Adventitial 바사 Vasorum 관류를 차단 하 여 복 부 대동맥 동맥 류의 설치류 모델의 생성

이 절차의 전반적인 목표는 쥐에서 진행성 대동맥 확장과 함께 복부 대동맥류 또는 AAA의 시작을 위해 대동맥 조직 저산소증을 유도하는 것입니다. 이 방법은 복부 대동맥류 발병 및 파열을 담당하는 메커니즘에 대한 대동맥류 연구 기간의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 랫트 모델 간의 형태학적 및 병리학적 특성이 인간의 복부 대동맥류에서 볼 수 있는 것과 유사하다는 것입니다.

이 방법에 대한 아이디어는 인간 AAA의 또 다른 가능성을 조사할 때 처음 떠올랐습니다. 저산소증 유도 수술은 텍스트에 정통한 교육만으로는 배우기 어렵기 때문에 이 방법의 시각적 시연이 중요합니다. 이 절차를 시연하는 것은 혈관 외과 의사인 Tatsuro Yata와 Hirona Kugo로, 둘 다 우리 실험실의 과거 의사입니다.

발가락 꼬집기로 적절한 수준의 진정 효과를 확인한 후 전기 면도기를 사용하여 300-400 밀리그램 쥐의 복부 털을 면도 한 다음 노출 된 피부를 순차적으로 알코올 및 포비돈 요오드 용액 소독합니다. 쥐를 수술대에 누운 자세로 놓고 동물의 눈에 연고를 바릅니다. 다음으로, 가위를 사용하여 복부 정중선 복부 절개를 만들고 멸균 거즈와 상처 견인기를 사용하여 복강 내에 복부 내용물을 포장합니다.

혈관 주위 조직에서 대동맥을 분리하려면 핀셋을 사용하여 후복막을 부드럽게 집어 찢어 대동맥 벽을 노출시킵니다. 그런 다음 왼쪽 신장 정맥에서 혈관 주위 조직의 분기점까지 후복막 공간 내의 인프라렌널 대동맥을 박리합니다. 5-0 실크 봉합사를 사용하여 복부 대동맥에서 분기하는 혈관을 결찰하여 대동맥 내강을 좁히지 않는 대동맥에서 떨어진 지점에서 혈액 공급을 차단합니다.

대동맥 혈류를 차단하려면 신장 동맥 바로 아래와 대동맥의 분기점 바로 위에 혈관 클립을 삽입하십시오. 대동맥벽 표면에 점 출혈을 만드는 것과 유사하게, 신장 동맥 가지에 인접한 대동맥 클립에서 원위 방향으로 5mm 떨어진 곳에 마이크로 시저를 삽입하여 전방 대동맥 벽을 절단하고 24게이지 내주 바늘을 사용하여 절개 부위를 통해 폴리우레탄 카테터를 얕게 삽입합니다. 물을 채운 1mL 주사기를 폴리우레탄에 부착하고 대동맥에 남아 있는 혈액을 씻어냅니다.

다음으로, 새 폴리우레탄 카테터를 10mm 길이로 자르고 이 카테터를 대동맥 내강 절개 부위에 완전히 삽입합니다. 절개 부위에 맞게 카테터의 중간 지점을 재배치하고 8-0 중단된 봉합사로 절개 부위를 봉합하기 위한 모노필라멘트 봉합사. 5-0 실크 봉합사와 폴리우레탄 카테터를 사용하여 외과 의사의 매듭으로 복부 대동맥을 접합합니다.

카테터가 고정되면 대동맥 분기점과 신장 동맥 아래에서 혈관 클립을 제거하여 전혈류를 복원하고 총 대동맥 맥동의 존재를 확인합니다. 거즈를 제거한 후 4-0 폴리프로필렌 봉합사를 사용하여 복부 절개 부위를 2층으로 단단히 봉합하여 장기가 돌출되는 것을 방지합니다. 그런 다음 복부 절개 부위에 국소 리도카인을 바르고 완전히 회복될 때까지 모니터링하면서 쥐를 가열 패드에 놓습니다.

수술 후, 표준 프로토콜에 따라 복부 대동맥의 안쪽 가장자리에서 바깥쪽 가장자리까지의 최대 직경을 측정하여 초음파 초음파에서 대동맥 비대로의 시간 경과를 관찰합니다.수술 후 28일 후에는 메스를 사용하여 새로운 복부 절개 부위로 복부를 열고 가위를 사용하여 동맥류를 채취합니다. 수확된 대동맥을 10% 중성 완충 포르말린에 24-48시간 동안 놓습니다.

대동맥을 파라핀에 삽입하고 대동맥 조직의 절편을 채취한 후, 표준 프로토콜에 따라 고정된 파라핀 절편을 증류수에 10분 동안 수화한 다음 Verhoeff의 헤마톡실린에서 배양합니다. 녹 및 부식은 Verhoeff의 헤마톡실린 및 van Gieson의 용액 실험실 활동으로 식별할 수 있습니다. 따라서 이러한 조직 염료의 신선도와 배양 시간은 보관 및 선택적 염색에 중요합니다.

25분 후, 물로 1분씩 3회 세척한 다음 분별 용액에 10-30회 담그십시오. 섹션을 다시 물로 세 번 헹구고 샘플을 5% 티오황산나트륨에 1분 동안 넣습니다. 한 번 더 물을 씻은 후 샘플을 van Gieson 용액에 5분 동안 담그십시오.

다음으로, 30초 상승 에탄올 침지로 조직을 탈수한 다음 5분 자일렌 배양 2회를 통해 조직을 탈수합니다. 그런 다음 공진 장착 매체를 사용하여 적절한 크기의 커버 슬립으로 섹션을 덮습니다. 이 이미지에서는 카테터 삽입 후 28일이 지난 대표적인 복부 대동맥

경복부 초음파에 의한 대동맥의 상단과 하단을 측정한 결과, 카테터 삽입 직후 확장이 없는 정상 직경이 나타났으며, 이는 삽입 후 약 14일째에 최대 크기까지 증가하고 실험 기간이 끝날 때까지 변경되지 않거나 약간 증가합니다. 28일째 동맥류에 대한 조직병리학적 분석은 0일째에 관찰된 것과 비교하여 탄성 섬유의 현저한 저하를 보여줍니다. 이 기술은 한 번 숙달하면 제대로 수행하면 약 1시간 안에 완료할 수 있습니다.

이 절차에 따라 체외 분석과 같은 다른 방법을 수행하여 개별 직렬 기능에 대한 추가 질문에 답할 수 있습니다. 개발 후 이 기술은 복부 대동맥류 분야의 연구자들이 특정 환자 인구 통계에서 이 질병을 탐구할 수 있는 길을 열었습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 쥐에서 진행성 대동맥 확장과 함께 복부 대동맥류를 시작하기 위해 대동맥 조직 저산소증을 유도하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.

수술 기구를 사용하는 것은 매우 위험할 수 있으며 이 절차를 수행하는 동안 항상 부상 및 감염에 대한 예방 조치를 취해야 한다는 것을 잊지 마십시오.