Grondbeginselen van fokken en gespeend maken

Alle dierproeven die hier worden beschreven, moeten worden uitgevoerd in overeenstemming met de institutionele richtlijnen voor dierethiek en goedgekeurd door IACUC. Alle procedures moeten volgen de principes van de 3R's - Vervanging, Reductie en Verfijning - en moeten worden uitgevoerd door getraind personeel. 

1. Informatie die nodig is bij het samenbrengen van dieren omvat stam/stok van het dier met behulp van de juiste nomenclatuur, geboortedatum voor de fokker mannelijke en vrouwelijke, en de opzetdatum. Nauwkeurige registratie is essentieel voor fokkolonies.

2. Geslachtsbepaling van muizen en ratten gebeurt door de anogenitale afstanden te vergelijken. Bij vrouwtjes is de afstand tussen de anus en de uitwendige geslachtsdelen korter dan bij mannetjes. De aanwezigheid van een scrotale zak bij mannelijke dieren is een andere geslachtsindicator.

3. Selectie en opzet van het paringsschema
OPMERKING: Er zijn twee paringsschema's die kunnen worden gebruikt.

1. Getimeerde paring in proestrus/oestrus: Deze methode is gebaseerd op het samenbrengen van vrouwtjes met mannetjes op het punt van maximale ontvankelijkheid en vruchtbaarheid.
   1. De oestruscyclus moet bij de vrouwtjes worden gemonitord, hetzij door visuele controle van de uitwendige geslachtsdelen op veranderingen die kenmerkend zijn voor proestrus en oestrus, of door cytologisch onderzoek van vaginale afscheidingen (zie hieronder).
   2. Wanneer een vrouwtje wordt vastgesteld in proestrus of oestrus, wordt ze aan het eind van de dag samengevoegd met een mannetje, omdat de dieren over het algemeen 's nachts paren.
   3. De volgende ochtend wordt de vrouw gecontroleerd op een copulatieve plug (zie hieronder). Als er geen plug aanwezig is, kan de vrouw de hele dag bij het mannetje blijven en aan het einde van de dag opnieuw worden gecontroleerd op een copulatieve plug. Als alternatief wordt ze verwijderd uit de fokkooien als wordt vastgesteld dat ze niet langer in proestrus of oestrus is.
2. Willekeurige getimeerde paring: Deze methode is gebaseerd op het feit dat de oestruscyclus van knaagdieren erg kort is, 4-5 dagen lang.
   1. Voor deze methode kunnen paringen op elk moment worden ingesteld, en de vrouwtjes worden vervolgens elke ochtend en avond gecontroleerd op copulatieve pluggen totdat een plug wordt waargenomen.
   2. Een vrouw wordt 's avonds samengevoegd met een mannetje.
   3. Ze wordt gecontroleerd op een copulatieve plug aan het begin en einde van elke dag totdat een plug wordt waargenomen. Het duurt meestal 3 of meer dagen voordat een plug wordt gezien bij gebruik van deze methode.

4. Zwangerschap voorspellen

Aangezien palpatie van pups moeilijk is tot later in de zwangerschap, rond dag 10-12, zijn er commerciële echografiesystemen voor knaagdieren ontwikkeld; echter, weinig dieronderzoeksfaciliteiten hebben deze technologie. Daarom worden visualisatie van copulatieve pluggen, observatie van vaginale veranderingen of vaginale cytologie vaak gebruikt om te helpen bij het voorspellen van wanneer een vrouwtje een nest heeft verwekt (zie hieronder). Geen van deze methoden kan echter zwangerschap bevestigen. Zodra een copulatieve plug wordt waargenomen, moet het vrouwtje worden gecontroleerd op tekenen van zwangerschap, zoals gewichtstoename.

5. Bepaling van de fase van de oestruscyclus

1. Visuele inspectie
   ​OPMERKING: Voor getimeerde paring van muizen en ratten is visuele observatie van de vagina op veranderingen die kenmerkend zijn voor proestrus en oestrus de snelste methode om de fase van de oestruscyclus te bepalen, en het vereist geen speciaal materiaal.
   1. Bij het evalueren van de oestruscyclus met de visuele methode, is het belangrijk om de visuele inspectie uit te voeren in hetzelfde gebied met betrekking tot de lichtomstandigheden, omdat de lichtbron de waargenomen kleur van vaginale weefsels kan veranderen en evaluatie moeilijk kan maken. Bijvoorbeeld, de paarse tint van LED-verlichting maakt visuele detectie moeilijker.
   2. Om de fase van de oestruscyclus door visuele observatie te evalueren, kan het dier kort worden vastgehouden voor onderzoek. Waar mogelijk, moeten laagstress-verwerkingsmethoden, zoals tunnel- of bekerhantering, worden gebruikt in overeenstemming met de huidige institutionele richtlijnen om dierdwang te minimaliseren. De voorpoten kunnen op een kooidek rusten om de visualisatie van de vaginale opening te vergemakkelijken. 
   3. De vaginale opening van elk vrouwtje wordt beoordeeld op basis van de toestand van het weefsel rond het vaginale gebied en de grootte van de vaginale opening.
      1. Tijdens proestrus is de vaginale opening wijd en wordt gekenmerkt door zwelling van het omliggende weefsel. Het weefsel is roze van kleur en zeer vochtig. Vaak zijn er rimpels of strepen langs de dorsale en ventrale randen van de opening.
      2. Tijdens oestrus is de zwelling van de weefsels rond de vaginale opening verminderd, en de weefsels zijn niet zo vochtig en roze.
      3. Tijdens metestrus is de vaginale opening minimaal en is er verwaarloosbare zwelling.
      4. Tijdens diestrus is er geen zwelling van de weefsels rond het vaginale gebied, en de vaginale opening is klein en gesloten.
2. Vaginale cytologie
   ​Aangezien zowel muizen als ratten polyoestrus zijn, is de lengte van de oestruscyclus erg kort, variërend van 4-5 dagen. Het is soms noodzakelijk om alle vier de stadia van oestrus te identificeren: proestrus, oestrus, metestrus en diestrus. Vaginale cytologie is een zeer nauwkeurige methode