하도록 마우스를 90도 회전합니다. 그런 다음 알코올 패드를 사용하여 정맥이 가장 잘 보이는 쥐의 꼬리 측면을 세게 청소합니다.

주입을 준비하려면 먼저 밀리리터당 50만 개의 현탁액 중 300마이크로리터를 주사기에 모읍니다. 그런 다음 주사기를 뒤집고 옆으로 튕기고 플런저를 밀어 주사기에서 기포를 배출합니다. 기포가 제거되면 세포 배양을 배출하여 주사기에서 최종 부피 250마이크로리터를 생성합니다.

주로 사용하지 않는 손으로 마우스 꼬리를 뻗습니다. 집게손가락이 꼬리의 근위부 끝을 들어 올리고 엄지손가락이 원위부를 누르도록 잡습니다. 주로 사용하는 손으로 바늘을 꼬리의 말단 끝을 향한 정맥에 아래쪽 각도로 1분 정도 삽입합니다. 그런 다음 바늘을 더 삽입하여 꼬리 정맥의 각도와 일치하도록 조정합니다.

바늘을 꼬리 정맥으로 약 1cm 삽입한 후 주사기를 안정적으로 유지하면서 플런저를 밀기 시작합니다. 입구 부위에 거즈를 대고 출혈을 멈춥니다. 세포 현탁액이 배출되면 정맥에서 바늘을 제거하고 폐기합니다. 그런 다음 구속기에서 플런저를 제거하고 마우스를 수용 케이지에 넣습니다.

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마지막 업데이트: 15 8월 2026