Fabricatie van Micro-weefsels met behulp van modules van Collageen gel met cellen

Summary

Oprichting van micro-weefsels met behulp van cilindrische collageen gels, genaamd modules, die ingesloten cellen en dat het oppervlak bevatten, is bekleed met endotheelcellen.

Abstract

Dit protocol beschrijft de fabricage van een type micro-weefsels genaamd modules. De module aanpak genereert uniform, schaalbaar en gevasculariseerd weefsel. De modules kunnen worden gemaakt van collageen en andere gelable of verknoopbare materialen. Ze zijn ongeveer 2 mm lang en 0,7 mm in diameter bij de fabricage, maar krimpen in omvang met ingesloten cellen of wanneer de modules zijn bekleed met endotheelcellen. De modules individueel zijn klein genoeg dat de ingebedde cellen binnen de diffusie limiet van zuurstof en andere voedingsstoffen, maar modules kunnen samen verpakt worden om grotere weefsels die zijn perfusable vormen. Deze weefsels zijn modulair opgebouwd, omdat verschillende celtypen kunnen worden ingebed in of gecoat op de modules voordat ze worden samen verpakt om complexe weefsels te vormen. Er zijn drie belangrijke stappen voor het maken van de modules: (1) het neutraliseren van het collageen en de inbedding in de cellen, (2) geleermiddelen het collageen in de buis en het snijden van de modules en (3) het bekleden van de modules met endotheelcellen.

Protocol

1) Bereiding van Tubing

1. Knip 2 tot 3 m lengte van polyethyleen buis (0,76 mm ID x 1,22 mm OD).
2. Draad een 20 G1 naald in een uiteinde van de slang.
3. Spoel de slang en plaats in converters een zelf-seal zakje (7 1 / 2 "x 13"). De twee uiteinden van de buizen moeten worden geplaatst aan het einde van de onverharde zak en tape op zijn plaats met gas sterilisatie tape.
4. Seal zak en gas te steriliseren.

2) neutralisatie van Collageen

Let op: 1 ml van collageen vult ongeveer 2 m van polyethyleen buizen.

1. Leg de benodigde hoeveelheid collageen die nodig is voor de....

Discussion

We hebben verzonnen verschillende micro-weefsels met behulp van modules ingebed met verschillende celtypen ^1-11. We hebben met succes embedded primaire cardiomyocyten, eilandjes, adipose mesenchymale stamcellen en stromale cellen evenals verschillende cellijnen waaronder HepG2, NIH 3T3 en kloon 9 levercellen. We hebben bekleed de modules met verschillende soorten endotheelcellen waaronder rat aorta endotheel-cellen, humane navelstreng endotheel cellen en humane microvasculaire endotheelcellen. Modules zijn oo.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Intramedic tubing PE60	BD Biosciences	427416	Different diameter of tubing can be used to change the diameter of the modules
Phosphate-buffered saline (PBS)	GIBCO, by Life Technologies	20012-027
Trypsin-EDTA	GIBCO, by Life Technologies	25200-072
Purcol acidificed collagen, 3 mg/mL	Cedarlane Labs	5005-B
Sodium bicarbonate	Sigma-Aldrich	S5761
20G needle	BD Biosciences	305175	Diameter of the needle needs to be similar to the diameter of the tubing
3 mL syringe	BD Biosciences	309585
15 mL tube	BD Biosciences	352096
50 mL tube	BD Biosciences	352070
Convertors Self-Seal Pouch 7 1/2” x 13”	Cardinal Health	92713
10 ml Wide Tip serological pipet	BD Biosciences	357504
10 ml serological pipet	BD Biosciences	357551
5 ml serological pipet	BD Biosciences	357543