Methodenartikel
* These authors contributed equally
Vasculaire calcificatie is een belangrijke voorspeller van en bijdrager aan hart- en vaatziekten bij mensen. Dit protocol beschrijft methoden voor het induceren van calcificatie van gekweekte primaire vasculaire gladde spiercellen en voor het kwantificeren van calcificatie en macrofagenlast in dierlijke aorta's met behulp van near-infrared fluorescentiebeeldvorming.
Hart- en vaatziekten zijn de belangrijkste oorzaak van morbiditeit en mortaliteit in de wereld. Atherosclerotische plaques, bestaande uit lipide-geladen macrofagen en verkalking, ontwikkelen zich in de kransslagaders, aortaklep, aorta en perifere geleider-slagaders en zijn kenmerkend voor hart- en vaatziekten. Bij mensen maakt beeldvorming met behulp van computertomografie de kwantificering van vasculaire verkalking mogelijk; de aanwezigheid van vasculaire verkalking is een sterke voorspeller van toekomstige cardiovasculaire gebeurtenissen. De ontwikkeling van nieuwe therapieën bij hart- en vaatziekten is cruciaal afhankelijk van het verbeteren van ons begrip van de onderliggende moleculaire mechanismen van atherosclerose. Het uitbreiden van onze kennis van atherosclerotische mechanismen is afhankelijk van muis- en cel-gebaseerde modellen. Hier wordt een methode beschreven voor het beeldvormen van aorta-verkalking en macrofaag-infiltratie met behulp van twee spectraal verschillende nabij-infrarode fluorescentiebeeldvormingssondes. Nabij-infrarode fluorescentiebeeldvorming maakt de ex vivo kwantificering van verkalking en macrofaag-accumulatie in de gehele aorta mogelijk en kan worden gebruikt om ons begrip van de mechanistische relatie tussen ontsteking en verkalking bij atherosclerose te verbeteren. Daarnaast wordt een methode beschreven voor het isoleren en kweken van vasculaire gladde spiercellen van de aorta van dieren en een protocol voor het induceren van verkalking in gekweekte gladde spiercellen van muizen-aorta's of van menselijke kransslagaders. Deze in vitro methode van modellering van vasculaire verkalking kan worden gebruikt om de signaalroutes te identificeren en te karakteriseren die waarschijnlijk belangrijk zijn voor de ontwikkeling van vaatziekten, in de hoop nieuwe doelen voor therapie te ontdekken.
Hart- en vaatziekten zijn de belangrijkste oorzaak van morbiditeit en mortaliteit in de wereld, waaronder de Verenigde Staten, waar het goed is voor meer dan 780.000 doden per jaar. 1 Coronaire verkalking en aorta verkalking zijn kenmerken van atherosclerose en dienen als sterke voorspellers van cardiovasculaire gebeurtenissen. 2- 4 Twee belangrijke types van vasculaire calcificatie zijn gemeld bij volwassenen: intima verkalking, geassocieerd met atherosclerose, en mediale (ook bekend als Monckeberg) verkalking, geassocieerd met chronische nierziekte en diabetes 5 intima verkalking optreedt in de setting van lipide-accumulatie en macr....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Alle studies met muizen werden uitgevoerd in strikte overeenstemming met de aanbevelingen in de Gids voor de Zorg en gebruik van proefdieren van de National Institutes of Health. Huisvesting en alle procedures waarin muizen in deze studie beschreven, werden goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Commissies van Massachusetts General Hospital (Subcommissie onderzoek Animal Care). Alle procedures werden uitgevoerd met zorg om het lijden te minimaliseren.
1. Bereiding van reagentia
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Aorta verkalking in MGP - / - en wild-type muizen werd gemeten met behulp van beeldvorming van calcium NIR fluorescentie. Geen calcium NIR signaal werd gedetecteerd in de aorta's van wild-type muizen, waaruit blijkt dat zij calcificatie (figuur 2). Een sterk calcium NIR signaal werd gedetecteerd in de aorta van MGP-deficiënte muizen, wat overeenkomt met geavanceerde vasculaire calcificatie. Weefselcoupes van aorta's van wild-type en MGP - / -
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Aderverkalking is een belangrijke risicofactor voor hart- en vaatziekten bij mensen en kunnen direct bijdragen aan de pathogenese van cardiovasculaire gebeurtenissen. 1,5,52 intima calciumafzetting in de dunne vezelige doppen van atherosclerose is voorgesteld om lokale biomechanische belasting bevorderen en zorgen plaquebreuk. 53,54 Mediale calcificatie effecten klinische resultaten door het verhogen van arteriële stijfheid, die cardiale hypertrofie kunnen veroorzaken en beïnvloeden de hartfunctie........
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Massachusetts General Hospital heeft octrooien aangevraagd met betrekking tot kleine molecuulremmers van BMP type I receptoren en de toepassing van ALK3-Fc voor de behandeling van atherosclerose en vasculaire calcificatie, en MD, PBY, KDB en RM kunnen recht hebben op royalty's.
Dit werk werd ondersteund door de Sarnoff Cardiovascular Research Foundation (MFB en TET), het Howard Hughes Medical Institute (TM), de Ladue Memorial Fellowship Award van Harvard Medical School (DKR), het START-Programma van de Faculteit Geneeskunde aan de RWTH Aachen (MD), de German Research Foundation (DE 1685/1-1, MD), het National Eye Institute (R01EY022746, ESB), de Leducq Foundation (Multidisciplinary Program to Elucidate the Role of Bone Morphogenetic Protein Signaling in the Pathogenesis of Pulmonary and Systemic Vascular Diseases, PBY, KDB en DBB), het National Institute of Arthritis and Musculoskeletal and Skin Diseases (R01AR057374, PBY), het National Inst....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 15 ml conische buis | Falcon | 352096 | |
| 30 G naald | BD | 305106 | |
| Alpha gladde spieractine antilichaam | Sigma | SAB2500963 | |
| Kamerschuifblok | Nunc Lab-Tek | 154461 | |
| Collageenase, Type 2 | Worthington | LS004176 | |
| Dexamethason | Sigma | D4902 | |
| Dulbecco's Gemodificeerd Arendsduinmedium | Life Technologies | 11965-084 | |
| Dulbecco's Fosfaatgebufferde Saline, zonder calcium | Gibco | 14190-144 | |
| Elastase | Sigma | E1250 | |
| Foetaal bovien serum | Gibco | 16000-044 | |
| Fulgenstang, fijn punt | Roboz | RS-4972 | |
| Fulgenstang, volledige curve gekarteld | Roboz | RS-5138 | |
| Formaline (10%) | Electron Microscopy Sciences | 15740 | |
| Hank's Evenwichtige Zout Oplossing | Gibco | 14025-092 | |
| Menselijke coronaire slagader gladde spiercellen | PromoCell | C-12511 | |
| Insulinespuit met naald | Terumo | SS30M2913 | |
| L-ascorbinezuur | Sigma | A-7506 | |
| Micro-dissectieveertang (13 mm) | Roboz | RS-5676 | |
| Micro-dissectieveertang (3 mm) | Roboz | RS-5610 | |
| NIR, cathepsine (ProSense-750EX) | Perkin Elmer | NEV10001EX | |
| NIR, osteogeen (OsteoSense-680EX) | Perkin Elmer | NEV10020EX | |
| Normale zoutoplossing | Hospira | 0409-4888-10 | |
| Nucleair fast rood | Sigma-Aldrich | N3020 | |
| Odyssey Imaging System | Li-Cor | Odyssey 3.0 | |
| Penicilline/Streptomycine | Corning | 30-001-CI | |
| Zilvernitraat (5%) | Ricca Chemical Company | 6828-16 | |
| Natriumfosfaat dibasisch heptahydraat | Sigma-Aldrich | S-9390 | |
| Natriumthiosulfaat | Sigma | S-1648 | |
| ß-glycerofosfaat dinatriumzout hydraat | Sigma | G9422 | |
| Weefselkweekfles, 25 cm2 | Falcon | 353108 | |
| Weefselkweekplaat (35 mm x 10 mm) | Falcon | 353001 | |
| Weefselkweekplaat, zes-wel | Falcon | 353046 | |
| Trypsine | Corning | 25-053-CI | |
| Buis voor knaagdieren | Kent Scientific | RSTR551 | |
| Vacuumgedreven filtratiesysteem | Millipore | SCGP00525 |
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken
Toestemming aanvragen