Name: 작은 쥐의 Cystometry의 사용 : 방광 Chemosensation의 연구 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-21T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 8 s
Description: 배우세요 작은 쥐의 방광 기능을 평가하는 Cystometry 기술을 통해 화학 물질이 배뇨 패턴에 미치는 영향을 연구하는 방법을. 이 기법은 생리학적 조건에서 방광의 저장 및 배뇨 기능을 반복 측정할 수 있습니다.

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이 작품은 벨기에 연방 정부 (IUAP P6/28), 학술 진흥 재단 - 플랑드르 (FWO) (G.0565.07 및 G.0686.09), Astellas 유럽 재단 상 수상 2009 구 Leuven의 연구위원회에서 보조금에 의해 지원되었다 (고아 2009 / 07, EF/95/010 및 PFV/10/006). PU 우리는 학술 진흥 재단 - 플랑드르 (FWO)의 박사 동문입니다. 메가바이트은 마리 퀴리의 동료입니다. FWO의 DDR은 기본 - 임상 동료.

1. 실험실 동물 <ol><li> 동물 (마우스, 쥐)이 12 시간 빛 어두운주기 물과 표준 식품 펠릿에 광고 libitum 접속 설비를 갖춘 전문 동물 시설에 자리 잡고 있습니다. 동물의 연령 및 성별 모두 필요에 따라 표준화해야합니다 중요한 매개 변수입니다. 12주 세 여성 동물 5,6 - 우리가 일반적으로 10 cystometry을 수행합니다. </li><li> 모든 동물 실험은 유럽 연합 (EU) 지역위원회 지침에 따라 수행과 지역 윤리위원회에 의해 승인됩니다. </li></ol> 2. 마취 <ol><li> 그 반감기는 짧은으로 인해 복용에 쉽게이기 때문에 Isoflurane 마취는 작은 수술 절차를 수행하는 데 사용됩니다. isoflurane을 사용하면 소기 적절한 폐기물 가스가 필요합니다. <ol class="lalpha"><li> 동물 순수 산소 isoflurane 5퍼센트 (1 L / 분)와 가스에 폐쇄 상자에 배치됩니다. </li><li> 해당 리터의 유도, 마취 후1리터 / 1 분 산소 - - isoflurane 1.5 % 거시기는 0.8의 작은 마스크 (컷 10 ML의 주사기)에 의해 유지됩니다. </li></ol></li><li> 마우스의 경우, 우레탄 마취는 기능 녹음 (cfr. 인프라)에 사용됩니다. 대부분의 다른 anesthetics는 대조적으로, 방뇨 반사이 마취 에이전트 사에 의해 억압되지 때문에 우레탄 마취는 기능 녹음하는 동안 사용됩니다. 우레탄 1.2 g / kg의 체중은 (SC) 60 분 녹음이 시작되기 전에 피하 관리합니다. 필요한 경우, 적절한 마취를 얻기 위해 필요한 우레탄의 복용은 피하에 추가 용량을 (0.1 g / kg) 관리에 의해 titrated 할 수 있습니다. 이것은 주목해야하지만, 그 추가 마취 voiding 효율성과 결과적으로 방뇨 주파수 7,8을 변경할 수 있습니다. 따라서, cystometric 녹음 면밀히 모니터하고 제어 동작에서 상당한 편차가 관찰 될 때마다 폐기해야합니다. 동안 Anesthetics가 관리하지 않아야 테스트화합물은 데이터의 오해를 피하기 위해 적용됩니다. </li></ol> 3. 수술 - 방광 카테터에 주입 <ol><li> 수술기구는 사용하기 전에 압력솥에 소독되어 있습니다. , 동물의 복부를 면도 에탄올 70%로 소독하고 방광을 노출 할 수있는 낮은 중간 선을 개복술을 수행합니다. </li><li> 수술 현미경에서 비 흡수성, 모노 필라멘트의 봉합을 (크기 6-0)를 사용하여 방광 돔에서 지갑 문자열 봉합을 배치합니다. </li><li> 지갑 문자열 안에 작은 cystostomy을 (우리는 우선적으로 18 G 바늘을 사용)을 수행하고이 구멍을 통해 끝 부분에 작은 커프 (조심스럽게 튜브를 가열하여 얻은)로, PE 50 폴리에틸렌 카테 테르를 삽입합니다. 손에 얇은 튜브 (PE 10) 높은 더 많은 변수 저항이 있습니다. 튜브는 에탄올 70 % 용액을 넣어하거나 압력솥에 소독하여 소독 할 수 있습니다. 주입하기 전에 튜브는 식염수에 플러시해야합니다. </li><li> 지갑으로 str을 확보외과 의사의 매듭과 관 주위에 들죠. 종 모양의 팁까지 부드럽게 바깥쪽으로는 바로 봉합 아래 위치 카테터를 당겨. 누출 방지 할 수있는 봉합에 대한 18 G 카테터의 일부를 밀어 넣습니다. </li><li> 부드럽게 누수를 확인하기 위해 - 생리의 작은 볼륨 (200 μl 100) 달이다. 누수가 존재하면, 추가로 봉합을 배치해야합니다. </li><li> 절개의 위쪽 부분에있는 카테 테르를위한 통로를두고, 모노 필라멘트의 봉합을 사용하여 복부 근육을 닫습니다. </li><li> 터널 속이 빈 금속 막대를 사용하여 interscapular 지역 관​​은,이를 실험이 진행되는 동안 튜브를 물에 동물을 방지한다. </li><li> 피부는 비 흡수성, 모노 필라멘트의 봉합을 사용하여 문을 닫습니다. 주입 카테터은 그 투자율을 확인하는 식염수 플러싱된다. </li><li> 동물 각성하기 전에, 진통제는 (buprenorphine, 0.05 밀리그램 / kg) 피하 주어집니다. </li></ol> 4. 설치 및 Cystometry <ol><li> 실험 questi에 따라(그리고 종 사용)에 cystometry가 깨어 (구속 또는 무제한) 또는 우레탄 - anesthetized 동물에 수행됩니다. cystometry은 절제된 환경에서 침착하는 경향이 의식 쥐에 완벽하게 가능한 반면 마우스 3,5,6,9를 사용할 때, 우리는 일반적으로 우레탄 마취 (피하 1.2 밀리그램 / kg)에서 cystometry을 수행합니다. </li><li> anesthetized 마우스에서 몸의 온도가 지속적으로 모니터링하고 36.5에 보관됩니다 ° C ± 0.2 ° C의 온도 프로브 및 가열 램프에 의해. </li><li> 설정은 제조업체의 지시에 따라 모든 실험을하기 전에 교정된다. </li><li> 주입 카테터는 한쪽과 (하버드 장치), 다른 한편으로는 주입 펌프에 압력 변환기 (에드워즈 Lifesciences)에 연결되는 3 방향 탭에 luer 스텁에 의해 연결되어 있습니다. 압력 변환기는 데이터 수집 시스템 (DI-730-USB, Dataq 악기)에 증폭기 (78534c 모니터, 휴렛 패커드)과 공동 통해 연결되어mputer. Windaq / 라이트 소프트웨어는 녹음에 사용할 수 있습니다. </li><li> 주입 펌프 예를 들어,에서 염분이나 PBS의 주입을 가능하게 시작, 100 μl / 분 (쥐)을 20 μl / 분 (쥐). intravesical 압력이 녹화되는 동안 같은 방광은 일정한 속도로 입력됩니다. </li><li> 그림 5는 일반적인 압력 추적 묘사 : 특정 볼륨 / 압력 도달 할 때까지 유체 주입하는 동안, 방광의 느린 압력 축적은 방뇨 기준 액에 도달이 있습니다. 일단이 기준 액은 방광이 축소됩니다에 도달하고 이후 요도 조임근이 열립니다, 요도를 통해 소변의 흐름을 수 있도록합니다. 따라서, 방광이납니다, 수축이 중지되고 압력은 &#39;기초&#39;수준으로 다시 떨어질 것이다. </li><li> 쥐가 신진 대사 케이지와 디지털 균형을 위의 위치에 따라, voided 볼륨이 voided 볼륨에 대한 정보를 제공 동시에 측정 할 수 있습니다. 마일의 작은 voided 볼륨으로 인해CE는, 그것은이 시스템을 사용하여 매우 도전이 될 수 있습니다. 따라서 voided 볼륨이 voiding 전후 무게가 작은 여과지를 사용하여 결정됩니다. </li><li> 일반적으로, 우리는 시스템이 30 분의 녹화 기간이 다음 30 분에 대한 평형 보자. 그런 다음, 약물이 체계적으로 또는 intravesically 관리 할 수​​ 있으며, 또 다른 30 ​​분이 기록되어 있습니다. </li><li> 기록 된 데이터는 정량 분석​​을위한 전문 소프트웨어로 가져올 수 있습니다. csv 파일로 내보낼 수 있습니다. 우리는 일반적으로 (OriginLab 공사, MA, USA) 오리진을 사용합니다. </li><li> 실험 후, 동물 자궁 경부 전위 (마우스) 또는 CO 2 중독증 (쥐)에 의해 희생되어 있습니다. </li></ol> 5. 대표 결과 <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig1.jpg" /> 그림 1. 개복술 개요. A) 위로 향한 위치에 쥐를 놓습니다. B) 워시와 antiseptically 외과 사이트를 준비합니다. 피부의 C) 절개. D) 절개 OF 복부 근육과 방광 노출. <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig2.jpg" /> 그림 2. 지갑 문자열 봉합. <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig3.jpg" /> 3. 카테 테르의 주입을 그림. <img alt="그림 4" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig4.jpg" /> 그림 4. 카테 테르의 Tunnelling. 의식 쥐와 anesthetized 마우스 생리의 intravesical 재관류 동안 얻은 압력 측정치의 예는 그림 5에 표시됩니다. 여러 개의 매개 변수는 압력 신호 (intercontractile 간격, 기준 압력과 임계 압력을 예를 들어)에서 추출 할 수 있습니다. 이 매개 변수의 포괄적 인 설명을 보려면 앤더슨 외. (심판 4) 및 Yoshiyama 외를 참조하시기 바랍니다. (<html> 심판이 10). 우리는 최근에 겨자 오일의 분자 타겟 (MO), 긴 염증과 같은 방광 11,12 등의 내장 기관의 hyperalgesia의 실험 모델에 사용 된 반응성이 매우 높은 화합물을 식별 할 수 cystometry를 사용하고 있습니다. 10 MM MO의 Intravesical 주입은 야생 형 생쥐의 voiding 주파수에 강한 증가 (intercontractile 간격의 감소) (그림 6A, B)와 voided 볼륨 6 감소 유도. 흥미롭게도, MO는 MO 수용체 TRPA1의 결핍 쥐에서 유사한 변화를 유도. 반면에, MO는 WT 마우스에 비해 Trpv1 KO 마우스의 cystometric 매개 변수의 많은 약한 변화를 유도하고 Trpa1/Trpv1 KO 마우스에 영향없이했습니다. 함께 펩타이드 (CGRP) 6 관련 칼시토닌 유전자의 릴리스 측정이 데이터는 TRPV1은 MO에 의해 유도 내장 염증에 중요한 역할을 할 수 있다는 것을 입증 나타냅니다. ve_content &quot;&gt; <img alt="그림 5" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig5.jpg" /> 그림 5. 의식 좋아하지 (A)와 anesthetized 여성 마우스 (B)에 기록 intravesical 압력의 대표 흔적. 낮은 압력 &quot;기준 압력&quot;(빨간색 화살표)로 정의됩니다. 충전 단계의 끝에서 압력이 파란색 화살표로 표시되어있다. 압력 차이에 의해 구분이 점, 사이에 주입 유체의 볼륨 수있는 방광 벽의 준수 (컴플라이언스는 = 주입 볼륨 / (임계 압력의 계산 -. 기준 압력) &quot;intercontractile 간격&quot;(- 이리)이 사이의 시간 이 voiding 수축. <img alt="그림 6" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig6.jpg" /> 야생 유형과 Trpa1, Trpv1 및 Trpa1/Trpv1 녹아웃 마우스에서 cystometry 패턴에 겨자 기름의 intravesical 응용 프로그램의 그림 6. 효과.(A) 생리와 10 MM MO의 주입에 대응 WT, Trpa1 KO, Trpv1 KO와 Trpa1/Trpv1 KO 마우스에 기록 intravesical 압력 변화를 대표 예. 전, MO의 intravesical 주입 과정에서의 평균 순간 voiding 주파수의 (B) 시간 코스입니다. 모든 마우스의 경우, 데이터는 생리 주입하는 동안 얻은 평균 주파수로 표준화되었다. 이러한 데이터는 Elsevier의 허가와 함께 Everaerts 외. (심판 6)에서 구성된다.

<ol><li>Everaerts, W., Gevaert, T., Nilius, B., De Ridder, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+origin+of+bladder+sensing%3A+Tr%28i%29ps+in+urology%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourol.+Urodyn%22%5BJournal%5D)">On the origin of bladder sensing: Tr(i)ps in urology.</a> Neurourol. Urodyn. 27, 264-2673 (2008).</li>
<li>Fry, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+and+their+use+in+understanding+lower+urinary+tract+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourol.+Urodyn%22%5BJournal%5D)">Animal models and their use in understanding lower urinary tract dysfunction.</a> Neurourol. Urodyn. 29, 603-608 (2010).</li>
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<li>Everaerts, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+capsaicin+receptor+TRPV1+is+a+crucial+mediator+of+the+noxious+effects+of+mustard+oil%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">The capsaicin receptor TRPV1 is a crucial mediator of the noxious effects of mustard oil.</a> Curr. Biol. 21, 316-321 (2011).</li>
<li>Yoshiyama, M., Roppolo, J. R., Thor, K. B., de Groat, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+LY274614%2C+a+competitive+NMDA+receptor+antagonist%2C+on+the+micturition+reflex+in+the+urethane-anaesthetized+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Effects of LY274614, a competitive NMDA receptor antagonist, on the micturition reflex in the urethane-anaesthetized rat.</a> Br. J. Pharmacol. 110, 77-86 (1993).</li>
<li>Yoshiyama, M., Roppolo, J. R., de Groat, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+MK-801+on+the+micturition+reflex+in+the+rat--possible+sites+of+action%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Exp.+Ther%22%5BJournal%5D)">Effects of MK-801 on the micturition reflex in the rat--possible sites of action.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 265, 844-850 (1993).</li>
<li>Boudes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+Characterization+of+a+Chronic+Cyclophosphamide-Induced+Overactive+Bladder+Model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourol.+Urodyn%22%5BJournal%5D)">Functional Characterization of a Chronic Cyclophosphamide-Induced Overactive Bladder Model in mice.</a> Neurourol. Urodyn. , (2011).</li>
<li>Yoshiyama, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex-related+differences+in+activity+of+lower+urinary+tract+in+response+to+intravesical+acid+irritation+in+decerebrate+unanesthetized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Sex-related differences in activity of lower urinary tract in response to intravesical acid irritation in decerebrate unanesthetized mice.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 295, R954-R960 (2008).</li>
<li>McMahon, S. B., Abel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+the+study+of+visceral+pain+states%3A+chronic+inflammation+of+the+chronic+decerebrate+rat+urinary+bladder+by+irritant+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">A model for the study of visceral pain states: chronic inflammation of the chronic decerebrate rat urinary bladder by irritant chemicals.</a> Pain. 28, 109-127 (1987).</li>
<li>Du, S., Araki, I., Yoshiyama, M., Nomura, T., Takeda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+receptor+potential+channel+A1+involved+in+sensory+transduction+of+rat+urinary+bladder+through+C-fiber+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Transient receptor potential channel A1 involved in sensory transduction of rat urinary bladder through C-fiber pathway.</a> Urology. 70, 826-831 (2007).</li>
<li>Streng, T., Santti, R., Talo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Similarities+and+differences+in+female+and+male+rat+voiding%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourol.+Urodyn%22%5BJournal%5D)">Similarities and differences in female and male rat voiding.</a> Neurourol. Urodyn. 21, 136-141 (2002).</li>
<li>Igawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cystometric+findings+in+mice+lacking+muscarinic+M2+or+M3+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Cystometric findings in mice lacking muscarinic M2 or M3 receptors.</a> J. Urol. 172, 2460-2464 (2004).</li>
<li>Schroder, A., Newgreen, D., Andersson, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detrusor+responses+to+prostaglandin+E2+and+bladder+outlet+obstruction+in+wild-type+and+Ep1+receptor+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Detrusor responses to prostaglandin E2 and bladder outlet obstruction in wild-type and Ep1 receptor knockout mice.</a> J. Urol. 172, 1166-1170 (2004).</li>
<li>Chen, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+of+the+lower+urinary+tract+in+mice+lacking+alpha1d-adrenoceptor%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Function of the lower urinary tract in mice lacking alpha1d-adrenoceptor.</a> J. Urol. 174, 370-374 (2005).</li>
<li>May, V., Vizzard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bladder+dysfunction+and+altered+somatic+sensitivity+in+PACAP-%2F-+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Bladder dysfunction and altered somatic sensitivity in PACAP-/- mice.</a> J. Urol. 183, 772-779 (2010).</li>
<li>Thorneloe, K. S., Meredith, A. L., Knorn, A. M., Aldrich, R. W., Nelson, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Urodynamic+properties+and+neurotransmitter+dependence+of+urinary+bladder+contractility+in+the+BK+channel+deletion+model+of+overactive+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Renal.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Urodynamic properties and neurotransmitter dependence of urinary bladder contractility in the BK channel deletion model of overactive bladder.</a> Am. J. Physiol. Renal. Physiol. 289, 604-610 (2005).</li>
</ol>

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

여기에 제시된 cystometry 기술은 동물 모델에서 방광 기능의 생체 측정에 수행 할 수 있습니다. 쥐가 아마도 가장 많이 사용되는 동물 모델이다. 마우스가 처리 할 더 어렵습니다하지만, 유전자 조작 동물을 사용하는 이점을 제공합니다. 때문에 주입 카테터와 intravesical 압력에 영향을 미칠 수있는 내부 - 복부 압력의 변화 느슨해의 결과로 매우 활성화하는 경향이 의식 마우스를 사용할 수있는 기술적 인 문제로, 우리는 전체 cystometry 동안 우레탄 사람에게 anesthetized 유지하기 조언 프로토콜입니다. 물론, 진정제 쥐를 가지고있는 데 대한 장점은 anesthetics의 효과에 대한 무게해야합니다. 따라서 우레탄은 이후 voiding 잔류 볼륨 7,8에 큰 영향을 가질 수 있습니다. 우리는 녹음과 중재를 시작하기 전에 우리가 마취의 안정 학위를 소지 할 때까지 따라서 우리는 기다립니다. 연구자들은 t을 고려해야합니다...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 상업 이름, 회사, </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 </td></tr><tr><td> 우레탄 </td><td> 우레탄, 시그마 - 알드리치 </td><td> 315419 </td><td> 그룹 2B 발암 물질 </td></tr><tr><td> isoflurane </td><td> Isoba, Schering-북두칠성 동물 건강 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 폴리에틸렌 카테 테르 </td><td> Intramedic 폴리에틸렌 튜브 PE50, Becton 디킨슨 </td><td> 427411 </td><td></td></tr><tr><td> 수술 현미경 </td><td> 사설 미 6, 칼 Zeiss </td><td> 사설 미 6 </td><td></td></tr><tr><td> 지갑 문자열 봉합 </td><td> Prolene 6 / 0, Ethicon </td><td> 8610H </td><td></td></tr><tr><td> 근막과 피부 봉합 </td><td> Ethilon 4 / 0 또는 5 / 0, Ethicon </td><td> 662G 또는 661G </td><td></td></tr><tr><td> 수술 후 진통제 </td><td> Temgesic, Schering-북두칠성 동물 건강 </td><td></td><td> 쥐에 대한 투여 : 0.05 밀리그램 / kg </td></tr><tr><td> 증폭기 </td><td> 78534c 모니터, 휴렛 패커드 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 분석 균형과 밸런스 데이터 수집 소프트웨어 </td><td> FZ 300i, A &amp; D </td><td> FZ-300i </td><td></td></tr><tr><td> 주입 펌프 </td><td> 펌프 33, 하버드 장치 </td><td> HA33 </td><td></td></tr><tr><td> cystometry 기록 시스템 </td><td> Dataq 악기, DI-730 시리즈와 Windaq / 라이트 </td><td> DI-730-USB Windaq / 라이트 </td><td></td></tr><tr><td> 온도 등록 </td><td> 재수 52 KJ 온도계 </td><td> 52 KJ </td><td></td></tr><tr><td> 압력 트랜스 듀서 </td><td> 에드워즈 Lifesciences, 압력 모니터링 세트 </td><td> T322247A </td><td></td></tr></tbody></table>

작은 쥐의 cystometry의 사용 : 방광 chemosensation의 연구

The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

<p class="jove_content"&gt; 소변을 저장하고 효율적으로 편리한 시간에 쫓아 할 수있는 동적 저수지로 낮은 비뇨기 기관 (LUT) 함수. 소변을 저장하는 동안 그러나, 방광은 폐기물 제품에 장시간 동안 노출됩니다. 꼭 장벽 역할을함으로써, LUT, urothelium의 상피 안감은 유해 물질의 재 흡수를 방지합니다. 또한, 유해 화학 물질은 방광의 nociceptive innervation을 자극하고 방광의 내용을 추방 수축을 voiding 시작합니다. 흥미롭게도, 유해 화학 물질에 대한 방광의 감도는 intravesically neurogenic 방광 overactivity을 치료하는 TRPV1 작용제의 capsaicin을 기적, 임상 연습에서 성공적으로 사용되었습니다<sup&gt; 1</sup&gt;. 이 chemosensory 기관으로 방광을 볼 수있는 장점을 강조하고 추가 임상 연구하라는 메시지가 나타납니다. 그러나 윤리적 문제가 심각하게 인간의 과목 LUT 임상 약리학의 분자 기지를 해명하는 데 필요한 침습적 측정에서 수행 할 수있는 가능성을 제한 할 수 있습니다. 이러한 한계를 극복하기위한 방법은 여러 가지 동물 모델을 사용하는 것입니다<sup&gt; 2</sup&gt;. 여기 마우스 및 쥐의 cystometry, 제어 방광 관류의 조건에 intravesical 압력을 측정 할 수있는 기술의 구현을 설명합니다.</p&gt;<p class="jove_content"&gt; 개복술 후, 카테터가 방광 돔에 이식하고 interscapular 지역에 피하 터널링되어 있습니다. 요도가 방뇨를위한 무료 남아있는 동안 다음 방광은 통제 된 속도로 채워 할 수 있습니다. 충전 및 voiding의 반복주기 동안, intravesical 압력은 주입 카테터를 통해 측정 할 수 있습니다. 따라서, 압력 변화 정량화하고 분석 할 수 있습니다. 또한, voided 볼륨의 동시 측정 할 수 있습니다 비 voiding 수축의 구별 voiding 수축<sup&gt; 3</sup&gt;.</p&gt;<p class="jove_content"&gt; 중요한 것은, 동물과 인간 사이의 방뇨 제어의 차이로 인해,이 동물 cystometric 측정은 제한된 병진 가치가<sup&gt; 4</sup&gt;. 그럼에도 불구하고, 그들은 실험 사전 임상 설정에서 방광 pathophysiology과 약리학의 연구에 매우 중요한 역할을합니다. 이 기술을 사용하여 최근의 연구는 방광의 메카 및 화학 감각 속성에서 소설 분자 플레이어의 핵심 역할을 밝혔다.</p

Cystometry 작은 동물의 방광 기능을 측정 할 수있는 효과적인 방법입니다<em&gt; 생체 내</em&gt;. 방광은 지속적으로 요도가 방뇨를위한 무료 남지 반면, intravesical 카테터를 통해 제어 속도로 주입된다. 이 intravesical 압력과 voided 볼륨이 기록되는 동안, 반복에 입력하고 방광의 비우는 수 있습니다.

작은 쥐의 Cystometry의 사용 : 방광 Chemosensation의 연구

하부 요로(lower urinary tract, LUT)는 소변을 저장하고 적절한 시기에 효율적으로 배출할 수 있는 동적인 저장소 역할을 합니다. 한편...

본 절차의 목적은 화학 화합물이 방광의 저장 및 배뇨 기능에 미치는 영향을 결정하는 것입니다. 이는 먼저 방광에 카테터를 삽입함으로써 수행됩니다. 짧은 회복 기간 후, 카테터를 통해 대조 용액을 30분 동안 주입합니다.추가로 30분 동안 방광 내압과 배뇨량을 기록하는 동안, 동물에게 관심 화합물을 주입합니다. 최종적으로, 배뇨 빈도 분석을 통해 자극성 화학 물질이 배뇨 패턴에 어떤 영향을 미치는지 결과를 확인할 수 있습니다. 고립된 방광의 수축력을 기록하는 것과 같은 기존 방법과 비교하여 이 기술의 주요 장점은, 해당 기관의 기능을 더욱 생리적인 조건에서 연구할 수 있다는 점입니다.예를 들어, 중추 신경계의 조절 작용은 유지됩니다. 수술 단계에는 실험의 성공을 보장하기 위해 준수해야 할 수많은 기술적 세부 사항과 조작법이 포함되어 있어 학습하기 어렵기 때문에, 이 방법의 시각적 시연이 매우 중요합니다. 방광에 삽입할 튜브를 준비하려면, 먼저 PE 50 튜브를 원하는 길이로 자르고 메인 카테터 위에 18 gauge 카테터의 작은 흰색 조각을 끼웁니다.그런 다음 튜브의 한쪽 끝을 가열하여 끝부분에 작은 커프를 만들고, 식염수로 플러싱하여 내부의 공기를 모두 제거합니다. 이제 10~12주령의 암컷 쥐에게 isof fluorine을 투여하여 마취를 유도합니다. 마취 유도 후, isof fluorine의 유지 농도를 설정합니다.동물을 등으로 눕힌 상태로 배치하고 10 cc 주사기로 만든 작은 마취 마스크를 씌웁니다. 복부를 제모하고 진피를 소독한 후 수술을 진행합니다. 다음 수술 과정은 쥐(rat)와 생쥐(mouse) 모두에게 동일한 방식으로 수행됩니다.먼저 하복부 정중 절개술을 시행하여 방광을 노출시킵니다. 다음으로 수술에서 가장 중요한 단계가 시작됩니다. 수술용 현미경 하에서, 흡수되지 않는 6-0 단사 봉합사를 사용하여 방광 돔(bladder dome)에 주머니 끈 봉합(purse string suture)을 실시합니다.다음으로 바늘을 사용하여 퍼스스트링(purse string) 내부에 작은 방광루 형성술을 실시합니다. 이 구멍을 통해 커프가 달린 PE 50 카테터를 삽입합니다. PE 10과 같이 더 얇은 카테터 튜브는 저항이 더 높고 가변적일 수 있으므로 권장되지 않습니다.외과의사 매듭(surgeon's knot)을 사용하여 튜브 주변의 퍼스 스트링(purse string)을 고정합니다. 그런 다음 커프가 달린 팁이 봉합사 바로 아래에 올 때까지 카테터를 조심스럽게 바깥쪽으로 당깁니다. 누출을 방지하기 위해 18 gauge 카테터 조각을 봉합사 쪽으로 밀어 넣습니다.카테터와 방광 사이에 누출이 있는지 확인합니다. 생리식염수를 천천히 주입하여 확인하십시오. 누출 부위가 있다면 추가 봉합사를 사용하여 조입니다.이제 단필라멘트 봉합사를 사용하여 복근을 봉합하되, 절개 부위 상단에 카테터가 통과할 수 있는 통로를 남깁니다. 동물이 튜브를 갉아먹는 것을 방지하기 위해 중공 금속봉을 사용하여 카테터를 견갑간 부위로 터널링합니다. 수술 후 금속봉은 피부 아래와 복근 및 배근 위에 위치시켜야 합니다.로드(rod)를 동물의 피하를 통해 견갑간 부위까지 밀어 넣습니다. 비흡수성 단사 봉합사로 복근과 피부를 봉합하여 수술을 마무리합니다. 이제 식염수로 플러싱하여 삽입된 카테터의 투과성과 안정성을 확인하는 것이 매우 중요합니다.주입액은 방광을 통해 나와 요도로 배출되어야 합니다. 진통제를 피하 투여한 후, 카테터의 외부 끝부분을 플라스틱 필름으로 밀봉하고 쥐의 하단 등쪽 피부에 카테터를 고정합니다. 마지막으로, 동물이 30분 동안 회복될 수 있도록 합니다.사이토메트리(cytometry)를 시작하기 전에 기기가 적절하게 보정되었는지 확인하십시오. 쥐를 디지털 저울 위에 놓인 오일이 담긴 수납 용기 위의 대사 케이지에 넣습니다. 다음 단계는 루어 스터브(lure stub)를 통해 삽입된 카테터를 3방향 콕(three-way tap)에 연결하는 것입니다.탭은 압력 변환기와 주입 펌프에 연결되어야 합니다. 압력 변환기는 증폭기를 통해 데이터 수집 시스템에 추가로 연결되며, 공개 소프트웨어를 사용하는 컴퓨터가 주입 펌프를 가동하여 방광에 식염수를 주입함으로써 제어 측정을 시작합니다. 30분 동안 대사 케이지를 디지털 저울 위에 매달아 쥐의 배뇨량을 추정합니다.방광이 채워지고 비워지는 동안 방광 내압을 기록합니다. 다음 단계에서는 30분간의 추가 데이터 수집 과정 동안 약물을 전신적으로 또는 방광 내로 투여할 수 있습니다. 실험이 완료되면 동물을 희생시켜야 합니다.쥐의 전형적인 압력 추적 곡선을 보면, 액체 주입 중에 방광 내 압력이 특정 임계값에 도달할 때까지 서서히 상승하는 것을 알 수 있습니다. 이후 방광이 수축하고 요도 괄약근이 열리면서 주입된 용액이 요도를 통해 배출됩니다. 이러한 과정을 통해 방광이 비워지게 됩니다.수축이 멈추고 압력은 다시 기저 수준으로 떨어질 것입니다. 마우스로부터 수집된 데이터에서도 모두 동일한 특징이 나타납니다. 머스타드 오일(mustard oil) 또는 MO의 분자 표적을 식별하기 위해 세포 측정법(cytometry)이 사용되었습니다. MO는 방광과 같은 내장 기관의 염증 및 과민통증 실험 모델에서 오랫동안 사용되어 온 반응성이 매우 높은 화합물입니다.예상대로, 야생형 마우스에 10 millimolar MO를 방광 내로 주입했을 때 수축 간격의 강한 감소가 유도되었습니다. 흥미롭게도, MO 수용체 TRPA1이 결핍된 마우스는 동일한 조건에서 야생형과 유사한 결과를 보였습니다. 반면, TRPV1 넉아웃 마우스에서는 야생형 마우스보다 MO에 의한 시스템 매개변수의 변화가 훨씬 약하게 나타났으며, TRPA1과 TRPV1이 모두 결핍된 이중 넉아웃 마우스는 MO 투여에 거의 반응하지 않았습니다.데이터에 따르면 TRP V one이 mo에 의해 유도된 내장 자극에 핵심적인 역할을 할 수 있음을 시사합니다. MO의 방광 내 주입 전과 주입 중의 평균 순간 배뇨 빈도는 이러한 데이터를 뒷받침합니다. 평균 빈도는 생리식염수 주입에 상대적인 값입니다.이 절차를 수행할 때는 주입액이 복강 내로 누출되지 않도록 카테터가 방광에 단단히 고정되었는지 확인하는 것이 중요합니다. 이 영상을 시청하고 나면 방광 내압 측정 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것이며, 여기에는 카테터의 방광 내 삽입과 조절된 방광 관류 하에서 각성 또는 마취된 동물을 사이토메트리 스테이지에 배치하는 과정이 포함됩니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

방광 확대의 외과 단계는 murine와 쥐 모델에서 3 차원 공사장 공중 발판을 사용하여 설명됩니다. 방광 확대에 사용할 biomaterial 구성의 효능을 테스트하려면 깨어 및 anesthetized 모두 cystometry에 대한 기술이 제공됩니다.

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우리는 방광 부피, 방광 벽 두께, 소변 속도, 공극 부피, 공극 기간 및 요도 직경을 측정하는 방법으로 대조 이미징을 가진 고주파 초음파의 사용을 기술합니다. 이 전략은 더 낮은 요로 역기능 (LUTD)의 각종 마우스 모형에 있는 무효 기능 장애 및 처리 효험을 평가하기 위하여 이용될 수 있습니다.

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