Name: 해양 tubeworm 인 라이브 광학 및 전자 현미경 기술을 사용하여 석회화 이벤트의 특성 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 39 s
Description: 학습하세요 해양 tubeworm의 석회화 과정을 라이브 광학 및 전자 현미경 기술로 분석하는 방법을. Hydroides elegans를 사용하여 생체 광물화 메커니즘과 세포 내 pH 변화를 직접 관찰할 수 있습니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

저자는 Clemson Broadcast Productions, J. Bright의 오디오 녹음, A. D. McQuiston의 내레이션, 오디오 감미료, K. Murphy, G. Spake의 비디오 촬영, T. Messervy의 그래픽 아트, T. Messervy와 E. Rodgers의 비디오 편집에 큰 감사를 표합니다. 기술 지원 및 과학적 조언은 S. Kawada, S. Kubo, J. Hudson, T. Darroudi, D. Mulwee, H. Qian, Y. W. Lam, M. B. Johnstone, C. Campanati, A. C. Lane 및 R. Dineshram의 조언에서 영감을 받았습니다. 이 연구는 HKSAR-RGC의 3가지 GRF 보조금(보조금 번호: 705511P, 705112P 및 17304914)의 지원을 받았습니다.

<ol><li>Aizenberg, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeleton+of+Euplectella+sp.%3A+structural+hierarchy+from+the+nanoscale+to+the+macroscale%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Skeleton of Euplectella sp.: structural hierarchy from the nanoscale to the macroscale.</a> Science. 309 (5732), 275-278 (2005).</li>
<li>de Nooijer, L. J., Toyofuku, T., Oguri, K., Nomaki, H., Kitazato, H. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.4319/lom.2008.6.610/abstract">Intracellular pH distribution in foraminifera determined by the fluorescent probe HPTS.</a> Limnol Oceanogr Methods. 6 (11), 610-618 (2008).</li>
<li>de Nooijer, L. J., Langer, G., Nehrke, G., Bijma, J. <a target="_blank" href="http://www.biogeosciences.net/6/2669/2009/">Physiological controls on seawater uptake and calcification in the benthic foraminifer Ammonia tepida.</a> Biogeosciences. 6 (11), 2669-2675 (2009).</li>
<li>Smith, A. M., Riedi, M. A., Winter, D. J. <a target="_blank" href="http://link.springer.com/article/10.1007/s00227-013-2210-z">Temperate reefs in a changing ocean: skeletal carbonate mineralogy of serpulids.</a> Mar Biol. 160 (9), 1-14 (2013).</li>
<li>Carpizo-Ituarte, E., Hadfield, M. <a target="_blank" href="https://www.jstor.org/stable/1542509?seq=1#page_scan_tab_contents">Stimulation of metamorphosis in the polychaete Hydroides elegans Haswell (Serpulidae).</a> Biol. Bull. 194 (1), 14(1998).</li>
<li>Bryan, P. J., Kreider, J. L., Qian, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0022098197001056">Settlement of the serpulid polychaete Hydroides elegans (Haswell) on the arborescent bryozoan Bugula neritina (L.): evidence of a chemically mediated relationship.</a> J Exp Mar Biol Ecol. 220, 171-190 (1998).</li>
<li>Chan, V. B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+of+compositional+and+ultrastructural+shifts+during+the+development+of+calcareous+tubes+in+the+biofouling+tubeworm%2C+Hydroides+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Struct.+Biol%22%5BJournal%5D)">Evidence of compositional and ultrastructural shifts during the development of calcareous tubes in the biofouling tubeworm, Hydroides elegans.</a> J. Struct. Biol. 189 (3), 230-237 (2015).</li>
<li>DOE. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Handbook+of+methods+for+the+analysis+of+the+various+parameters+of+the+carbon+dioxide+system+in+sea+water.+Version+2%22">Handbook of methods for the analysis of the various parameters of the carbon dioxide system in sea water. Version 2</a>. Dickson, A. G., Goyet, C. , ORNL/CDIAC-74 (1994).</li>
<li>Chan, V. B. S., et al. <a target="_blank" href="https://www.openaire.eu/search/publication?articleId=frontiers___::60dc3ff1cf8480f5672e61caa159856d">Direct deposition of crystalline aragonite in the controlled biomineralization of the calcareous tubeworm.</a> Front Mar Sci. 2, 97(2015).</li>
<li>Bond, J., Varley, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+flow+cytometry+and+SNARF+to+calibrate+and+measure+intracellular+pH+in+NS0+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Use of flow cytometry and SNARF to calibrate and measure intracellular pH in NS0 cells.</a> Cytometry A. 64, 43-50 (2005).</li>
<li>Lloyd, G. E. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/249849686_Atomic_Number_and_Crystallographic_Contrast_Images_with_the_SEM_A_Review_of_Backscattered_Electron_Techniques">Atomic number and crystallographic contrast images with the SEM: a review of backscattered electron techniques.</a> Mineral Mag. 51, 3-19 (1987).</li>
<li>Perez-Huerta, A., Dauphin, Y., Cuif, J. P., Cusack, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+resolution+electron+backscatter+diffraction+%28EBSD%29+data+from+calcite+biominerals+in+recent+gastropod+shells%5BTitle%5D)+AND+%22Micron%22%5BJournal%5D)">High resolution electron backscatter diffraction (EBSD) data from calcite biominerals in recent gastropod shells.</a> Micron. 42 (3), 246-251 (2011).</li>
<li>Bandli, B. R., Gunter, M. E. <a target="_blank" href="http://ammin.geoscienceworld.org/content/97/8-9/1269">Electron backscatter diffraction from unpolished particulate specimens: examples of particle identification and application to inhalable mineral particulate identification.</a> Am. Mineral. 97, 1269-1273 (2012).</li>
<li>Hayat, M. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHayat%2C+MA+%22Principles+and+techniques+of+electron+microscopy%3A+biological+applications%22">Principles and techniques of electron microscopy: biological applications</a>. , Cambridge University Press. (2000).</li>
<li>Wirth, R. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0009254108001940">Focused Ion Beam (FIB) combined with SEM and TEM: Advanced analytical tools for studies of chemical composition, microstructure and crystal structure in geomaterials on a nanometre scale.</a> Chem Geo. 261, 217-229 (2009).</li>
<li>Volkert, C. A., Minor, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focused+ion+beam+microscopy+and+micromachining%5BTitle%5D)+AND+%22MRS+Bull%22%5BJournal%5D)">Focused ion beam microscopy and micromachining.</a> MRS Bull. 32, 389-399 (2007).</li>
<li>Kudo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microtexture+of+larval+shell+of+oyster%2C+Crassostrea+nippona%3A+A+FIB-TEM+study%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Struct.+Biol%22%5BJournal%5D)">Microtexture of larval shell of oyster, Crassostrea nippona: A FIB-TEM study.</a> J. Struct. Biol. 169 (1), 1-5 (2009).</li>
</ol>

저자는 공개할 것이 없습니다.

라이브 광학 영상은 다세포 생물의 세포 이벤트를 관찰하는데 유용한 방법이다. 여기서, 내부 pH 및 칼슘 이온 지표 광물 부위에서의 이온 플럭스를 측정하기 위해 사용되었다. 이 지역에서는 활성 이온 펌프는 석회화 2, 3을 사용하도록 pH와 칼슘 농도를 상승시킬 필요합니다. 유기체 공부 형광 분자를 도포 할 때 사용되는 농도는 무시할만한 독성을 가지며, 생리적으로 적절한 방식으로 수행 유기체있게 보장하는 것이 중요하다. 하부 염색 농도를 독성이 적은 것, 통상보다 긴 시간 염색 (10)에 결합된다. 이 염색 기간 산소 결핍 및 폐기물의 축적을 최소화 배양 시간 동안 유충의 저농도를 유지하는 것이 중요하다. 이전 지역화를 포함하는의 FIB / TEM 방법을 추구하는관심 지역, 삶의 무대와 SEM-EDS와 SEM-...

생체 광물 형성 작용 (biomineralization)은 정교하게 정렬 한 무기물의 제조 결과 세포 활성 모음 브릿지 복잡한 일련의 이벤트이다. 문제는 동적 세포 프로세스 및 광학 및 전자 현미경 방법의 조합을 이용하여 복잡한 구조를 모두 무기물을 특성화한다. 세포 내 pH를 상승, 따라서, 증가 된 pH를 갖는 생활 단계를 식별하는 석회화 2, 3이 발생 될 가능성이있는 시간을 계시, CaCO3를 결정의 형성을 선호한다. 가족 Serpulidae에서 tubeworms 바다 4 공통 calcifiers 있습니다. 그것은 특히의 생물 연료 5, 6, 또한 해양 연구를위한 인기있는 무척추 동물 모델이다. 본 연구에서는, 무기질 구획 석회화 과정 두리NG의 생체 광물 형성 작용 (biomineralization)이 관찰된다. 변형의 빠른 처리 탄산 칼슘 구조물 (7, 8)의 출현을 포함한다. 우리는 tubeworm 인에서 수행 할 수있는 방법을 내부 pH를 측정 보여, 삶의 단계 및 석회화에 대한 중요한 조직은 어떻게 선별 할 수있다. 관심의 수명 단계가 식별 된 후에, 석회화에 대한 책임이있는 조직을 전자 현미경 법을 사용하여 더 높은 해상도로 특징 지어 질 수있다. 형광 현미경을 사용하여, 우리는 변성 유도 후 나타나는 탄산 칼슘에 필요한 시간을 결정한다. 삶의 유사한 단계 이후 원소 조성 분포에 대한 SEM-EDS 가시화하고, 증착 된 무기물 개의 상이한 전자 현미경 방법, 구체적으로는 SEM-EBSD 및 FIB-TEM을 사용하여 분석 하였다.

<table><tbody><tr><td>헥사메틸디실라잔&nbsp;</td><td>전자 현미경 과학</td><td>16700(EM)</td><td></td></tr><tr><td>오스뮴 테트록사이드 2% 수용액</td><td>전자 현미경 과학</td><td>19192</td><td></td></tr><tr><td>IBMX 3-이소부틸-1-메틸크산틴</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>PHZ1124</td><td></td></tr><tr><td>니제리신, 유리산</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>N7143-5MG</td><td></td></tr><tr><td>35mm 직경 접시, 구멍 크기 27mm, 유리 No.0, 비코팅</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>D110400</td><td></td></tr><tr><td>5-(and-6)-Carboxy SNARF-1, 아세톡시메틸 에스테르, 아세테이트</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>C-1271</td><td></td></tr><tr><td>BDH 염화칼륨, ACS 등급</td><td>VWR</td><td>BDH0258-500G</td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드 시약 등급, 결정질</td><td>Sigma</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>1M 부피 분석용 염산</td><td>Wako Pure Chemical 공업 주식회사</td><td>083-01095</td><td></td></tr><tr><td>용적 분석용 0.05m 수산화나트륨 용액</td><td>와코 퓨어 케미컬 공업 주식회사</td><td>199-02185</td><td></td></tr><tr><td>칼세인</td><td>시그마</td><td>C0875</td><td></td></tr><tr><td>FASW</td><td>이와키 주식회사</td><td>Rei-sea Marine</td><td></td></tr><tr><td>Mixed Cellulose 에스테르 멤브레인; 직경 47mm, 0.45 &마이크로; m</td><td>ADVANTEC</td><td>A045A047A</td><td></td></tr><tr><td>에탄올</td><td>Wako Pure Chemical Industries, Ltd</td><td>051-00476</td><td></td></tr><tr><td>DOE (1994)의 SOP06에 의한</td><td>완충</td><td></td><td></td>액용 인공 해수 cdiac.ornl.gov/ftp/cdiac74/sop06.pdf</tr><tr><td>염화나트륨</td><td>Wako Pure Chemical Industries, Ltd</td><td>191-01665</td><td></td></tr><tr><td>염화칼</td>륨 <td>Wako Pure Chemical Industries, Ltd</td><td>163-03545</td><td></td></tr><tr><td>염화 마그네슘 육수화물</td><td>와코 순수 화학 공업</td><td>135-00165</td><td></td></tr><tr><td>염화 칼슘</td><td>와코 순수 화학 공업</td><td>039-00475</td><td></td></tr><tr><td>황산</td><td>나트륨 와코 순수 화학 공업</td><td>197-03345</td><td></td></tr><tr><td>염산</td><td>와코 순수 화학 공업</td><td>089-08415</td><td></td></tr><tr><td>2-아미노-2-하이드록시메틸-1,3-프로판디올(트리스)</td><td>Wako Pure Chemical Industries, Ltd</td><td>207-06275</td><td></td></tr><tr><td>2-아미노피리딘</td><td>Wako Pure Chemical Industries, Ltd</td><td>011-02775</td><td></td></tr><tr><td>Orion 5-star Plus pH meter</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PrpHecT ROSS 마이크로 조합 pH 전극 8220BNWP</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Axiovision, 버전 4.6, Axio Observer Z1</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>NIH, Bethesda, MD, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HRTEM H500</td><td>Hitachi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SU6600 VPSEM</td><td>Hitachi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NB5000 집중 이온 및 전자 빔 (FIB-SEM) 시스템</td><td>Hitachi&nbsp;</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

해양 tubeworm 인 라이브 광학 및 전자 현미경 기술을 사용하여 석회화 이벤트의 특성

Characterization of Calcification Events Using Live Optical and Electron Microscopy Techniques in a Marine Tubeworm

탄산칼슘의 생물학적 생산의 첫 번째 사건을 특성화하려면 현미경 접근 방식의 조합이 필요합니다. 첫째, 세포 내 pH 분포와 칼슘 이온은 시간 경과에 따른 실시간 현미경을 사용하여 관찰할 수 있습니다. 이를 통해 추가 전자 현미경 연구를 위해 관심 기능이 있는 수명 단계와 조직을 식별할 수 있습니다. 생애 단계와 관심 조직은 일반적으로 pH 및 Ca 신호가 더 높습니다. 
여기에서는 H. elegans를 사용하여 주사 전자 현미경(SEM)의 생물학적 표본에서 탄산칼슘 구조의 존재를 특성화하고, 에너지 분산 X선 분광법(EDS)을 사용하여 원소 조성을 시각화하고, 전자 후방 산란 회절(EBSD)을 사용하여 결정 구조의 존재를 확인하고, 투과 전자 현미경(TEM)을 사용하여 물질의 구성 및 구조를 분석합니다. 이 프로토콜에서는 집속 이온 빔(FIB)을 사용하여 TEM 분석에 적합한 치수로 샘플을 분리합니다. FIB는 현장 특정적 기법이므로 이전 기법의 정보를 사용하여 Ca 신호가 가장 높은 관심 영역을 식별하는 방법을 보여줍니다.

다음은 tubeworm 인의 변형시의 석회화 과정의 일부 관측은 다음과 같습니다. 도 1은 칼라 영역 근처의 pH 값은 변형 후 다른 조직에 비해 높다는 것을 보여준다. 그림 2I는 칼슘의 균일 한 분포, 더 큰 석회화 이벤트가 시작되지 않은 제안과 tubeworm 인을 보여줍니다; 도 2ii 관심 시점 초월 석회화 시사 장기간 석회화 한 tubeworm 인을 나타내고; 그림 2iii는 광물에 대한 책임이있는 조직을 이해하기 위해 추가 분석을 위해 선택한 관심의 석회화 단계와 tubeworm 인을 보여줍니다. 도 3은 높은 pH 값 칼 세인 염색 및 SEM-EDX 매핑 모두에서 높은 칼슘 이온 신호와 상관 관계를 나타낸다. 이러한 관찰로부터, 주목 수명 단계에서 조직을 하이에서 조사한더 현지화 된 기술, SEM-EBSD...

우리는 튜브웜인 Hydroides elegans의 석회화를 관찰하고 최초의 석회화된 물질을 찾고 특성화하는 데 유용한 다양한 현미경 방법의 사용을 보여줍니다. 생체 현미경과 전자 현미경을 함께 사용하여 생체 광물화 연구에 중요한 기능 및 재료 정보를 제공합니다.

Characterizing the first event of biological production of calcium carbonate requires a combination of microscopy approaches. First, intracellular pH ...

본 실험 절차의 전반적인 목표는 광학 및 전자 현미경법을 결합하여 석회화 현상의 위치와 구조를 결정하는 것입니다. 이는 세포 내 pH 및 칼슘 신호에 민감한 형광 지시제를 사용하여, 석회화를 담당하는 생애 단계인 변태 과정 중의 살아있는 관벌레 유생을 관찰함으로써 달성됩니다. 세포 내 pH 이미징을 통해 석회화 과정 중 세포질 내부와 외부로의 양성자 농도 변화를 연구할 수 있습니다.먼저, 해양 관벌레 유충의 세포 내 pH 이미징을 위해, 유영 능력이 있는 유충을 세포 내 pH 지시 염료인 SNARF-1 AM으로 염색합니다. 그 후 유충을 얇은 유리 관찰창이 있는 IBMX 함유 해수 디쉬로 옮겨 형광 현미경 위에 올리고, 염료에 흡수되는 488 nanometers 파장의 빛을 조사합니다. 염료에서 방출되는 580 nanometer 및 640 nanometer의 방출광을 수집합니다. 이 값들의 비율로부터 세포 내 pH 값을 계산할 수 있습니다.광학 현미경을 통해 pH 수치가 더 높은 시점과 조직 부위를 식별할 수 있습니다. 이는 추가 분석을 위해 관심 있는 시점을 결정하는 첫 번째 단계입니다. 두 번째 단계에서는 전자 현미경 관찰을 위해 해당 시점에서 고정액으로 관벌레를 보존합니다.SEM-EDS 매핑을 통해 칼슘 신호를 분석하여 새롭게 무기질화되는 생애 단계를 식별합니다. 그런 다음 SEM/EBSD를 사용하여 칼슘 신호가 높은 영역을 스크리닝하여 결정질 무기질의 존재를 확인합니다. 마지막으로, 집속 이온 빔(focused ion beam)을 사용하여 무기질 부위를 절단하고 TEM 관찰을 위한 박편을 제작합니다.이 섹션에서는 선택 영역 회절 패턴을 얻는 방법을 다룹니다. 이 기술이 벌크 X선 회절 분광법과 같은 기존 테스트 방법보다 갖는 주요 장점은 광학 및 전자 현미경 방법으로 관찰된 특정 구조를 직접 관찰할 수 있다는 점이며, 따라서 개별적인 석회화 사건을 시간적 및 공간적 수준 모두에서 직접 연구할 수 있습니다. 칼슘 및 세포 내 pH 지표를 사용하여 석회화를 연구하면 이러한 관련 생리학적 사건의 시간 척도를 식별할 수 있습니다.적절한 시점에 시편을 보존하는 것은 성공적인 SEM 분석을 위해 매우 중요합니다. 생물학적 석회화의 첫 사건을 찾을 때, SEM/EDX를 사용하여 칼슘의 원소 분포를 스크리닝할 수 있습니다. 칼슘이 더 많이 분포된 위치는 탄산칼슘의 존재를 나타낼 수 있지만, 결정 구조의 존재는 X선 회

characterization-calcification-events-using-live-optical-electron

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 동영상은 칼슘 이미징의 개념을 소개하고 성형된 아가로스 웰에 포함된 벌레의 타임 랩스 이미징을 위한 예제 프로토콜을 포함합니다.

칼슘 이미징: 살아있는 예쁜꼬마선충의 신경 활동을 시각화하는 방법

영상 기술의 통합 제품군은 카리브해 산호 Montastraea의 annularis와 M.에서 용종의 형태와 조직 구조를 결정하기 위해 적용되었습니다 faveolata. 형광, 직렬 블록 얼​​굴, 및이 광자 공 초점 레이저 주사 현미경 lobate 구조 용종 벽 및 예상 chromatophore 및 주산 셀러 밀도 및 분포를 확인했다.

복합 광학 현미경 방법 카리브 암초 건물 산호의 폴립 조직 형태와 구조를 밝히기

동물을 움직이지 않게 하지 않고 장시간 척도에 걸쳐 행동과 신경 활동을 영상화하는 것이 행동을 이해하기 위한 전제 조건입니다. 아가로스 미세유체 챔버 이미징(AMI)은 예쁜꼬마선충의 모든 생애 단계에 대한 신경 활동과 행동을 이미지화하는 데 사용할 수 있습니다.

의 장기 칼슘 이미징을위한 아가로 오스 Microchambers<em&gt; 예쁜 꼬마 선충</em

이 문서에서는 사용자 지정 미세 장치를 채용 하는 개별 벌레의 라이브 이미징을 설명 합니다. 장치에서 여러 벌레는 개별적으로 별도 챔버, 다양 한 생물 학적 과정의 다중화 경도 감시 허용에 국한 됩니다.

꼬마 선 충 에 경도 이미징을 위한 미세 플랫폼

여기서, 3마리의 해양 무척추동물에 대한 마이크로포커스 X선 컴퓨터 단층촬영(microCT) 영상을 수행하기 위한 프로토콜을 상세히 설명한다. 이 연구에서는 샘플 고정, 염색, 장착, 스캐닝, 이미지 재구성 및 데이터 분석과 같은 단계를 설명합니다. 다양한 샘플에 대해 프로토콜을 조정할 수 있는 방법에 대한 제안도 제공됩니다.

마이크로 포커스 X 선 CT (마이크로CT) 액티니아 에퀴나의 이미징 (Cnidaria), 하모토 sp. (안넬리다), 그리고 Xenoturbella 자포니카 (제나코엘로모파)

이 방법은 모델 유기체 C. elegans의신체 벽 근육에서 발동 된 칼슘 과도 의 변화와 이미지 기준선 세포질 칼슘 수준에 광유전학 및 유전적으로 코딩 된 칼슘 센서를 결합하는 방법을 제공합니다.

C. 예쁜꼬마선충의 생체내 칼슘 이미징

여기에 보고된 것은 잘 제어되고 국소화되지 않은 진동을 가진 자유롭게 행동하는 예쁜꼬 마선충에서 칼슘 이미징을 위한 시스템이다. 이 시스템을 통해 연구원은 나노 규모의 변위에서 잘 제어 된 특성을 가진 비 국부적 인 진동을 불러 일으키고 진동에 대한 C. elegans 의 반응 중에 칼슘 전류를 정량화 할 수 있습니다.

잘 제어되고 국소화되지 않은 진동으로 자유롭게 행동하는 Caenorhabditis elegans의 칼슘 이미징

빠른 반복률 형광계 (FRRf)는 광계 II 광생리학 및 일차 생산성을 측정하는 유익한 방법입니다. 여기서 우리는 큐벳 타입 FRRf를 사용하여 기질 동물 플랑크톤에 대한 후생대 조류, Colacium sp.의 PSII 광생리학을 측정하는 프로토콜을 설명한다.

Cuvette-type Fast Repetition Rate Fluorometer에 의한 Colacium sp.의 부착 단계의 광생리학 측정

심혈관 질환은 전 세계적으로 주요 사망 원인입니다. 혈관 석회화는 심혈관 이환율 및 사망률의 부담에 실질적으로 기여합니다. 이 프로토콜은 형광 영상화에 의해 시험관내에서 혈관 평활근 세포 매개 칼슘 침전을 정량화하는 간단한 방법을 설명합니다.

시험관 내에서 칼슘 침착을 정량화하기 위한 반자동화되고 재현 가능한 생물학적 기반 방법

현재 방법은 쉽게 사용할 수 있는 유전적으로 암호화된 칼슘 지표를 사용하여 예쁜꼬마선충에서 생체 내 고해상도 하위 구획 칼슘 이미징을 위한 비비율계량 접근 방식을 설명합니다.

생체 내에서 처리되는 신경 칼슘의 세포 내 이미징

여기에서는 모델 선충 C. elegans의 생식계에서 발현되는 유전적으로 암호화된 칼슘 리포터를 사용하여 수정 및 초기 배발생 중 칼슘을 시각화하기 위한 프로토콜과 도구를 제시합니다.

In vivo Visualization of calcium Transients during fertilization and Early Development in C. elegans(예쁜꼬마선충의 수정 및 초기 발달 중 칼슘 과도 현상의 생체 내 시각화)

학습하세요 해양 tubeworm의 석회화 과정을 라이브 광학 및 전자 현미경 기술로 분석하는 방법을. Hydroides elegans를 사용하여 생체 광물화 메커니즘과 세포 내 pH 변화를 직접 관찰할 수 있습니다.

해양 tubeworm 인 라이브 광학 및 전자 현미경 기술을 사용하여 석회화 이벤트의 특성

더 많은 동영상 탐색