Name: Adventitial 바사 Vasorum 관류를 차단 하 여 복 부 대동맥 동맥 류의 설치류 모델의 생성 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-08T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: 배우세요 쥐에서 복부 대동맥류를 유도하는 혈관 카테터 삽입 및 결찰 기법을 통해 만성 조직 저산소증을 유발하는 방법을. 이 모델은 인간 질병의 형태학적 및 병리학적 특성을 모방하여 혈관 생물학 연구에 활용됩니다.

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이 작품에 대 한 과학적 연구 (B) (20291958) N.U.;에 보조금에 의해 지원 되었다 젊은 과학자를 위한 연구비 뉴질랜드를 (A) (25713024)

동물 보호 및 실험 동물 관리에 대 한 지침을 따라야 하 마마 츠 대학 학교의 의학 동물 관리 위원회의 센터에서 수행 했다.
 1. 모델을 만들기 위한 수술 참고: 10 구슬 소독 기에 수술 도구를 배치 s preoperatively. 멸 균 글러브를 사용 하 여 intraoperatively.
<ol><li>사용 남성 쥐 300-400 g.를 무게 쥐 음식에 대 한 액세스를 허용 하 고 광고 libitum 물.</li>
	<li>는 Isoflurane 흡입 (2.0-3.0 mL/L)와 쥐 anesthetize. 발가락 핀치에 의해 적절 한 anesthetization를 확인 하십시오.</li>
	<li>전기 면도기, 복 부에 머리를 면도 하 고 알코올과 povidone-요오드 솔루션으로 복 부를 문질러.</li>
	<li>작업 테이블에서 부정사 위치에 쥐를 놓습니다. 수 의사 연 고를 사용 하 여 쥐에 &#39; 마 취에서 건조를 방지 하기 위해 s 눈.</li>
	<li>는 개복 술 복 부 정중 선 복 부 절 개를가 위를 사용 하 여 수행 합니다. 분명 수술 필드 확보, 팩 복 부 내용 복 부 구멍 안에 상처 견인을 사용 하 여 멸 균 거 즈와.</li>
	<li>대동맥 혈관 주위 조직에서 분리 하려면 부드럽게를 선택 하 고는 retroperitoneum 대동맥 벽을 노출 하 고 벗 겨 지 다 infrarenal 대동맥에서 분기 왼쪽된 신장 정 맥의 수준에서 후 공간에 핀셋으로 눈물은 혈관 주위 조직 ( 그림 1A).</li>
	<li>블록 혈액을 5-0 실크 문자열 복 부 대동맥에서 분기 혈관 대동맥 루멘 좁은 하지 않는 대동맥에서 지점에서 공급 하는 Ligate.</li>
	<li>대동맥 혈액 흐름을 차단 하는 혈관 클립 바로 아래 신장 동맥 및 대동맥의 분기 바로 위에 배치. 
	참고: 클립의 크기는 혈액의 흐름을 완전히 차단 하 대동맥 직경 보다 큰 이어야 합니다. 임시 5-0 실크 문자열 합자 만으로는 또한 클립 대신 혈액 흐름을 차단.</li>
	<li>폴리우레탄 카 테 터를 삽입 하려면 대동맥 클립, 신장 동맥 분 지에 인접 한에서 distally 마이크로 시저 5mm를 사용 하 여 앞쪽 대동맥 벽을 잘라 대동맥 벽의 표면에 점 출혈을 만드는 비슷합니다.</li>
	<li>폴리우레탄 카 테 터 삽입 (0.55 m m, 내경 외경 0.37 m m)를 물으로 대동맥에서 혈액을 씻어 절 개를 통해 얕게 바늘 내재 24 게이지를 사용 하 여. 폴리우레탄 테에 물으로 채워진 1 mL 주사기를 관리 하 고 물으로 대동맥에 나머지 혈액을 멀리 세척. 관개, 후 대동맥에서 카 테 터 제거.</li>
	<li>폴리우레탄 카 테 터를 삽입 하기 전에 (1.20 m m, 내경 외경 0.94 m m) 18-게이지 내재 바늘을 사용 하 여 잘라 폴리우레탄 테 길이가 10 mm ( 그림 1B).
	1.9 단계에서 만든 절 개에서 대동맥 루멘으로 폴리우레탄 카 테 터의 <ol><li>삽입 잘라 조각. 완전히 10 m m 카 테 터 대동맥 루멘으로 놓고 절 개 위치에 맞게 카 테 터의 중간점 위치 (즉, 카 테 터와 절 개를 커버).</li>
	</ol></li> <li>8-0 monofilament 문자열 ( 그림 1C)을 사용 하 여 중단 봉합 절 개를 복구.</li>
	<li>선 5-0 실크 문자열 및 폴리우레탄 테 ( 그림 1D)의 조합을 사용 하 여 복 부 대동맥. 
	참고: 대동맥 루멘 내재 카 테 터에 의해 유지 수 있습니다. 카 테 터 위치 이후 방지 하기 위해 단단히 대동맥 선 외과 의사 &#39; s 매듭은 것이 좋습니다 때 묶는 매듭, 두 배 overhand 매듭 형성의 첫 번째 던지기는 여분의 트위스트를 추가 하 고 추가 차례 더 많은 마찰을 제공 하 고 완화 하는 것을 줄일 수 있습니다.</li>
	<li>결 찰, 후 대동맥 분기점에서 혈관 클립을 제거 한 다음, 제거를 antegrade 혈액 흐름을 복원 하는 신장 동맥 아래 혈관 클립. 심한 대동맥 맥 동 확인.</li>
	<li>두 레이어, 복 막 및 다른 레이어, 4-0 폴 리 프로필 렌 봉합에 복 부 절 개를 닫습니다. 단단히 protruded 오르간을 방지 하기 위해 절 개를 봉합.</li>
	<li>복 부 절 개에 국 소 lidocaine을 적용합니다. 식을 반환 될 때까지 난방 패드에 쥐를 놓습니다. 두지 마십시오 쥐 무인 sternal recumbency를 유지 하기 위해 충분 한 의식 회복 될 때까지. 그것은 완전히 복구 될 때까지 작업을 다른 쥐의 회사를 겪고 있다 쥐를 반환 하지 않습니다.</li>
	<li>작업 후 쥐 밀접 하 게 모니터링합니다. 쥐 조 난 또는 몸 체중 감소의 흔적을 보여줍니다 하는 경우 멸 균 식 염 수 (1.0-2.0 mL) bolus를 피하 주사.</li>
	<li>Postoperatively, 초음파 echogram에 확대 대동맥의 시간-과정 개발을 관찰합니다. 설명 5 복 부 대동맥의 외부 가장자리에 가장자리 안쪽에서 최대 직경 측정.</li>
</ol> 2. 수확, 고정, 및 Elastica 반 Gieson (EVG) 얼룩 <ol><li>28 일 postoperatively, sodium pentobarbital 관리 &#8805; 100 mg/kg는 쥐를 안락사를 intraperitoneally.</li>
	<li>자르면 쥐 &#39; s 복 부 구멍 ventrally. 메스를 사용 하 여 초기 절 개를 확인 합니다. 가 위를 사용 하 여 동맥 류를 수확 하 고 수확된 aortas 24-48 헤에 대 한 중립으로 버퍼링 하는 10% 포 르 말린에 장소 
	참고: 외과 의사는 동맥을 노출 하는 경우 대동맥과 다른 장기에 부상을 방지 하기 위해 주의 해야 합니다. 높은 복 부 기관, AAA 형성을 나타내는 관찰 한다. 그림 2는 vivo에서 이미지와 비보 전 이미지; AAAs의 견본이 파열 되지.</li>
	<li>EVG 얼룩 9 <ol><li>솔루션 준비 <ol><li>준비 Verhoeff &#39; 주어진된 순서에 따라 다음을 혼합 하 여 s hematoxylin: 알콜 되며 20 mL, 10% 제 2 철 염화 8.0 mL, 그리고 Lugol &#39; s 요오드 8 mL. 각 추가 사이 솔루션을 믹스. 이 솔루션을 필요에 따라 신선한 준비 될 수 있다.</li>
			<li>준비 반 Gieson &#39; s 솔루션 1% 산 fuchsin 혼합 하 여 1 mL 및 포화 picric 산 45 mL. 고 서 서 하룻밤 잘 수 있습니다. 이 솔루션은 2 주 동안 안정.</li>
			<li>준비 차별화 솔루션 (2% 제 2 철 염화 물) 10% FeCl 3 10 mL 40 ml에서를 혼합 하 여 증류수. 이 솔루션을 필요에 따라 신선한 준비 있습니다.</li>
			<li>5.0 g 나트륨 thiosulfate 증류수 100 mL 물에 용 해 하 여 준비 5% 포. 이 솔루션은 1 년 동안 안정.</li>
		</ol></li> <li>얼룩 절차 참고: 자세한 내용은 참조 하십시오 참조 9.
		<ol><li>Verhoeff에는 aortas를 배치 하는 10 분을 위해 간단히, 증류수에 수확된 aortas의 고정된 파라핀 섹션 화 &#39; s 되며 물과 차별화 솔루션 (2% FeCl 3)에서 10-30 배 수영 25 분 세척에 대 한. 린스 물에. 1 분 씻어 물에 대 한 5% 포에 놓습니다. 반 Gieson에서 &#39; 5 분에 대 한 s 솔루션</li>
			<li>Dehydrate 다음에서 알코올에 순서: 75%, 90%, 95%, 100%, 그리고 100% 알코올 30 s 각. 그런 다음, 선택을 취소 5 분, 크 실 렌에 두 번 합니다. 수 지 장착 매체 coverslip에. 
			참고: 탄성 섬유 표시 검정; 블루 블랙 핵: 즐 블루ck; 콜라겐: 빨강; 그리고 다른 조직 요소: 노란색.</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Wolinsky, H., Glagov, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+abdominal+and+thoracic+aortic+medial+structure+in+mammals.+Deviation+of+man+from+the+usual+pattern%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Comparison of abdominal and thoracic aortic medial structure in mammals. Deviation of man from the usual pattern.</a> Circ Res. 25 (6), 677-686 (1969).</li>
<li>Sano, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphangiogenesis+and+angiogenesis+in+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Lymphangiogenesis and angiogenesis in abdominal aortic aneurysm.</a> PLoS One. 9 (3), e89830(2014).</li>
<li>Vorp, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+intraluminal+thrombus+in+abdominal+aortic+aneurysm+with+local+hypoxia+and+wall+weakening%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Association of intraluminal thrombus in abdominal aortic aneurysm with local hypoxia and wall weakening.</a> J Vasc Surg. 34 (2), 291-299 (2001).</li>
<li>Tanaka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adventitial+vasa+vasorum+arteriosclerosis+in+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Adventitial vasa vasorum arteriosclerosis in abdominal aortic aneurysm.</a> PLoS One. 8 (2), e57398(2013).</li>
<li>Tanaka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoperfusion+of+the+Adventitial+Vasa+Vasorum+Develops+an+Abdominal+Aortic+Aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Hypoperfusion of the Adventitial Vasa Vasorum Develops an Abdominal Aortic Aneurysm.</a> PLoS One. 10 (8), e0134386(2015).</li>
<li>Tanaka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+Mass+Spectrometry+Reveals+a+Unique+Distribution+of+Triglycerides+in+the+Abdominal+Aortic+Aneurysmal+Wall%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Res%22%5BJournal%5D)">Imaging Mass Spectrometry Reveals a Unique Distribution of Triglycerides in the Abdominal Aortic Aneurysmal Wall.</a> J Vasc Res. 52 (2), 127-135 (2015).</li>
<li>Kugo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+preventive+effect+of+fish+oil+on+abdominal+aortic+aneurysm+development%5BTitle%5D)+AND+%22Biosci+Biotechnol+Biochem%22%5BJournal%5D)">The preventive effect of fish oil on abdominal aortic aneurysm development.</a> Biosci Biotechnol Biochem. 80 (6), 1186-1191 (2016).</li>
<li>Kugo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocyte+in+vascular+wall+can+induce+the+rupture+of+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Adipocyte in vascular wall can induce the rupture of abdominal aortic aneurysm.</a> Sci Rep. 6, 31268(2016).</li>
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<li>Yoshimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regression+of+abdominal+aortic+aneurysm+by+inhibition+of+c-Jun+N-terminal+kinase%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Regression of abdominal aortic aneurysm by inhibition of c-Jun N-terminal kinase.</a> Nat Med. 11 (12), 1330-1338 (2005).</li>
<li>Azuma, J., Asagami, T., Dalman, R., Tsao, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creation+of+murine+experimental+abdominal+aortic+aneurysms+with+elastase%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Creation of murine experimental abdominal aortic aneurysms with elastase.</a> J Vis Exp. (29), (2009).</li>
<li>Lu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcutaneous+Angiotensin+II+Infusion+using+Osmotic+Pumps+Induces+Aortic+Aneurysms+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Subcutaneous Angiotensin II Infusion using Osmotic Pumps Induces Aortic Aneurysms in Mice.</a> J Vis Exp. (103), (2015).</li>
<li>United Kingdom, E. T. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.nejm.org/doi/full/10.1056/NEJMoa0909305#t=article">Endovascular versus open repair of abdominal aortic aneurysm.</a> N Engl J Med. 362 (20), 1863-1871 (2010).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

생리 적인 조건 하에서 대동맥 벽의 내부 레이어는 외부와 중간 레이어는 영양 VV, adventitia에서 중간 VV1에 침투 하는 반면 luminal 혈액 흐름에서 확산에 의해 영양는 있습니다. VV 혈 복 부 대동맥 벽에는 다음 세 가지 방향/영역에서 발생 한 수 있습니다: (1) 대동맥 벽, 대동맥 벽, 및 (3) 혈관 주위 조직10(2) 원심 방향 통해 인접 방향. 이전에, 인간의 조직의 조직학 분석 중요 한 협 착 또는 폐색 복 부 대동맥 벽에 VV 혈액 흐름 감소4수 제안 AAA 벽에 VV의 식별. 그것은 infrarenal AAA 폴리우레탄 카 테 터 삽입 및 infrarenal 복 부 대동맥의 봉합 결 찰의 조합에 기인 했다이 프로토콜에서 매우 중요 한 포인트. 신중 하 게 조직 계층을 벗 겨 지 다, 외과 원활 하 게 대동맥에 폴리우레탄 카 테 터를 삽입 하 고 단단히 hypoperfusion adventitial VV 및 동맥 류 형성으로 인해 만성 저 산소 증을 대동맥 선 해야 합니다. 이러한 기술을 사용 하 여, 대동맥 벽에 혈액의 흐름을 따라서 감소 하 고, 그리고 로컬 hypoxic 환경 유발 됩니다. 혈액 흐름 감소와 hypoxia 유발 동맥 형성 나타냅니다 VV 혈 복 부 대동맥 벽으로 AAA 형성의 병 인에는 역할을 한다.
특히, 대동맥 동맥 모델 다음 조건을 충족 해야 합니다: 기준선, tunica 매체의 퇴보와 대동맥 벽의 염증에 비해 혈관 직경에 1.5-fold 증가. 가장 인기 있는 동물 모델 유도 하는 염증 성 반응을 CaCl211, elastase12, angiotensin II13등 물질을 사용 하 여 건설 되었습니다. 이 모델 수 높은 재현성을가지고 하 고 분명히 병 적인 변화를 일으킬 그들은 일반적으로 연구에서 사용 된. 우리의 모델에서 우리는 사용 하 여 초음파에서 7 일 마다 절차 (그림 3) 후 날 28까지 절차를 수행 하기 전에 대동맥 직경 평가. 결과 대동맥 직경 적당히 증가 28 일 동안, 직경에 있는이 변화는 이전 설치류 모델에서 유사한 나타내는 보여주었다. 혈관 형태의 총 관찰 표시 부드러운 방 추상 모양 (그림 2). 28 일에 우리는 쥐를 희생 하 고 복구 된 대동맥 조직의 histopathological 분석을 수행. 찢 어과 tunica 매체와 adventitia의 탄성과 콜라겐 섬유의 실종 (그림 4) 관찰 되었다. 또한, 염증 세포, 대 식 세포, 등 tunica 매체 tunica adventitia에서 참석 했다.
현재, AAAs 사용할 수 있는 치료 옵션에 외과 혈관 내 수술 텐트 접목, AAA 파열14환자의 30-50%의 사망률으로 제한 됩니다. 그러나, 약 AAAs 치료 임상 사용을 위해 승인 되었습니다. 병 적인 결과 인간과 AAA 연구에 사용 되는 설립된 동물 모델 사이에서 불일치는 논쟁이 있다. 인간의 AAA 및 AAA 모델 동물 간의 병 인 유사성 약리 치료의 발전을 위해 필수적입니다. 설치류 모델의 효과 관한 우리의 쥐 모델은 형태학 상으로 인간 intraluminal 혈전5 와 지질8점에서 비슷합니다. 또한,이 연구에서 쥐의 약 20%가 AAA 파열 졌고 절차 후 28 일 이내에 사망 했다. 대동맥 동맥 류 파열은이 질병에 대 한 가장 중요 한 이벤트, 파열 설립 실험 AAA 모델, 공통 이며 메커니즘은 아직 해명 하지 했습니다. 따라서,이 모델은 대동맥 직경의 팽창과는 동맥의 파열의 메커니즘을 이해 하는 데 유용 합니다.
이 모델의 창조는 어떤 수술 절차에 대 한 필요 합니다. 따라서, 연구자는이 모델의 한계는이 모델을 만드는 연습 해야 합니다. 미래에, 우리는 우리가 줄일 수 있습니다 혈액 흐름 점차 VV 벽을 두껍게 하 여 자발적인 대동맥 동맥에서 발생 한 설치류 모델을 만드는 고 싶습니다.

복 부 대동맥은 다음 세 계층으로 구성: 내부 혈관 벽 (intima), 중간 레이어 (미디어), 그리고 혈관 외벽 (adventitia), 이들의 adventitia 독특한 혈액 공급 시스템 바사 vasorum (VV)로 알려져 있다. 대동맥 조직 adventitial VV 관류 하 고 대동맥 혈액 흐름1에서 간단한 산소 보급을 통해 산소와 함께 공급 된다. 그러나, 지리적으로, 복 부 대동맥 대동맥의 다른 부분에서에 비해 VVs의 최소 배포가 하고있다. 2
이전 연구 보고 인간의 복 부 대동맥 동맥 류에서 조직 hypoxia에 두꺼운 intraluminal 혈전 (ILT)3(AAA) 벽. 또한, 관련 된 조직 hypoxia AAA 벽4에서 상당히 높은 비율로 arteriosclerotic 변경 aneurysmal 벽에 adventitial VV 가려진은 표시 되었습니다. 이러한 결과에 따라, AAA의 소설 설치류 모델 adventitial VV hypoperfusion5를 유도 하 여 만들었습니다. 이 모델에서 VV hypoperfusion 발생 조직 hypoxia 및 infrarenal AAA, 형태학 및 병 적인 특성 인간 AAA6의 그들과 유사 했다의 개발. 주요 사례 ILTs의 존재와 형성 adipocytes6, 그리고 파열7,8를 일으킬 가능성이의 축적 했다. 이 발견 이전 설치류 모델에서 드물게 관찰 되었습니다. 따라서이 모델 메커니즘 AAA 개발 및 파열에 대 한 책임의 깊은 이해에 크게 기여할 수 있습니다. 소개 하 고 adventitial VV hypoperfusion 통해 AAAs를 유도 하는 데 사용 하는 표준 프로토콜을 설명 하 고 수술 기법을 사용 하 여 대동맥 벽에 저 산소 증을 유발 하는 방법을 설명.

<table><tbody><tr><td>쥐</td><td>일본 SLC. Inc</td><td>Slc:SD 랫</td><td>Sprague&ndash; Dawley ratTM</td></tr><tr><td>포비돈-요오드 용액</td><td>Libatape Pharmaceutical Co., Ltd.</td><td></td><td></td>4987335 111457</tr><tr><td>5-0 비단끈</td><td>아키야마 메디컬 MFG. CO.,LTD</td><td>JIS No.1</td><td></td></tr><tr><td>혈관 클립</td><td>나츠메 제작소 주식회사</td><td>C-42-S-2</td><td></td></tr><tr><td>폴리우레탄 카테터(24게이지 주입 바늘)</td><td>MEDIKIT</td><td>24G</td><td>Supercath Z4VTM, 24게이지 침투 바늘</td></tr><tr><td>폴리우레탄 카테터(18게이지 주입 바늘)</td><td>MEDIKIT</td><td>18G</td><td>Supercath Z3VTM, 18게이지 침투 바늘</td></tr><tr><td>8-0 모노필라멘트 스트링</td><td>Ethicon 봉합사</td><td>c-42-S-2</td><td>PROLENE 폴리프로필렌 봉합사, 봉합사로 절개 부위 수리</td></tr></tbody></table>

adventitial 바사 vasorum 관류를 차단 하 여 복 부 대동맥 동맥 류의 설치류 모델의 생성

Creation of a Rodent Model of Abdominal Aortic Aneurysm by Blocking Adventitial Vasa Vasorum Perfusion

Adventitial 바사 vasorum (VV) 산소와 대동맥 벽에 영양을 제공합니다. 대동맥 벽에서 hypoxia 확대 복 부 대동맥 동맥 류 (AAAs) 발생할 수 있습니다. 이 문서는 소개 하 고 대동맥 루멘 및 infrarenal 복 부 대동맥의 봉합 결 찰에 폴리우레탄 카 테 터 삽입의 조합으로 만든 adventitial VV hypoperfusion 통해 AAAs를 유도 하는 데 사용 하는 표준 프로토콜에 설명 합니다.
프로토콜 남성 쥐 음식과 물 광고 libitum제공 되는 300-400 g 무게의 사용을 포함. 복 부 중간 복 부 절 개를 가진 개복 술 후 대동맥의 각 질 제거는 혈관 주위 조직에서 혈액 흐름을 차단 수행 됩니다. 신장 동맥 분 지에 인접 한 작은 절 개를 포함 하는 Aortotomy를 수행 하 고 폴리우레탄 테 18 게이지 내재 바늘을 사용 하 여 삽입 됩니다. 절 개, 수리 후 카 테 터를 통해 대동맥의 단단한 결 찰 대동맥 혈액의 흐름을 방해 하지 않고 대동맥 벽을 통해 인접 방향에서 VV 혈액 흐름을 차단 합니다. 이 기술은 진보 대동맥 팽창으로 AAA를 유도할 수 있다.
이 모델의 가장 큰 장점은 VV hypoperfusion 조직 hypoxia과 인간의 AAA의 그들과 유사한 형태학 및 병 적인 특성을가지고 있는 infrarenal AAA, 개발 원인입니다.

기술된 요원 기술 쥐에 폴리우레탄 카 테 터 삽입 및 infrarenal 복 부 대동맥의 봉합 결 찰의 조합을 사용 하 여 만성 대동맥 hypoxia 유발 동맥의 새로운 동물 모델을 만듭니다. 쥐 프로토콜 섹션에 설명 된 절차 후 안락사 28 일 있었다. aortas 수확 되었고 동맥 류 형성을 시각화 하기 위해 몇 군데. 그림 2 는 방 추상 AAA의 개발. Ex vivo에서 대동맥의 위쪽과 아래쪽 끝 팽창 없이 정상적인 직경이 있다. 대동맥 직경 transabdominal 초음파 (그림 3)를 사용 하 여 측정 되었다. 지름은 일반적으로 프로시저; 후에 대략 14 일에 최대 크기에 도달 그 후, 그것은 그대로 또는 약간 증가. 그림 4 는 EVG 얼룩 후 최대 직경에는 동맥의 histopathological 이미지를 보여준다. (동맥)의 28 일에 조직 이미지 날 0에 비해 탄성 섬유의 저명한 저하를 보였다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55763/55763fig1.jpg"> 
복 부 대동맥 동맥 류 (AAA)를 유도 하기 위해 그림 1: 수술 절차. (A) infrarenal 대동맥 주변 조직에서 피부 박피입니다. (10 m m 긴 컷 B)는 폴리우레탄 카 테 터 대동맥에 작은 절 개를 통해 삽입 됩니다. (C) 절 개는 8-0 monofilament 봉합으로 복구 되 고 혈액의 흐름이 복원 됩니다. (D)는 대동맥은 삽입 된 카 테 터에 5-0 비단 봉합으로 출혈. 눈금 막대 = 5 m m. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55763/55763fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55763/55763fig2.jpg"> 
그림 2: 수술 후 대표 결과입니다. 방 추상 복 부 대동맥 동맥 류 수술 후 하루 28 보여주는 개발에 거시적인 전망. retroperitoneum의 높은 마진 (깨진된 선; 왼쪽) 동맥의 외부 가장자리에 해당합니다. Ex vivo에서 대동맥의 위쪽과 아래쪽 끝 (오른쪽) 정상입니다. 눈금 막대 = 3 m m. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55763/55763fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55763/55763fig3.jpg"> 
그림 3: 최대 대동맥 직경 transabdominal 초음파를 사용 하 여 측정 대동맥 직경은이 쥐 모델에서 꾸준히 증가 했다. 대동맥 직경은 평균 ± 표준 편차로 표시 됩니다 (n = 12). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55763/55763fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55763/55763fig4.jpg"> 
그림 4: 얼룩 Elastica 밴 Gieson와 aneurysmal 조직의 대표 이미지. EVG 퇴행 성 탄력 있는 lamina에서 보여주는 미디어와 intraluminal 혈전의 형성 절차 후 28 일 (오른쪽) 얼룩과 조직학 평가. 대동맥 미디어에 탄성 섬유 조각화 및 대동맥 adventitia에 스파스 콜라겐 섬유는 28 일에 관찰 된다. 0 (왼쪽) 프로시저가 전에 이다. 눈금 막대 = 500 µ m. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55763/55763fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

루멘 대동맥 및 대동맥의 봉합 결 찰에 폴리우레탄 카 테 터 삽입 adventitial 바사 vasorum hypoperfusion 인해 만성 저 산소 증 유발. 이 문서에서는 AAA의 인 간에 있는 유사한 특성을 가진 복 부 대동맥 동맥 류 (AAA)의 소설 동물 모델을 설명합니다.

Adventitial 바사 Vasorum 관류를 차단 하 여 복 부 대동맥 동맥 류의 설치류 모델의 생성

The adventitial vasa vasorum (VV) provides oxygen and nourishment to the aortic wall. Hypoxia in the aortic wall can cause enlarged abdominal aortic ...

본 실험 절차의 전반적인 목표는 쥐에서 대동맥 조직 저산소증을 유도하여, 점진적인 대동맥 확장이 수반되는 복부 대동맥류(abdominal aortic aneurysm, AAA)를 발생시키는 것입니다. 이 방법은 복부 대동맥류의 발생 및 파열을 유발하는 메커니즘에 관한 대동맥류 연구 분야의 핵심 질문들을 해결하는 데 도움을 줄 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 쥐 모델에서 나타나는 형태학적 및 병리학적 특성이 인간의 복부 대동맥류에서 관찰되는 특성과 유사하다는 점입니다.우리는 인간 복부대동맥류(AAA)의 또 다른 가능성을 조사하던 중 이 방법에 대한 아이디어를 처음 얻게 되었습니다. 저산소 유도 수술은 텍스트 중심의 설명만으로는 학습하기 어렵기 때문에, 이 방법의 시각적 시연이 매우 중요합니다. 수술 과정은 혈관 외과 의사인 Tatsuro Yata와 우리 연구실의 전임 연구원인 Hirona Kugo가 시연할 예정입니다.발가락 꼬집기로 적절한 진정 수준을 확인한 후, 전기 면도기를 사용하여 300~400 mg 무게의 쥐의 복부 털을 깎고, 노출된 피부를 알코올과 포비돈-요오드 용액으로 순차적으로 소독합니다. 쥐를 수술대 위에 앙와위로 놓고 동물의 눈에 연고를 도포합니다. 다음으로, 가위를 사용하여 복부 정중선 절개를 실시하고, 멸균 거즈와 상처 견인기를 사용하여 복강 내의 복강 내용물을 패킹합니다.혈관 주위 조직으로부터 대동맥을 분리하기 위해, 핀셋을 사용하여 후복막을 부드럽게 들어 올려 찢어 대동맥 벽을 노출시킵니다. 그런 다음, 후복막 공간 내에서 좌측 신정맥부터 분지점까지의 신하 대동맥을 혈관 주위 조직으로부터 박리합니다. 복부 대동맥에서 분지되는 혈관들은 5-0 silk 봉합사를 사용하여 결찰함으로써 혈액 공급을 차단하되, 대동맥 내강이 좁아지지 않도록 대동맥에서 떨어진 지점에서 결찰합니다.대동맥 혈류를 차단하기 위해 신동맥 바로 아래와 대동맥 분지점 바로 위에 혈관 클립을 배치합니다. 대동맥 벽 표면에 점상 출혈을 만드는 것과 유사하게, 신동맥 분지 인접 부위의 대동맥 클립에서 원위쪽으로 5 mm 떨어진 지점에 마이크로 가위를 삽입하여 대동맥 전벽을 절개하고, 24-gauge 인듀엘링 바늘을 사용하여 절개창을 통해 폴리우레탄 카테터를 얕게 삽입합니다. 물이 채워진 1-mL 주사기를 폴리우레탄 카테터에 연결하고 대동맥에 남아 있는 혈액을 세척합니다.다음으로, 새로운 폴리우레탄 카테터를 10 mm 길이로 자른 후, 이 카테터를 대동맥 내강 절개부 안으로 완전히 삽입합니다. 카테터의 중간 지점이 절개 위치와 일치하도록 다시 배치하고, 8-0 단필라멘트 봉합사를 사용하여 단속 봉합으로 절개부를 폐쇄합니다. 5-0 실크 봉합사와 폴리우레탄 카테터를 사용하여 외과용 매듭으로 복부 대동맥을 결찰합니다.카테터가 고정되면, 대동맥 분지점과 신동맥 아래의 혈관 클립을 제거하여 순방향 혈류를 복원하고 대동맥의 육안적 박동이 있는지 확인합니다. 거즈를 제거한 후, 장기 탈출을 방지하기 위해 4-0 polypropylene 봉합사로 복부 절개 부위를 두 층으로 단단히 봉합합니다. 그런 다음, 복부 절개 부위에 국소 리도카인을 도포하고 쥐를 가열 패드 위에 올려놓은 뒤 완전히 회복될 때까지 모니터링하며 관리합니다.수술 후, 초음파 에코그램을 통해 확장된 대동맥의 시간 경과에 따른 발달 과정을 관찰하며, 표준 프로토콜에 따라 복부 대동맥의 내측 가장자리부터 외측 가장자리까지의 최대 직경을 측정합니다. 수술 28일 후, 메스로 복부를 새로 복측 절개하여 개복하고 가위로 동맥류를 적출합니다. 적출한 대동맥은 10% 중성 완충 포르말린에 24~48시간 동안 보관합니다.표준 프로토콜에 따라 대동맥을 파라핀에 매립하고 대동맥 조직 절편을 얻은 후, 고정된 파라핀 절편을 증류수에서 10분 동안 수화시키고, 이어서 Verhoeff's haematoxylin에서 배양합니다. 녹 발생 및 부식은 Verhoeff's haematoxylin 및 van Gieson's solution 실험 활동을 통해 확인할 수 있습니다. 따라서 이러한 조직 염색약의 신선도와 배양 시간은 기록 보존 및 선택적 염색에 있어 중요합니다.25분 후, 절편을 물로 1분씩 3회 세척한 다음, 분별액(differentiating solution)에 10~30회 담갔다 뺍니다. 절편을 다시 물로 3회 세척하고, 샘플을 5% sodium thiosulfate 용액에 1분 동안 둡니다. 다시 한번 물로 세척한 후, 샘플을 van Gieson 용액에 5분 동안 담급니다.다음으로, 에탄올 농도를 높여가며 30초씩 침전시켜 조직을 탈수시킨 후, 자일렌(Xylene)으로 5분간 두 번 배양하여 투명화합니다. 그 후 resonance 마운팅 매질을 사용하여 적절한 크기의 커버슬립으로 절편을 덮습니다. 이 이미지들에는 카테터 삽입 28일 후의 대표적인 복부 대동맥류가 나타나 있습니다.복부 초음파를 통해 대동맥의 상단과 하단을 측정한 결과, 카테터 삽입 직후에는 확장이 없는 정상 직경을 보였으나, 삽입 후 약 14일째에 최대 크기로 증가하였으며 실험 기간 종료 시까지 변함없거나 약간 증가한 상태를 유지하였습니다. 28일째에 동맥류의 조직병리학적 분석을 수행한 결과, 0일째에 관찰된 것과 비교하여 탄성 섬유의 현저한 퇴화가 나타났습니다. 이 기술을 숙달하여 적절하게 수행한다면 약 1시간 이내에 완료할 수 있습니다.이 절차 이후에는 개별 연속 기능에 관한 추가적인 질문에 답하기 위해 in vitro 분석과 같은 다른 방법들을 수행할 수 있습니다. 개발 이후, 이 기술은 복부 대동맥류 분야의 연구자들이 특정 환자 인구 집단에서 해당 질환을 탐구할 수 있는 길을 열어주었습니다. 이 영상을 시청하고 나면, 쥐 모델에서 점진적인 대동맥 확장을 동반한 복부 대동맥류를 유도하기 위해 대동맥 조직 저산소증을 유발하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.수술 기구를 사용하는 것은 매우 위험할 수 있으며, 본 절차를 수행하는 동안 부상 및 감염 방지를 위한 예방 조치를 항상 취해야 한다는 점을 잊지 마십시오.

creation-rodent-model-abdominal-aortic-aneurysm-blocking-adventitial

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 동영상은 복부 대동맥의 infrarenal 세그먼트에 돼지의 췌장의 엘라스타제의 과도 intraluminal 주입을 통해 생쥐의 복부 대동맥 동맥류 (AAA)을 유도하는 방법을 보여줍니다. 모델은 다수의 유전자 변형과 유전자 녹아웃 마우스의 출현으로 인해 AAA의 pathobiology에 광범위한 통찰력을 추가할 수 있습니다.

엘라스타제와 Murine 실험 복부 대동맥 동맥류의 생성

이 동영상은 쥐에 이식 vasculopathy (TVP)의 개발을 연구하기위한 간단한 모델로 orthotopic 대동맥 이식 모델을 보여줍니다.

Orthotopic 대동맥 이식 : 만성 Vasculopathy의 개발 연구에 생쥐 모델

동맥류 endograft 제외 후 조직 학적 및 생화학 적 수정은 아직 불분명하다. 우리는 쥐 동맥류에 endograft 이식의 새로운 모델을 설명합니다. 영속적 인 순환 혈액 스트림 인터페이스, 새로운 혈관 생체 적합 물질 평가와와없는 혈전 분석을 통해,이 모델은 더 나은 혈관 동맥류 제외 pathobiology을 이해하는 데 도움이 될 것입니다.

혈관 동맥류 수리의 새로운 쥐과 모델

쥐의 미세수술 측벽 동맥류는 복부 대동맥에 대한 대동맥 이식편의 종단 간 문합에 의해 생성됩니다. 단계별 지침을 제시하고 성공적인 실험적 낭골 동맥류 생성을 위한 해부학적 및 외과적 세부 사항에 대해 논의합니다.

헬싱키 쥐 미세 측벽 동맥류 모델

본 프로토콜은 마우스에서 적외선 복부 대동맥의 출현에 엘라스타제의 직접 적용을 통해 엘라스타아제 유도 AAA 모델에 대한 표준화된 수술 방법을 기술한다.

엘라스타제의 혈관주위 적용에 의해 유도된 마우스 복부 대동맥류 모델

이 프로토콜은 AAA의 병리학적 특징과 분자 메커니즘을 연구하기 위해 인산칼슘 유발 복부 대동맥류(AAA) 마우스 모델을 설명합니다.

인산칼슘 유도 마우스 복부 대동맥류 모델

이 원고는 염화칼슘과 엘라스타제를 사용하여 생쥐 복부 대동맥류 모델을 확립하기 위한 프로토콜을 제시하고 이전 모델링 방법의 장점을 결합합니다. 이 모델은 복부 대동맥류의 기저에 있는 병태생리학적 메커니즘을 조사하는 데 사용할 수 있습니다.

Periadventitial Calcium Chloride and Elastase Infiltration에 의한 마우스 복부 대동맥류 모델

이 프로토콜은 엘라스타제를 대동맥에 직접 적용하고 음용수를 통해 ß-아미노프로피오니트릴을 투여하는 조합을 통해 마우스의 진행성 복부 대동맥류를 모델링하는 체계적인 외과적 접근 방식을 설명합니다.

국소 엘라스타제와 구강 ß-아미노프로피오니트릴의 조합에 의한 마우스의 고급 복부 대동맥류 모델링

본 프로토콜은 단일 수술을 통해 쥐 모델에서 경동맥류 유도를 위한 표준화된 수술 방법을 설명합니다.

경동맥류 형성의 쥐 모델

이 프로토콜은 마우스의 흉부 대동맥 박리 유도를 위한 상세한 단계별 절차를 제공합니다. 구체적으로, 여기에는 β-아미노프로피오니트릴 및 안지오텐신 II의 필요한 용량의 정확한 계산, 삼투압 펌프 충전 절차 및 삼투압 펌프의 주입 기술이 포함됩니다.

경구용 β-아미노프로피오니트릴 및 피하 안지오텐신 II 주입에 의해 유도된 흉부 대동맥 박리의 쥐 모델

이 프로토콜은 면역 감작 성분을 포함한 AAA 모델로서, 엘라스틴 감작과 혈관 주위 엘라스타제 적용을 사용하여 C57BL/6 마우스에서 복부 대동맥류(AAA)를 반복 가능하고 신뢰할 수 있게 유도하는 방법을 제공합니다.

엘라스틴 감작과 혈관 주위 엘라스타제를 이용한 쥐 복부 대동맥류 모델의 신뢰성 높은 생성

배우세요 쥐에서 복부 대동맥류를 유도하는 혈관 카테터 삽입 및 결찰 기법을 통해 만성 조직 저산소증을 유발하는 방법을. 이 모델은 인간 질병의 형태학적 및 병리학적 특성을 모방하여 혈관 생물학 연구에 활용됩니다.

Adventitial 바사 Vasorum 관류를 차단 하 여 복 부 대동맥 동맥 류의 설치류 모델의 생성

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