Name: Muis blaaswand Injection (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 48 s
Description: Leer een microchirurgische injectietechniek voor muizenblaaswand om cellen met precisie te implanteren. Deze methode verbetert de lokalisatie van celplaatsing voor kankerbiologie en stamcelonderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij dankbaar de steun van een Pilot subsidie ​​van de Stanford Pediatric Research Fund en K08DK087895-01 uit de NIDDK.

1. Muis blaaswand Injection Keuze van de muis stam, leeftijd en geslacht wordt bepaald door de experimentele behoeften. We maken gebruik van muizen tussen de 8 en 12 weken oud zijn, omdat dit een venster van immunologische volwassenheid voorafgaand aan de veroudering. Als algemene richtlijn, moet muizen komen op ten minste een week voorafgaand aan de experimentele manipulatie om stress geïnduceerde verstorende factoren te vermijden. <ol><li> Reinig de chirurgische tafel oppervlak met water en zeep. </li><li> Veeg de chirurgische tafel oppervlak met Cide gapt of antiseptische doekjes. </li><li> Voorafgaande autoclaaf schoon chirurgische instrumenten om te gebruiken in de chirurgie. </li><li> Daarnaast, steriliseren chirurgische instrumenten met hete kraal sterilisator onmiddellijk voorafgaand aan gebruik, maar ook tussen de dieren tijdens de operatie. </li><li> Schone 100 ul Hamilton spuiten en 29 of 30 gauge (1 / 2 inch lang) naalden door herhaalde aspiratie en injectie met absolute alcohol voor het eerste gebruik en aan het eind van de laatste chirurgische ingreep. </li><li> Was en Hamilton spuiten spoelen met gesteriliseerd fosfaat-gebufferde zoutoplossing tussen elk dier. </li><li> Verdoven muizen door ze te plaatsen in een isofluraan inductie kamer, met de isofluraan ingesteld tussen 2-5%. </li><li> Zodra algehele anesthesie is bereikt, verwijdert u de muis uit de kamer en plaats in de rugligging met een warme pad eronder voor het behoud van een normale lichaamstemperatuur. </li><li> Bereiken onderhoud anesthesie door het plaatsen van het dier snuit in een mondstuk met verdampen isofluraan (getitreerd van 1-3% als nodig is om geschikte anesthesie te onderhouden). </li><li> Scheer de buikhuid met tondeuse. </li><li> Gebruik een wegwerp, steriele chirurgische laken om de anus te dekken fecale besmetting te voorkomen tijdens de operatie. </li><li> Gebruik een seconde wegwerp, steriele chirurgische laken aan het chirurgische veld (onderbuik) te dekken. </li><li> Prep de buik met drie stukken van Betadine doordrenkte gaas. Herhaal deze stap drie keer. </li><li> Met behulp van een dissectiemicroscoop voor een vergroting, maak een lagere middellijn buikoperatie met een schaar. </li><li> Expose de blaas. </li><li> Als de blaas vol is, gedeeltelijk pak het uit door zachte neerwaartse druk op de koepel. </li><li> Injecteer de monsteroplossing (tot 50 uL), met behulp van een 29 of 30 gauge naald en spuit, in de wand van de blaas koepel (intramuraal injectie) met de schuine rand van de naald naar boven gericht. </li><li> Duw de zuiger van de spuit om de monsteroplossing te injecteren in de blaaswand. Een goed gelokaliseerde blaar is een indicatie van een succesvolle injectie van de cellen in de blaaswand. </li><li> Verwijder de spuit, sluit de incisie met wond clips en laat de muis te herstellen op een warming pad. </li></ol> 2. Representatieve resultaten: Een goed gelokaliseerde blaar die niet lekken en blijft stabiel in omvang is een indicatie van een succesvolle injectie van de cellen in de blaaswand (figuur 1). Histologische analyse kan worden uitgevoerd om de aanwezigheid van de geïnjecteerde cellen in de blaaswand te bevestigen. <img src="/files/ftp_upload/2523/2523fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. Voorbeeld van een succesvolle blaaswand injectie met Oostindische inkt ter illustratie. <img src="/files/ftp_upload/2523/2523fig2.jpg" alt="Figuur 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2. Schematische voorstelling van experimentele procedures.

<ol><li>Dinney, C. P., Fishbeck, R., Singh, R. K., Eve, B., Pathak, S., Brown, N., Xie, B., Fan, D., Bucana, C., Fidler, I. J., Killion, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Characterization+of+Metastatic+Variants+from+Human+Transitional+Cell+Carcinoma+Passaged+by+Orthotopic+Implantation+in+Athymic+Nude+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Urology%22%5BJournal%5D)">Isolation and Characterization of Metastatic Variants from Human Transitional Cell Carcinoma Passaged by Orthotopic Implantation in Athymic Nude Mice.</a> The Journal of Urology. 154, 1532-1538 (1995).</li>
<li>Singh, A. V., Franke, A. A., Blackburn, G. L., Zhou, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soy+Phytochemicals+Prevent+Orthotopic+Growth+and+Metastasis+of+Bladder+Cancer+in+Mice+by+Alterations+of+Cancer+Cell+Proliferation+and+Apoptosis+and+Tumor+Angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Soy Phytochemicals Prevent Orthotopic Growth and Metastasis of Bladder Cancer in Mice by Alterations of Cancer Cell Proliferation and Apoptosis and Tumor Angiogenesis.</a> Cancer Res. 66, 1851-1858 (2006).</li>
<li>Yanagiuchi, A., Miyake, H., Nomi, M., Takenaka, A., Fujisawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+the+Microenvironment+by+Growth+Factors+Regulates+the+In+Vivo+Growth+of+Skeletal+Myoblasts%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+International%22%5BJournal%5D)">Modulation of the Microenvironment by Growth Factors Regulates the In Vivo Growth of Skeletal Myoblasts.</a> BJU International. 103, 1569-1573 (2009).</li>
<li>Miyake, H., Hara, I., Yamanaka, K., Gohji, K., Arakawa, S., Kamidono, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overexpression+of+Bcl-2+Enhances+Metastatic+Potential+of+Human+Bladder+Cancer+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Overexpression of Bcl-2 Enhances Metastatic Potential of Human Bladder Cancer Cells.</a> British Journal of Cancer. 79, 1651-1656 (1999).</li>
<li>Chancellor, M. B., Yokoyama, T., Tirney, S., Mattes, C. E., Ozawa, H., Yoshimura, N., Groat, W. C. de, Huard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preliminary+Results+of+Myoblast+Injection+into+the+Urethra+and+Bladder+Wall%3A+a+Possible+method+for+the+Treatment+of+Stress+Urinary+Incontinence+and+Impaired+Detrusor+Contractility%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourol+Urodyn%22%5BJournal%5D)">Preliminary Results of Myoblast Injection into the Urethra and Bladder Wall: a Possible method for the Treatment of Stress Urinary Incontinence and Impaired Detrusor Contractility.</a> Neurourol Urodyn. 19, 279-287 (2000).</li>
<li>Dinney, C. P., Tanguay, S., Bucana, C. D., Eve, B. Y., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravesical+Liposomal+Muramyl+Tripeptide+Phosphatidylethanolamine+Treatment+of+Human+Bladder+Carcinoma+Growing+in+Nude+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Interferon+Cytokine+Res%22%5BJournal%5D)">Intravesical Liposomal Muramyl Tripeptide Phosphatidylethanolamine Treatment of Human Bladder Carcinoma Growing in Nude Mice.</a> J Interferon Cytokine Res. 15, 585-592 (1995).</li>
<li>Mohamedali, K. A., Kedary, D., Sweeney, P., Kamaty, A., Davisy, D. W., Evey, B. Y., Huangy, S., Thorpez, P. E., Dinney, C. P., Rosenblum, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Vascular-targeting+Fusion+toxin+VEGF121%2FrGel+Inhibits+the+Growth+of+Orthotopic+Human+Bladder+Carcinoma+Tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">The Vascular-targeting Fusion toxin VEGF121/rGel Inhibits the Growth of Orthotopic Human Bladder Carcinoma Tumors.</a> Neoplasia. 7, 912-920 (2005).</li>
<li>Slaton, J. W., Perrotte, P., Inoue, K., Dinney, C. P., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-%CE%B1-mediated+Down-Regulation+of+Angiogenesis-related+Genes+and+Therapy+of+Bladder+Cancer+Are+Dependent+on+Optimization+of+Biological+Dose+and+Schedule%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Interferon-α-mediated Down-Regulation of Angiogenesis-related Genes and Therapy of Bladder Cancer Are Dependent on Optimization of Biological Dose and Schedule.</a> Clinical Cancer Research. 5, 2726-2734 (1999).</li>
<li>Yokoyama, T., Huard, J., Pruchnic, R., Yoshimura, N., Qu, Z., Cao, B., De Groat, W. C., Kumon, H., Chancellor, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle-Derived+Cell+Transplantation+and+Differentiation+into+Lower+Urinary+Tract+Smooth+Muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Muscle-Derived Cell Transplantation and Differentiation into Lower Urinary Tract Smooth Muscle.</a> Urology. 57, 826-831 (2001).</li>
<li>Chan, E., Patel, A., Heston, W., Larchian, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Orthotopic+Models+for+Bladder+Cancer+Research%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+International%22%5BJournal%5D)">Mouse Orthotopic Models for Bladder Cancer Research.</a> BJU International. 104, 1286-1291 (1988).</li>
<li>Russell, P. J., Jelbart, M., Wills, E., Singh, S., Wass, J., Witherspoon, J., Raghavan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+characterization+of+a+new+human+bladder+cancer+cell+line+showing+features+of+squamous+and+glandular+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Establishment and characterization of a new human bladder cancer cell line showing features of squamous and glandular differentiation.</a> Int. J. Cancer. 41, 74-74 (1988).</li>
<li>Ahlering, T. E., Dubeau, L., Jones, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+in+vivo+model+to+study+invasion+and+metastasis+of+human+bladder+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A new in vivo model to study invasion and metastasis of human bladder carcinoma.</a> Cancer Res. 41, 6660-6660 (1987).</li>
<li>Heaney, J. A., Omellas, E. P., Daly, J. J., Lin, J. C., Rout, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+growth+of+human+bladder+cancer+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Urol%22%5BJournal%5D)">In vivo growth of human bladder cancer cell lines.</a> Invest. Urol. 15, 380-380 (1978).</li>
<li>Hadaschik, B., Black, P., Sea, J., Metwalli, A., Fazli, L., Dinney, C., Gleave, M., So, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+validated+mouse+model+for+orthotopic+bladder+cancer+using+transurethral+tumor+inoculation+and+bioluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+International%22%5BJournal%5D)">A validated mouse model for orthotopic bladder cancer using transurethral tumor inoculation and bioluminescence imaging.</a> BJU International. 100, 1377-1384 (2007).</li>
</ol>

Muis blaaswand inspuiting zorgt voor de inplanting van specifieke cellen in bepaalde delen van de blaaswand. Deze techniek heeft brede toepassingen voor muismodellen van blaaskanker, gladde spieren, en stamcel biologie. Per definitie, de muis blaaswand injectie vergemakkelijkt introductie van blaaskanker of stamcellen in een orthotope locatie, zodat hun groei en differentiatie kan worden bestudeerd in een fysiologisch relevante anatomische context. In feite, Dinney et al.. eerst beschreven deze techniek om orthotoop men...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogus nummer </td></tr><tr><td> Isofluraan (Aerrane) </td><td> Baxter </td><td> NDC 10019-773-60 </td></tr><tr><td> 29 of 30 gauge naalden </td><td> Hamilton </td><td> 7803-06 of 7803-07 </td></tr><tr><td> 100 microliter spuit </td><td> Hamilton </td><td> 7656-01 </td></tr></tbody></table>

muis blaaswand injection

Mouse Bladder Wall Injection

Muis blaaswand injectie is een nuttige techniek om orthotopically studeren blaas verschijnselen, zoals stamcelonderzoek, glad spierweefsel, en kanker biologie. Voordat u begint met injecties, moet het operatiegebied worden gereinigd met water en zeep en antiseptische oplossing. Chirurgische apparatuur moet vóór gebruik worden gesteriliseerd en tussen elk dier. Elke muis is geplaatst onder ingeademd isofluraan anesthesie (2-5% voor inductie, 1-3% voor onderhoud) en de blaas blootgesteld door het maken van een middellijn incisie in de buik met een schaar. Als de blaas vol is, is het gedeeltelijk gedecomprimeerd door zachte knijpen tussen twee vingers. De celsuspensie van belang is intramuraal geïnjecteerd in de wand van de blaas koepel met behulp van een 29 of 30 gauge naald en een cc of kleiner spuit. De wond wordt dan gesloten met behulp van clips wond en de muis om te herstellen op een warming pad. Blaaswand injectie is een delicate microchirurgische techniek die kan worden beheerst met de praktijk.

Muis blaaswand injectie is een nuttige benadering voor orthotopically studie blaas stamcellen en kanker biologie. Deze delicate microchirurgische methode kan worden beheerst met een zorgvuldige techniek en praktijk.

Muis blaaswand Injection

Injectie in de blaaswand van muizen is een nuttige techniek om blaasverschijnselen orthotoop te bestuderen, waaronder stamcelbiologie, gladde spierbiologie en kankerbiologie. ...

Het algemene doel van deze procedure is om cellen in gedefinieerde gebieden van de blaaswand in te brengen. Dit wordt bereikt door eerst een abdominale incisie te maken om de blaas bloot te leggen. De volgende stap van de procedure is het intramuraal inbrengen van de schuine punt van de naald.De laatste stap van de procedure is het indrukken van de zuiger van de spuit om de gewenste cellen in de blaaswand te injecteren. Een succesvolle implantatie van cellen wordt gekenmerkt door een goed gelokaliseerde bleb die geen vloeistof lekt en stabiel blijft in grootte. Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals transurethrale inoculatie van muizen met cellen, is dat men hiermee kan bepalen waar de cellen zich in de blaas zullen implanteren.Een visuele demonstratie van de spierinjectie is cruciaal, aangezien de injectietechniek moeilijk aan te leren is. Het kennen van de juiste hoek en de insteekpositie van de naald in de blaas is essentieel voor het succes van de techniek. Selecteer de leeftijd, het geslacht en het ras van de muizen op basis van de behoeften van het experiment.Muizen van 8 tot 12 weken oud worden gebruikt. Begin met het schoonmaken van het oppervlak van de operatietafel met zeep en water. Neem vervolgens het oppervlak van de operatietafel af met desinfectiedoekjes of antiseptische doekjes. Chirurgische instrumenten moeten vóór de operatie in een autoclaaf worden gesteriliseerd.Veeg de instrumenten vlak voor gebruik af met 70% ethanol en steriliseer deze opnieuw met een hot bead-sterilisator tussen individuele operaties door. Reinig een Hamilton-spuit van 100 µL die is voorzien van een naald van 30 gauge door herhaaldelijk absolute alcohol op te zuigen, gevolgd door gesteriliseerde fosfaatgebufferde zoutoplossing. Plaats een geanesthetiseerd dier in rugligging op een warmtekussen om behulp van een normale lichaamstemperatuur te behouden.Houd een voldoende narcose-niveau in stand door de snuit van het dier in een tuit met vervluchtigd isofluraan te plaatsen. Verwijder vervolgens het haar van de buikwand met een trimmer. Gebruik een steriel wegwerpoperatiedoek om de anus af te dekken om fecale contaminatie tijdens de operatie te voorkomen.Plaats een tweede chirurgisch laken over de onderbuik en creëer een chirurgisch venster. Steriliseer de operatieve plaats door herhaaldelijk Betadine en alcohol aan te brengen, waarbij een dissectiemicroscoop voor vergroting wordt gebruikt. Maak met een schaar een midline incisie in de onderbuik.Oefen lichte druk uit op de buik om de blaas bloot te leggen. Omdat de blaas gewoonlijk gedeeltelijk of volledig gevuld is, zal druk op de buik bij voorkeur andere organen opzij duwen, waardoor de blaas via de incisie naar buiten kan komen. Als de blaas vol is, oefen dan lichte neerwaartse druk uit op de koepel om deze gedeeltelijk te decomprimeren.Vul de steriele Hamilton-spuit met 50 µL van de monsteroplossing. Steek de naaldpunt met de schuine zijde naar boven in de wand van de blaas en injecteer de monsteroplossing. Een succesvolle injectie wordt gekenmerkt door een goed gelokaliseerde bleb die geen vloeistof lekt en een stabiele grootte behoudt.Sluit na de injectie de incisie met wondklemmen. Laat het dier herstellen op een warmtepad. Deze techniek kan in 10 tot 15 minuten worden voltooid als deze correct wordt uitgevoerd.Het succes kan worden bevestigd via histologische analyse van de blaas op opeenvolgende tijdstippen na injectie.

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Cystometry is een efficiënte techniek om de blaas functie van kleine dieren te...

Het gebruik van Cystometry in kleine knaagdieren: Een studie van de blaas Chemosensation

De oprichting van een orthotope blaas tumor model om anti-tumor effecten van intravesicaal geleverd Sarna en monitoring groei van de tumor door middel van ultrageluid en bioluminescente beeldvorming te evalueren.

Een orthotope Blaas Tumor Model en de evaluatie van Intravesicale Sarna behandeling

Source: O'Brien, V. P., et. al., Recurrent Escherichia coli Urinary Tract Infection Triggered by Gardnerella vaginalis Bladder Exposure in Mice. J. Vis. Exp. (2020)This video demonstrates the use of scanning electron microscopy to visualize bacterial colonization and host–pathogen interactions in the bladder epithelium of a pre-infected mouse model.

Preparation of Mouse Bladder Tissue for Visualization of Bacterial Infection

In this video, we describe the orthotopic transplantation of cultured bladder tumor organoids into the murine bladder to study the role of the organ environment on developing tumors.

Bladder Tumor Organoid Model: A Method for Orthotopic Transplantation of Bladder Organoids into Recipient Murine Bladder

In this video, we describe the intravesical procedure of delivering cancer cells into the bladder of a mouse model. This procedure helps generate an orthotopic bladder tumor model that can be used to develop therapeutic strategies.

Modeling Orthotopic Bladder Tumor in Mouse Model: A Procedure for Intravesical Administration of Cancer Cells into Murine Bladder

De gevestigde techniek om primaire invasieve orthotoop blaaskanker xenotransplantaten te enten vereist laparotomie en mobilisatie van de blaas. Deze procedure toebrengt significante morbiditeit op de muizen, technisch uitdagend en tijdrovend. Daarom hebben wij een hoge precisie, percutane benadering gebruik te maken van echografie begeleiding.

Minimaal Invasieve Oprichting van Muriene Orthotope Blaas Xenografts

Ongeveer 3-8.000.000 mensen in de Verenigde Staten heeft last van interstitiële cystitis / pijn in de blaas syndroom (IC / BPS), een invaliderende aandoening die gekenmerkt wordt voor een deel door bekkenpijn. Om zenuwstelsel bijdragen aan de toestand te bestuderen, is een fysiologisch model urineblaas pijn in muizen en ratten.

Urineblaas Uitzetting Evoked visceromotorische Responses als een model voor de pijn in de blaas in Muizen

Dit protocol beschrijft de generatie van muizen orthotope blaastumoren bij vrouwelijke C57BL / 6J muizen en de monitoring van tumorgroei.

Een muizen orthotope Blaas Tumor Model en Tumor Detection System

Transuretrale instillatietest is een uitdagende procedure en is niet goed beschreven in de literatuur. Het doel van dit manuscript is om een techniek voor transuretrale inbrengen van een katheter voor intravesicale levering van vloeistoffen met werkzame stoffen in de urineblaas en/of de prostaat bij volwassen mannelijke muizen te beschrijven.

Transuretrale Instillation Procedure in volwassen mannelijke muis

Beschrijven we een nieuwe methode voor de levering van DNA plasmide in de cellen van de urothelial van muis blaas in vivo via de urinebuis catheterisatie en electroporation. Het biedt een snelle en gemakkelijke manier voor het genereren van autochtone Muismodellen van ziekten van de blaas.

Nieuwe methode van plasmide DNA levering aan muis blaas Urothelium door Electroporation

Leer een microchirurgische injectietechniek voor muizenblaaswand om cellen met precisie te implanteren. Deze methode verbetert de lokalisatie van celplaatsing voor kankerbiologie en stamcelonderzoek.

Muis blaaswand Injection

Meer video's verkennen